PRACTICA 1:

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS PARA MICROBIOLOGIA.

INGENIERA QUMICA

M. en E.R. LUZ CARMEN CASTILLO MARTINEZ

DANIELA RUBIO HERRERA

QUI01SV-14
OBJETIVO:

26/05/2015

El alumno aprender la preparacin de los diferentes medios de cultivo

INTRODUCCIN
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que
las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de
oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las
bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los
lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de
cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros
ingredientes. El Agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparacin de medios de cultivo. En los diferentes medios de cultivo se
encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono,
suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos
motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para
detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a
identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el
crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Por su aspecto fsico.
Los medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su aspecto en:
Lquidos, Semislidos, Slidos. Y por su uso en: I.- Medios de cultivos bsicos II:
Medios de cultivos especiales como: mejorados, selectivos, diferenciales, de
transporte.
MATERIAL

Cajas petri estriles

Potencimetro
Tubos de ensaye con tapn
Buffer pH 4, 7, 10
2 Mecheros
2 matraz erlenmeyer (250ml)
1 probeta de 100ml
Balanza granataria
Parrilla
Esptula
Autoclave
Cinta testigo
2 Cajas petri

2 Tubos de ensayo medianos

1 Pipeta graduada de 10ml.
1 Pipeta graduada de 1ml.
1 Probeta de 100ml.
1 Frasco de dilucin
1 Balanza Granatara

REACTIVOS

Agua destilada
Sal y manitol
Agar MIO, TSI
Caldo lactosado
Agar Nutritivo
Agar Salmonella o TCBS}
Caldo de infusin cerebro corazn
Algodn, papel manila.
Solucin de hipoclorito de sodio al 2 ppm
Solucin salina al 0.9%

PROCEDIMIENTO
1) Leer cuidadosamente la etiqueta en la preparacin del medio de cultivo.
2) Hacer una relacin de gr. de acuerdo a los ml de medio
3) Colocar en el matraz EM y se la mitad de agua destilada, de acuerdo a los ml
que sean cada tipo de medio.
4) Pesar el medio de cultivo, vaciar en el matraz, agitar vigorosamente y despus
agregar la otra parte del agua destilada, seguir mezclando.
5) Colocar el medio (si as lo indica la etiqueta) a la parrilla a calentar a ebullicin;
se quita de la parrilla cuando comienza a hervir y se deja enfriar un poco, para
medir pH.
6) Tapar etiquetar, pegar con cinta testigo.
7) Introducir en el autoclave el material por 15Lb/ 15 min.
Sacar de la autoclave y se hace el vaciado respectivo si es necesario.
8) Se dejan enfriar y se colocan invertidas en bolsas de plstico, etiquetar
correctamente y se guardar en refrigeracin.
9) Anotar en la bitcora de medios de cultivo.

PROCEDIMIENTO GENERAL.

1) Leer
cuidadosamente la
etiqueta en la
preparacin del
medio de cultivo.

2) Hacer una relacin de

gr. de acuerdo a los ml de
medio

3) Colocar en el matraz
EM y se agrega la mitad
de agua destilada, de
acuerdo a los ml que sean
cada tipo de medio.

4) Pesar el medio de
cultivo, vaciar en el
matraz, agitar
vigorosamente y despus
agregar la otra parte del
agua destilada, seguir
mezclando

5) Colocar el medio (si as

lo indica la etiqueta) a la
parrilla a calentar a
ebullicin; se quita de la
parrilla cuando comienza
a hervir y se deja enfriar
un poco, para medir pH.

6) Tapar etiquetar, pegar

con cinta testigo.

7) Introducir en el
autoclave el material por
15Lb/ 15 min.

8) Se dejan enfriar y se
colocan invertidas en
bolsas de plstico,
etiquetar correctamente y
se guardar en
refrigeracin.

Sacar de la autoclave y se
hace el vaciado respectivo
si es necesario.

9) Anotar en la bitcora de
medios de cultivo.

 Se tomarn 2.5 ml del matraz Erlenmeyer y se colocarn en tubos de

ensayo en forma de bisel y se dejaran enfriar, posteriormente se llevar a
refrigeracin para su mantenimiento y su mas adelante.

Preparacin
en los tubos

Esterilizacin
Ya finallizado la medicin del PH se sella con su capuchon adecuado y se
le coloca la cinta testigo y se lleva a la autoclave para esterilizacin.

Se coloca una pequea muestra de agar y se efria un poco para q no dae Medicin de
PH
el electrodo
En este paso es importante cuidar el PH el cual varia de 6.5 -7.0
Si no entra en el rango ajustar
(PH= 6.65)

Se aaden 50 ml de agua destilada a un matraz Erlenmeyer de 250 ml se

aade el agar y enseguida se le aaden los 50 ml faltantes
Se pone a calentamiento con constante agitacion hasta que empieze a
hervir

Preparacin

Clculos
Se debe calcular los gramos que se utilizaran para 100 ml
se utilizaron 3.33 g ya que son por cada 1000 ml son 33.3 g

AGAR
Se debe de leer cuidadosamente las instrucciones de uso
Agar LISINA Y HIERRO

RESULTADOS

 En un matraz Erlenmeyer se colocan 100 ml de la solucin, se

coloca su capucha y se le pone cinta testigo.
Posteriormente se colocaran en la autoclave para su posterior
esterilizacin

En un matraz Erlenmeyer se colocan 600 ml de agua destilidad y se

le agregan 5.54 g de solucin.
Se reparte la solucin.

Para preparar una solucion al 0.9% tommos como factor de

disolucion 100 ml.
Se obtuvo para una solucion al 0.9% se debe de utilizar 0.9 g por
cada 100 ml.
Se preparan 6 soluciones de 100 ml por lo cual se utilizaran 5.54 g
para 600 ml.

