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UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
PLAN DE ESTUDIOS DE INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ASIGNATURA: BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

ELABORADO POR: PAOLA ROMÁN Y ZAIDA CONTRERAS

GUIA No. 2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

1. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos, son seres vivos dotados de individualidad para desarrollar las funciones
vitales como crecimiento, reproducción, alimentación y excreción; pero para ello requieren de
condiciones favorables para llevar a cabo todas estas funciones.

Con el fin de utilizar los diversos microorganismos para estudio en el laboratorio de microbiología,
es importante darle a éstos seres vivos las condiciones necesarias para ello. Para esto se
requieren los medios de cultivo.

2. OBJETIVOS
- Preparar los diferentes medios de cultivo, siguiendo correctamente la técnica para que el medio
sea de óptima calidad.
- Aprender a conservar adecuadamente los diferentes medios de cultivo.
- Dar a conocer la importancia y fundamentos de los medios de cultivo como material
indispensable a utilizar en el laboratorio de microbiología.

3. FUNDAMENTO

Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios
para permitir (bajo condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento de virus,
microorganismos (bacterias, hongos y protozoos), células, tejidos vegetales o incluso plantas.

Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente
se presentan deshidratados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al
prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido.

Una vez que el medio haya sido preparado, puede ser inoculado (es decir se le añaden
microorganismos) y a continuación incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento
microbiano.

El crecimiento de los microorganismos es el cultivo y un cultivo axénico o puro contiene un único

tipo de microorganismos.
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3.1 COMPOSICIÓN

Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.
Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales
inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras
del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detecta, por
ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de
otras.
El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriológicos. Se disuelve
completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C.

3.2 PROPIEDADES
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Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo:

a. Consistencia:
Líquidos: Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación.
Semisólidos: contienen 0,5% de agar. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias.
(presencia o ausencia de flagelo)
Sólidos: contienen 1,5% a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las
células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias
permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo. Las placas que contengan más de un
tipo de colonia no se consideran cultivo puro. Las placas también se utilizan para la determinación
de células viables (recuento de placas).

b. Composición:
Definidos y sintéticos: se conoce la composición exacta del medio. Los medios mínimos son
medios definidos que únicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios
para crecer, pero no para desarrollarse óptimamente. Un ejemplo de éstos son los medios
deshidratados que se consiguen en el comercio en forma de polvo o granulado.

Complejos o naturales: Son aquellos empleados para el cultivo de microorganismos que se

encuentran en la naturaleza. No se conoce la composición exacta del medio. Ejemplo: sangre,
leche, extracto de levaduras o de carne.

c. Función:
Medios selectivos: Son aquellos que poseen uno o más componentes añadidos, los cuales
inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promoverán
el crecimiento de las especies deseadas. Se puede ajustar las condiciones físicas de un medio
de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para los organismos de interés.
Medios diferenciales: permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con
base en algún a característica observable en su patrón de crecimiento en el medio, ya sea por
producción de algún pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o
por halos de degradación de algún componente en el medio de cultivo.
Medios de enriquecimiento: Contienen algún componente que permite el crecimiento de cierto
tipo específico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras.
Medios enriquecidos: se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran número
de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biológicos poco usuales como
sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc.
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4. MATERIALES DE LABORATORIO

Para la preparación de los medios:

✓ Cajas de Petri
✓ Erlenmeyer
✓ Autoclave
✓ Agua destilada
✓ Medios de cultivo
✓ Tubos de ensayo
✓ Balanza
✓ Espátula
✓ 1 bandeja de pasta para transporte de material (será suministrada en el laboratorio)

MATERIALES NECESARIOS PARA LAS PRÁCTICAS

- Para cada laboratorio cada estudiante debe traer:

• Bata manga larga
• 2 pares de guantes
• Gafas de protección
• Cofia o gorro

- En grupo, los estudiantes deben llevar al laboratorio:

• Asa recta
• Asa redonda
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Alcohol de 90° entre 50 – 100 ml
• Alcohol de 70° en atomizador entre 50 – 100 ml
• 500 ml de hipoclorito ya preparado al 0,1%
• Jabón detergente
• Jabón antibacterial para lavarse las manos
• 1 esponja
• 1 rollo de Scott de cocina
• 1 sharpie
• Cinta tirrow de 1 ½ cm
• 1 rollos envoplast: uno partido 4 veces y el otro entero
• Fósforos o encendedor

