UNIVERSIDAD ANDINA DEL CUSCO

FACULTAD DE INGENIERIA Y ARQUITECTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

PRÁCTICA N° 05

MEDIOS DE CULTIVO

I. COMPETENCIA

El estudiante conoce el fundamento, los tipos, preparación e importancia de los medios de cultivo
para la identificación de bacterias.

II. GENERALIDADES
El término “cultivo” se refiere al crecimiento de poblaciones microbianas en ambientes artificiales
(medios de cultivo) bajo condiciones de laboratorio.
Un medio de cultivo es el conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que,
junto a características ambientales adecuadas, crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. Se utilizan para cultivar a los microorganismos en condiciones INVITRO con
el fin de aislar diferentes especies bacterianas para su identificación y estudios complementarios.
Existe una amplia variedad de cultivos que se basan en los diferentes elementos constitutivos de
cada género o especie de microorganismo, así como en sus actividades metabólicas y los
mecanismos que utilizan para obtener los nutrientes. Por lo tanto, los ingredientes con que se
elabora un medio de cultivo deben responder a las necesidades específicas de la especie:

Necesidades nutritivas
a. Necesidades Elementales: Son los diversos elementos que son parte de la estructura
microbiana (proteínas, ácidos nucleicos, C, H, O, N, lípidos etc.)
b. Necesidades Energéticas: Indispensables para cubrir los gastos que lleva consigo la
biosíntesis. La mayoría de las bacterias utilizan energía liberada por oxidación o por
fermentación de azúcares o ácidos orgánicos.
c. Necesidades Específicas o Factores de Crecimiento: Suministran cierto número de
compuestos bien definidos que los microorganismos no son capaces de sintetizar como
aminoácidos, bases púricas, pirimídicas y vitaminas.

Necesidades físicoquímicas
a. Hidratación: El agua es un elemento necesario para el desarrollo de las bacterias que
requieren cierto grado de humedad para poder crecer.
b. Temperatura: Se debe de respetar la temperatura óptima de desarrollo de los microorganismos
que varía según la especie microbiana. Los psicrófilos se desarrollan mejor en temperaturas
bajas (15 a 20°C) los mesófilos de 30 a 37°C y los termófilos a temperaturas de 50 a 60°C.
c. pH: El óptimo, en la mayoría de las veces, es cercano a la neutralidad (neutrófilos). Algunos
microorganismos encuentran su cifra optima con pH 3 (acidófilos) y otros tienen un pH
óptimo de hasta 10.5 (alcalófilos)
d. Presión osmótica: la mayor parte de las bacterias son muy tolerantes a las variaciones de
presión osmótica cierta bacterias necesitan una concentración salina muy fuerte.
 e. Oxigeno: Muchos microorganismos son aerobios obligados, algunos anaerobios son
facultativos, es decir, tienen la capacidad de vivir de forma aerobia o anaerobia; en tanto que
otros son anaerobios obligados, pues requieren una sustancia diferente al oxígeno como
aceptor de hidrógeno y son sensibles a la inhibición con oxígeno.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

POR SU NATURALEZA:
a.- Medios empíricos: También llamados naturales. Son medios ricos en nutrientes que
proporcionan los elementos necesarios para el desarrollo de microorganismos, sin embargo, su
composición química no se conoce con exactitud (fórmula o concentración de cada ingrediente),
debido a que contienen productos naturales, extracto de tejidos animales o vegetales. Por
ejemplo:
Extracto de carne: Resulta de la extracción y concentración de los productos solubles de la carne
hervida o macerada. Contiene proteínas, algunos aminoácidos libres, bases nitrogenadas y
glúcidos.
Extracto de levadura: Contiene aminoácidos y vitaminas hidrosolubles.
Peptonas: Proviene de la degradación enzimàtica de sustancias proteínicas como carne, caseína,
etc.
b.- Medios sintéticos: son soluciones de compuestos definidos químicamente en cantidad precisa,
siendo necesario conocer las necesidades nutritivas exactas de la especie que se desea cultivar,
como fuente de carbono y factores de crecimiento.
c.- Medios Mixtos: resultan de la combinación de los dos anteriores, es decir combinando un medio
natural con un medio sintético. Ej.: Agar sangre, Papa- dextrosa- agar (PDA).

