UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE AGRONOMÍA

ESCUELA PROFESIONAL DE AGRONOMÍA

PRÁCTICA Nº 3 Y 4

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Y MÉTODOS DE SIEMBRA

INTEGRANTES:
 Huaringa Valderrama Josue
 Guamuro Diaz Osmer Jhon
 Flores Gonzales Teddy
 Garcia Tapullima Gabriel
 Diaz Vilcas Arnaldo
 Chamba Godoy Juan

DOCENTE: Luis Alberto Sánchez Romero

CURSO: Microbiología Vegetal

Tingo María – 2023

 I. INTRODUCCIÓN
Se entiende por medios de cultivos a los alimentos o nutrientes en el que crecen los
microorganismos, en este caso bacterias. Para conseguir un medio de cultivo óptimo es
necesario tener condiciones adecuadas de temperatura, grados de humedad, presión de oxígeno,
grados de acidez o alcalinidad. Debe tener como mínimo carbono, hidrógeno, oxígeno y sales
inorgánicas.

Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo a su consistencia en líquidos,

sólidos y semisólidos, y según su composición nutricional en enriquecidos, de
enriquecimiento, sintéticos, generales, entre otros. Los medios de cultivos, además deben de
tener ciertos requisitos o condiciones para poder permitirle a los microorganismos su desarrollo,
de ahí que la constitución de estos debe tener los suficientes nutrientes y sustratos que le brinden
condiciones para realizar sus funciones metabólicas. Las técnicas de cultivos bacterianos, nos
permiten aislar un tipo de bacteria específico de una fuente natural, incrementar su número de
poblaciones o mantener en condiciones estables el cultivo, así como cuantificar el número de
bacterias que se encuentran en el material de estudio.

II. OBJETIVOS
 Conocer su utilidad y función de los medios de cultivo

 Aprender a preparar medios de cultivo

 Comprender y conocer los procesos de los métodos de siembras sobre medios de cultivo

 Analizar el desarrollo y crecimiento de microorganismos en todas las siembras

realizadas.
 Diferenciar los distintos medios de cultivo de acuerdo con su consistencia y función.
 Reconocer y evitar la contaminación tanto de los medios de cultivos como de los demás
elementos utilizados en el laboratorio de microbiología.
III. REVISIÓN LITERARIA
3.1 Medios de Cultivo

Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones

físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales
en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados
obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo
que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un
medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el
agar, la gelatina o la sílicagel (Hernández 2006).

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus

constituyentes en:

Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal

o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras
sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes
de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición química
definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigación. De
acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un

tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de microorganismos de ese
tipo. Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los
microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar.

Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser

medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.

Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados

de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo de sustancia con
actividad antimicrobiana. Permiten revelar características fisiológicas de los microorganismos.
 3.1.1 Medios de cultivo rehidratados:

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus
constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente
(medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo
deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad
de obtener resultados (Aldana 2017).

Para su preparación se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

 Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que

suministren productos de calidad.
 Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y
fisicoquímica adecuada.
 Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o
desmineralizada.
 Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización. Nunca se
deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.

3.1.2 almacenamiento de los medios de cultivo

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15
y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca
de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor.

Los medios de cultivo deshidratados son higroscópicos. Cuando los envases de estos
medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaución de
cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de
humedad. La absorción de agua produce cambios de pH, formación de grumos, decoloraciones
del polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios
químicos o estar contaminados.

Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a
temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos
mayores a 12 -15ºC. Sin embargo, almacenados bajo refrigeración entre 2 y 8°C se prolonga la
vida útil de los mismos, (nunca por debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los
medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación
y cuando se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de papel
(Rodríguez 2009)

3.3 Tipos de medios de siembra

Líquidos (caldos): No contiene ningún agente gelificante, por lo que los microorganismos
crecen por todo el medio. El crecimiento en este tipo de medios es más rápido puesto que la
movilidad permite acceder de una forma más fácil a los nutrientes.

Sólidos: Tienen una proporción de agar de, aproximadamente, el 1,5%. El crecimiento se

desarrolla en la superficie del medio. Estos medios pueden depositarse en placas de Petri o en
tubos de ensayo.

Semisólidos: Son aquellos que contienen una proporción de agar inferior al 0,5%. Se utilizan
para pruebas bioquímicas y de movilidad.