Esterilizacin

Preparacin

Clculos

SOLUCIN
SALINA AL 0.9%
Se debe de leer cuidadosamente las instrucciones para la
preparacin de la solucin

CUESTIONARIO
1.- Qu norma mexicana nos indica el procedimiento para la realizacin de
medios de cultivo?
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-065-SSA1-1993, QUE ESTABLECE LAS
ESPECIFICACIONES SANITARIAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.
GENERALIDADES.
2.- Qu pasa si el medio de cultivo se excede en el calentamiento?
Un fenmeno comn del sobrecalentamiento es la reaccin de Maillard, que
causa una decoloracin del medio y prdida de la calidad nutricional del
medio. Esta reaccin es causada normalmente por la reduccin de los
azcares que interactan con los aminocidos procedentes de las protenas.
En estos casos los carbohidratos deben ser esterilizados por separado.
3.- Cuntos tipos de medio de cultivo existen menciona un ejemplo de cada uno
de ellos?
Por su aspecto fsico, los medios de cultivo preparados pueden ser:

Medios lquidos.

Se emplean fundamentalmente para:

- Cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien
la produccin de metabolitos especficos.
- Estimular y promover la seleccin de algn o algunos microorganismos e impedir
que otros se multipliquen.
- Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioqumicas.
(CALDOS NUTRITIVOS)

Medios semislidos.

- Se utilizan para identificaciones bioqumicas y averiguar si el germen estudiado

es mvil. Los medios semislidos tienen una consistencia blanda.

Medios slidos.

- Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. Los medios

slidos constituyen la mayor parte de los medios de cultivo que se emplean en
Microbiologa. (AGARES)

Por su uso, se clasifican en:

Medios selectivos.

Son medios que contienen sustancias que impiden el desarrollo de algunos

microorganismos, pero en una flora mixta permiten el aislamiento y recuperacin
del germen o grupo de grmenes de inters. (AGAR CON SANGRE Y BILIS AL
40%)

Medios selectivos de enriquecimiento.

Son medios lquidos que estimulan la multiplicacin de algn germen determinado

e impiden o inhiben la reproduccin de otros. (AGAR DE LOWENSTEN-JENSEN)

Medios diferenciales.

Son aquellos que contienen indicadores de cido base, redox o sustancias que
detectan cambios en el medio o en las caractersticas tpicas de las colonias.
AGAR EMB

Medios de transporte.

Sirven para transportar los especmenes que contienen a los microorganismos, del
sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el estudio.

Estos medios impiden que se altere la proporcin original de la flora

microbiana en los especmenes. (VENKAT-RAMAKRISHNAN (VR) MEDIO
PARA EL V. CHOLERAE.)

4.- Cul es la diferencia entre un medio lquido y un slido?

Slido contiene agar-agar este constituyen la mayor parte de los medios de
cultivo que se emplean en la microbiologa.
Lquidos son Sin agar- agar y se emplean fundamentalmente para cultivar
los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien la
produccin de metabolitos especficos, estimular y promover la seleccin de
algn microorganismo.
5.- Defina que es un medio de cultivo.
Conjunto de nutrientes con determinadas condiciones ambientales que
permiten que los microorganismos crezcan y se reproduzcan. Aportan

carbn y nitrgeno y elementos minerales, factores decrecimiento, agua y

pH adecuado.
6.- Qu sucede si el medio est muy fro y se desea vaciar?
El medio se solidificar en el recipiente que est contenido y no se podr
verter ya sea en nuestra caja Petri o en nuestros tubos de ensaye.
7.- Diferencie entre los trminos: Desarrollo y Crecimiento.
El crecimiento se define como el aumento en el numero y tamaos de cada
una de las celulas que conforman el organismo y por lo tanto incrementan la
masa
del
ser
viviente.
El desarrollo se define como la adquisicion de funciones con aumento en la
complejidad bioquimica (reacciones quimicas que se dan en el interior del
organismo) y fisiologica a traves del tiempo; proceso mediante el cual el
ovulo fecundado se transforma en embrion y mas adelante en un organismo
maduro.
OBSERVACIONES
Al calentar el agar debidos de tener mucho cuidado ya que al empezar a hervir,
generaba burbujas y esto nos hara que de un lapso rpido se tirara el agar
Nuestro pH quedo justo en la tolerancia permisible de nuestro AGAR LYA.
CONCLUSIONES

Daniela Rubio Herrera

Logramos cumplir el objetivo de la prctica ya que logramos preparar nuestros
medios de cultivos sin dificultad. Logramos clasificar que tipo de medio de cultivos
eran por su preparacin e igualmente la cantidad requerida para cada uno de
ellos.
Identificamos los puntos crticos en la preparacin de los medios los cuales eran la
correcta forma de hacer los clculos y medir el pH que es primordial para el
desarrollo adecuado de nuestras bacterias. Al igual que es importante su
esterilizacin para crear el ambiente correcto. Debemos de cuidar el pH metro el
cual es muy importante calibrar y evitar colocarlo en sustancias calientes.

MSD

Bata blanca
Guantes de ltex
Cubre bocas
Zapatos de seguridad
Lentes de seguridad

BIBLIOGRAFIA
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/065ssa13.html
http://www.condalab.com/uploads/media/Instrucciones_de_uso_marcado_CE_03.p
df
http://facultadsalud.unicauca.edu.co/Documentos2010/DptoMedInt/Tencion_de_gr
am.pdf
Vera Garca, Introduccin a la Microbiologa, 2da edicin, Editorial EUNED, 2004.