POR SU COMPOSICIÓN:
a. Medios Nutritivos: Son medios simples que permiten el crecimiento de todo tipo de bacterias.
Ejm. Agar nutritivo, caldo, nutritivo etc.
b. Medios de Enriquecimiento: Se caracterizan por brindar a un grupo de bacterias, suficiente
cantidad de elementos necesarios para que se puedan desarrollar óptimamente e inhiben el
desarrollo de otro tipio de bacterias. Ej.: caldo selenito, que favorece el desarrollo de Salmonella;
caldo tioglicolato, que favorece el crecimiento de bacterias anaerobias.
c. Medios selectivos: Por lo regular resultan específicos para un solo tipo de bacteria al no poder
desarrollarse en ellos ninguna de las demás especies, por las características del medio. Ejemplo:
el medio "Chapman" denominado también Agar Manitol Salado. Este medio se caracteriza
porque uno de sus componentes, el NaCl, se encuentra a una elevada concentración, lo que
imposibilita el desarrollo de las especies bacterianas con excepción de los Estafilococos, que
puede desarrollarse y multiplicarse en este medio salino.
d. Medios de diferenciación bioquímica: una especie bacteriana se identifica según un conjunto de
características particulares de su metabolismo conocidas como características bioquímicas como
formación de gas, producción de H2S, cambios de pH, etc. Ej. Sugar Iron Agar (TSI) Lisina Iron
Agar (LIA), etc.
e. Medios de transporte: Preservan la viabilidad de los microorganismos por un periodo
prolongado de tiempo, pero no permiten su proliferación. Son utilizados para transportar la
muestra desde el lugar de extracción hacia el laboratorio donde se realizará el análisis. Ej.: Stuart,
Amies, Cary-Blair.
POR EL ESTADO FÍSICO:
a. Medios líquidos: No contienen agar, siendo trabajados en forma de caldo. Los microorganismos
desarrollados en medios líquidos se mueven con libertad y su desarrollo provoca la formación de
un enturbiamiento difuso o sedimento visible. Ej.: Caldo Selenito, agua peptonada alcalina,
caldo lactosado, caldo nutritivo, etc.
b. Medios sólidos: Son los típicos agares, el agar es una sustancia que proviene del extracto de
algunas algas rojas, principalmente especies del género Gelidium, sirve como agente
solidificante, esta sustancia funde a la temperatura de ebullición de agua y el enfriar se solidifica
dando como resultado un gel homogéneo, transparente que no modifica las propiedades del
medio de cultivo. Ej.: Agar nutritivo. Agar Macconkey, Agar Sangre, Agar Manitol Salado, etc
c. Medios semisólidos: Estos medios contienen un porcentaje de agar menor que el empleado para
los medios sólidos, lo que facilita una mayor migración de sustancias y la movilidad bacteriana.
Ej.: medio de "Cary - Blair" y agar semisólido para motilidad.

III. MATERIALES

 Videos sobre los tipos y la preparación de medios de cultivo en laboratorio donde se

observan los siguientes materiales y equipos:
 Materiales de vidrio (probetas, matraces, placas petri, tubos de ensayo.)
 Equipos (autoclave, balanza, phmetro)
 Otros (trípode, agua destilada, malla de asbesto, etc.)
 Medios de cultivo

IV. PROCEDIMIENTO

 Visualización del video sobre los de tipos y técnicas de preparación de medios de cultivo.
 Simulación de la preparación de medios de cultivo
 Reconocimiento de los tipos de medios de cultivo.

En laboratorio el procedimiento a seguir para la preparación de medios de cultivo es el siguiente:

 Limpiar las mesas con solución desinfectante.

 Pesar el medio de cultivo de acuerdo con las condiciones que vienen impresas en la etiqueta
del recipiente de acuerdo con la firma comercial que la expide.
 Utilizar agua destilada o agua desionizada para no variar el pH del medio de cultivo.
 Si es un medio sólido, disolver y licuar al calor hasta el punto de ebullición. Esterilizar el
medio de cultivo en autoclave, según las indicaciones. De acuerdo con el uso, se colocarán
en tubos de ensayo debidamente taponados, o se dejarán en los recipientes de preparación,
para que después de autoclavar, se proceda a plaquear (en placas petri estériles) para
finalmente dejar que solidifique.
 Si es un medio líquido, disolver y colocar en tubos de ensayo debidamente taponados, o
dejar en los recipientes de preparación. Esterilizar el medio de cultivo en autoclave, según
las indicaciones.
 Llevar a la incubadora por 24 horas a 37°C para controlar la esterilidad del medio de cultivo.
 Guardar en refrigeración hasta el momento de su uso.
V. RESULTADOS

Describa a través de un organizador gráfico la preparación de los medios de cultivo que se le

asignaron en la práctica. Mencione además el tipo de medio de cultivo al que pertenece.

Considerar la preparación para 550 ml de agua destilada

VI. CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un medio de cultivo? ¿Para qué sirve? ¿Qué componentes debe contener?
2. ¿Qué es el agar y para qué sirve?
3. Además del medio de cultivo, ¿qué más es necesario aportar a un microorganismo para lograr
su desarrollo en condiciones de laboratorio?