3.4 Tipos de métodos de siembra

Sembrado en tubo:
Sembrado de caldo, usamos el método de enjuague, tomando el aza bacteriológica para tomar
las bacterias, luego introducimos en el caldo, movemos ligeramente para asegurar el sembrado,
retiramos y conservamos.

Figura 1: Siembra en tubo

Sembrado plano inclinado, usamos el método de estrías, usamos el aza bacteriológica en punta
y tomamos las bacterias e introducimos en el borde de la parte más baja y esparcimos todo
subiendo de un lado a otro, retiramos y conservamos.
 Figura 2: Proceso de siembra

Sembrado de pico de flauta, usamos el método de estrías y puntura, usamos el aza bacteriológica
en punta y tomamos las bacterias e introducimos hasta la parte media del tubo de ensayo, luego
sacamos y en la parte superior hacemos movimientos de un lado a otro, retiramos y
conservamos.

Figura 3: Siembra en tubo con agar inclinado

Sembrado en columna, usamos el método de puntura, usamos el aza bacteriológica en punta y
tomamos las bacterias, introducimos hasta la mitad del tubo de ensayo y sacamos, retiramos y
conservamos.
Figura 4: Siembra en columna
 Sembrado en placa:
Para este sembrado, usamos el método de estrías y agotamiento, el aza bacteriológica,
tomamos las bacterias y ponemos la gota en un extremo de la placa Petri y esparcimos con el
de un lado a otro, rotamos la placa mientras vamos esparciendo hasta completar por todos lados,
retiramos y conservamos.

Figura 5: Siembra en placas de medios de cultivo

IV. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1. Muestra y Equipos
 Matras de 300ml
 Tubos de ensayo
 Asas bacteriológicas
 Agar Cristina – Lactosa electrolito (CLED)
 Refrigerador
 Incubadora
 Olla a presión
 Balanza analítica

4.2. Metodología

4.2.1. Preparación de medio de cultivo

Paso 1
Primero procedimos a calcular la cantidad adecuada del agar a utilizar para lo cual se hizo con
una regla de tres simple de la siguiente manera:

El envase indicaba una relación de 36g/1L, como nos pidieron preparar una solución de 100ml
entonces:

149.5𝑔 ⟶ 1000𝑚𝑙

𝑥 ⟶ 200𝑚𝑙

𝒙 = 𝟐𝟗. 𝟗𝒈 de Agar para Estafilococos que se utilizó para preparar el medio de cultivo

Paso 2
Procedimos a pesar el agar, para lo cual tuvimos que tarar la balanza en 0.00 gramos, después
pusimos un papel encima y se agregó 29.9 gramos del agar.

Paso 3
Se procedió a echar el agar ya pesado en un matraz de 300mL

Paso 4
En el matraz con el agar se echó 200 ml de agua destilada.
Paso 5
Posteriormente pusimos el matraz en una olla a presión con agua ya calentada, y procedimos a
remover la solución con una pipeta hasta disolver todos los gránulos de la muestra.

Paso 6
Finalmente después de remover bien la solución, procedimos a tapar el matraz con un tapón de
algodón y lo pusimos en un refrigerador hasta la próxima práctica.

4.2.2. Métodos de Siembra de microorganismos

A. Siembra en tubos de ensayo

Tubo 1
Se esteriliza el asa bacteriana en punta de anillo con un mechero, luego se procede a sacar la
cepa del tubo de ensayo con el asa de manera suave, para así poder sembrar dentro del caldo
de BHI retirando el algodón de la boca del tubo; así terminado se rotula para poder identificar
el tipo de siembra.

Tubo 2
Continuamente se procede a hacer la siembra de la cepa en el caldo de BHI en el tubo del agar
inclinado con los mismos procedimientos del primer paso, esterilizando el asa en punta de
anillo, sacando la cepa del tubo de ensayo y finalmente se hace la siembra dentro del agar
inclinado en forma de estrías; tapándolo con el algodón y rotulando para identificar el tipo de
siembra.

Tubo 3
En este caso se esterilizo el asa en punta para poder introducir los microorganismos dentro del
caldo BHI en forma más inclinada, se procede a hacer el mismo procedimiento sacar la cepa
con el asa en punta y luego introducirlo dentro del caldo en forma de estrías y en punta, para
así poder taparlo e identificarlo como otro tipo de siembra.

