Preparación de Medios de Cultivo

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Un medio de cultivo constituye el conjunto de nutrientes indispensables para el

crecimiento de un microorganismo. La composición precisa dependerá de la especie
que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente
entre microorganismos. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales  y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. Además del
medio de cultivo, se debe tomar en cuenta otras condiciones como el pH, temperatura
de incubación, presencia de oxígeno, etc.

Componentes de los medios de Cultivo:

Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos (hidratos

de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, Mg, S,
etc)

Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-agar),

tampones, indicador de pH, etc.

Existen además los medios sintéticos que pueden prepararse a partir de sus

componentes individuales, o se pueden adquirir comercialmente como medios
deshidratados a los que solamente hay que añadir agua. El fabricante indica la
composición, la caducidad,  y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e
incluso como debe esterilizarse.

 Procedimiento de Preparación:
 Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se
parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados.
Siguiendo las instrucciones del fabricante, añadir la cantidad de agua adecuada
para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si el medio contiene
un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado hasta la
ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una completa
disolución del agar (medios sólidos y semisólidos); para medios líquidos no es
necesario calentar, únicamente se agita la mezcla hasta la completa disolución
de la misma.

Una vez disuelto el medio se debe esterilizar en autoclave a (1210C) durante 15-20
minutos para evitar el crecimiento de contaminantes. Una vez estéril repartir en placas
de Petri estériles y dejar en reposo para que solidifique.

Medios líquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a razón de unos
2-4 ml por tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar en autoclave.

Criterios que debe satisfacer el medio de cultivo.

1. Debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo específico

que se desea desarrollar.

2. Debe contener humedad suficiente.

3. pH ajustado de manera apropiada.

4. Concentración conveniente de oxígeno, y en ciertos casos ausente por

completo (esto depende de los requerimiento del microorganismo).

5. El medio que se va a sembrar debe ser estéril, es decir, en un principio no

debe contener microorganismos viables. El medio de cultivo sembrado debe
incubarse a la temperatura correcta.

6. Cuando se desea que las bacterias se desarrollen sobre un medio solido se

agrega un agente solidificante como el agar, que consiste en un polisacárido
complejo proveniente de un alga marina que se utiliza desde hace mucho
tiempo como espesante de alimentos como jalea y helados.     

En el siguiente video podrán observar algunas recomendaciones generales

para la preparación de medios de cultivo. El video ha sido tomado del siguiente
URL: https://www.youtube.com/watch?v=YGoPu0cn9ms&t=212s

Formulaciòn:
Además de las características de interés de un microorganismo encontradas a nivel de
laboratorio previo a su formulación, se deben satisfacer una serie de criterios. El primero de
ellos es su aislamiento en cultivos puros, correcta identificación, facilidad para multiplicación y
conservación, no tener efectos adversos sobre plantas, animales o humanos, etc. Una vez que
se han satisfecho estas características, el siguiente paso es hacer ensayos in situ para
determinar si el microorganismo es capaz de producir los mis mos resultados en el sitio de
interés que los observados a nivel de laboratorio.

En general, los microorganismos con potencial industrial se pueden formular de

distintas formas que incluyen preparaciones sólidas y líquidas. La formulación incluye
el uso de materiales que funcionan como excipientes para incrementar la sobrevivencia
por largos periodos de tiempo y que además faciliten su aplicación.

Ejemplos de formulaciones sólidas incluyen: polvos mojables, granulados, tabletas,

cápsulas de alginato, etc. Ejemplos de formulaciones líquidas incluyen: suspensiones
acuosas, suspensiones emulsificantes y no emulsificantes, etc.

Un ejemplo de microorganismo con un amplio uso en la agricultura es la bacteria

Bacillus thuringiensis, capaz de producir una toxina con propiedades insecticidas por lo
cual se usa como una alternativa biológica al uso de plaguicidas. Ésta bacteria tiene la
capacidad de producir endosporas que son estructuras capaces de resistir un amplio
fango de condiciones adversas, incluyendo altas temperaturas y radiación. Una vez que 
las esporas de B. thurigiensis encuentran condiciones favorables para su desarrollo, se
reactiva rápidamente a una forma vegetativa.

En la siguiente figura se pueden observar varias presentaciones de distintos

microorganismos comercializados con aplicación en la agricultura.