- Todo el grupo debe acordar traer:

• 1 paquete de Bolsas de descarte de 3 Litros (un paquete por el grupo A y un paquete por el
grupo B)

5. PROCEDIMIENTO

a. Para la preparación de medios de cultivo, siga las instrucciones dadas por la etiqueta en cada uno de
los envases del medio respectivo.
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b. Proceder a pesar la cantidad necesaria en la balanza y agregarla en los erlenmeyer correspondientes

c. Agregar agua desmineralizada
d. Medirle el pH al medio líquido.
e. Para los medios sólidos, calentar en la estufa hasta que se disuelva el agar; dejar el medio hasta que
hierva y retirar del fuego.
f. Tapar el erlenmeyer con papel y cinta de enmascarar High pressure y marcar.
g. Llevarlos a la autoclave
h. Sirva los medios según corresponda.

Precauciones:
Si los medios preparados no son utilizados en forma inmediata, es preferible prepararlos en tubos de
ensayo grandes (20-30 ml) o en erlenmeyer de 125 ml a razón de 100 ml por recipiente. De ésta manera,
su desecación será más lenta.
Antes de ser utilizados deben ser licuados en baño maría, después inclinados en los tubos o repartidos
en las cajas de Petri. En éste último caso, las cajas son dispersadas solamente cuando el medio está a
una temperatura de 45°C aproximadamente.
Dispersar un medio demasiado caliente, provoca abundante condensación en la tapa de la caja.

Cálculos:

Los cálculos para preparar medio sólido se hacen teniendo en cuenta:

• Tubo de 16 x 150 = 6 ml de medio

• Tubo de 13 x 100 = 3 ml de medio
• Caja de Petri grande: 15 – 20 ml de medio
• Caja de Petri pequeña: 7 ml de medio

6. CUESTIONARIO

a. Elabore un cuadro que comprenda las siguientes característica para cada uno de los medios que va
a trabajar (Mac Conkey, Agar Nutritivo):

• Medio
• Composición (incluyendo inhibidores e indicadores)
• Aporte nutricional
• Microorganismo que comúnmente se siembran
• Interpretación y lectura

Anexe otros medios a los que ud preparó en su clase (Agar sangre, EMB, Agar TSI, Agar citrato de
Simmons, Rojo metilo-Voges proskawer, Urea de Christensen)

b. ¿Qué medios de cultivo utilizan normalmente para el cultivo de las bacterias de interés?.

c. Teniendo en cuenta los tipos de medios de cultivo, seleccione mínimo 5 e investigue la composición
de cada uno de ellos, clasifíquelos y realice dibujos o tome fotos de cómo se ven cuando se
encuentran listos para inoculación de microorganismos.
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BIBLIOGRAFIA

INSTITUTO DE ECOLOGÍA. UNAM. Práctica 4: Preparación de medios de cultivo [En Línea]

http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcariontes/Alejand
ra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20Medios%20de%20cultivo.pdf
ORTEGA, Gladys y col. Manual de Microbiología. Universidad Industrial de Santander. 4ta edición. 1985.
p. 16 – 26
SANCHEZ, Maria de Jesús. Microbiología de Suelos: Técnicas, métodos y medios de cultivo. Universidad
Nacional Autónoma de México. 2004
http://enlinea.zaragoza.unam.mx/didacta/biologia/micorrizas/Microbiol.pdf
DICSA. Medios de Cultivo para los Análisis de Aguas. [En Línea] <
http://www.dicsa.es/upload/archivos/metodoagua_2007.pdf>
INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL TRABAJO. NTP 299: Método para el
recuento de bacterias y hongos en aire. [En Línea]
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/NTP/Ficheros/201a300/nt
p_299.pdf
RODRIGUEZ VALERA, Francisco. Prácticas de Microbiología. Universidad Miguel Hernandez. España [En
Línea] http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y GENÉTICA. Prácticas de Microbiología y Genética.
Universidad de Salamanca. [En Linea] http://imb.usal.es/Practicas2/P2/Practicas2.pdf