Tubo 4
Finalmente se esteriliza el asa en forma de punta para hacer la siembra en forma vertical, se
hace el mismo proceso sacando la cepa con el asa en punta, luego poder introducirlo dentro
del caldo BHI y así poder taparlo y rotularlo.
 B. Siembra en placas
Placa 1
Para este proceso se esterilizó el asa en forma de anillo en el mechero para poder sacar la cepa
del tubo de ensayo, luego se sembró en la placa en forma de estrías y continuamente se
procedió a taparlo para identificar el tipo de siembra.

V. DISCUSION DE RESULTADOS
Pasadas las 24 horas en la estufa, se logró obtener los resultados de los diferentes medios
de siembra de bacterias:

En el proceso de la preparación se obtuvo como resultado de un buen medio de cultivo

una mezcla homogénea del agua y el caldo de cultivo deshidratado apto para el cultivo de
bacterias.

En los medios inclinado, columna, pico de flauta, y en caldo, se obtuvo como resultado
final, una película bacteriana más conocido como colonia estructurada de células bacterianas.

Se siguió todos los procesos de siembra de (Marta, 2009) para obtener una buena
siembra de bacterias en todos los medios de cultivo mencionados lo que resulto una exitosa
proliferación de bacterias en forma de película.

En los medios de cultivo mencionados por (Casado, 2012) se utilizaron principalmente

los medios semisólidos y liquido siendo ambos medios aptos para la proliferación de bacterias
siempre y cuando se haga una correcta siembra de estas.

5.1. Preparación de medios de cultivo

Se observó una gelificación de la sustancia en el matraz sin granulaciones y burbujas.
 Imagen 1: Gelificación del agar Estafilococo – Lactosa electrolito (Cled)

5.2. Métodos de siembra de microorganismos

A. Siembra en tubos

a. En plano inclinado
Se pudo observar un crecimiento de gran cantidad de bacterias por toda la base del medio de
cultivo.

Imagen 2: Siembra en plano inclinado

b. En pico de flauta
Se observó el crecimiento de pocas colonias bacterianas, lo cual indica poca efectividad en este
medio.
 Imagen 3: Siembra en pico de flauta

c. En columna
Se logró observar el crecimiento de las colonias en el medio de cultivo, pero en pocas
cantidades.

Imagen 4: Siembra en columna

a. B siembra en placa
Se observó el crecimiento de las colonias bacterianas por todas partes de la placa.

Figura: Siembra en placa de agar

Imagen 5: Siembra en placa

VI. CONCLUSIONES
La siembra en tubos de ensayo como en la placo hubo crecimiento de bacterias, entonces se
concluye que se siguió los pasos correctamente y las condiciones como temperatura, humedad,
concentración de nutrientes y grado de acides eran adecuadas para su desarrollo de bacterias.

En conclusión, el método de siembra de bacterias es una elección crítica para cualquier

experimento de microbiología. De esta manera cada método de siembra tiene sus propias
ventajas y desventajas, y es importante considerar las características de la muestra bacteriana y
del medio de cultivo antes de decidir qué método de cultivo utilizar.

Se determino que todas las técnicas de cultivo son eficaces siempre y cuando se realice
de forma correcta la preparación del medio y el sembrado de las bacterias.

VII. RECOMENDACIONES

 Evitar que microorganismos presentes en el ambiente se introduzcan en nuestros

cultivos contaminándolos

 Evitar que los microorganismos de la muestra nos contaminen a nosotros.

 Ambiente limpio y ordenado.

 Desinfectar los materiales que utilizamos.

VIII. Bibliografía

Gaitán-Hernández, R., Salmones, D., Pérez-Merlo, R., & Mata, G. (2006). Manual práctico del

cultivo de setas: aislamiento, siembra y producción. Instituto de Ecología, AC, Xalapa, México.

Aldana, A. A., Ortiz, J. I. M., Guaca, Y. M., Ibarra, J. J. S., & Bedoya, I. J. (2017). Comparación

cualitativa de diferentes medios de cultivo y condiciones de siembra para el aislamiento

primario de Helicobacter pylori a partir de biopsia gástrica obtenidas de pacientes

dispépticos. Revista Médica de Risaralda, 23(2), 30-33.

Rodríguez Varo, L., Pumarola Suñé, J., & Canalda Sahli, C. (2009). Acción antimicrobiana in

vitro de distintas medicaciones sobre Enterococcus faecalis y Actinomyces

israelii. Endodoncia, 2009, vol. 27, num. 1, p. 7-12.

 IX. ANEXO

Preparación de medios de cultivo

Figura 7: Peso del Agar

Figura 6: Agregamiento de agua

Figura 8: Dilución de agar

Figura 9: Siembra en tubo