PRACTICA # 3

MICROBIOLOGÍA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD.

INTEGRANTES:
CAROLINA PATIÑO VERA.
MELISSA TAMAYO GÓMEZ.

MONTERÍA.
 ESTERILIZACIÓN Y
DESINFECCIÓN.

OBJETIVOS.

 Preparar y esterilizar correctamente material de uso común en el laboratorio.

 Conocer los diferentes medios de cultivo y su preparación.
 Diseñar, elaborar y esterilizar medios de cultivo.

INTRODUCCIÓN.

La esterilización del material de laboratorio permite eliminar la carga microbiana patógena

y no patógena, incluidas las esporas, de productos e instrumentos que lo requieran como el
instrumental médico o los medios de cultivo. Para que sea eficaz debe realizarse sobre
materiales limpios y respetando los parámetros y procedimientos definidos para cada
método. Puede conseguirse usando calor, productos químicos y radiación. El método que
será empleado dependerá del material a esterilizar y del equipo e instalaciones disponibles.
Con los objetos de acero inoxidable y de vidrio se puede usar cualquier método, pero en el
caso de los materiales plásticos debemos tener en cuenta su composición para evitar
deformaciones e incluso la destrucción de este.
La esterilización tiene como objeto la destrucción de los microorganismos, incluyendo
formas resistentes como esporas, capsulas, virus y hongos. Es importante recordar que
para cualquier procedimiento en el laboratorio se requiere un ambiente libre de agentes
patógenos y contaminantes, tanto para garantizar resultados confiables como para
proteger la salud del operador. Algunos métodos de esterilización son:

• Calor húmedo: el objeto es la destrucción de los microorganismos por coagulación de las

proteínas celulares. El principal método es la esterilización por vapor a presión, esta se lleva
a cabo en una autoclave, equipos que emplean vapor de agua saturado, a una presión de 15
libras y que alcanzan una temperatura de 121º C. Existen protocolos dependiendo del tipo
de material que se quiere esterilizar, donde varían los tiempos y la temperatura.
Generalmente para material limpio se utiliza entre 10 y 15 minutos y para material
contaminado se utiliza de 30 a 40 minutos.

• Calor seco: La destrucción de los microorganismos se produce por oxidación de sus

componentes celulares. Dentro de este se contemplan métodos como:
aire caliente, llama directa e incineración.
• Filtración: utilizando filtros de partículas de alta eficiencia (HEPA).

• Rayos ultravioletas o radiación ionizante: Los rayos ultravioletas son altamente

mutagénicos, causan alteraciones en el DNA. Las radiaciones ionizantes producen iones y
radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas y
estructuras para la viabilidad de los microorganismos.

• Esterilizante gaseoso: ejemplo óxido de etileno, formaldehído gaseoso, peróxido de

hidrogeno. Son agentes alquilantes funcionan por medio de tres mecanismos diferentes,
los cuales todos alcanzan el mismo resultado - la interrupción de la función del ADN y la
muerte celular.

• Esterilizantes químicos: como el ácido paracético y el glutaraldehido. Agentes con

actividad oxidante; cuya actividad se relaciona con la alquilación de componentes celulares
alterando la síntesis proteica de los ácidos ADN Y ARN.
La desinfección es un procedimiento que busca eliminar patógenos utilizando métodos
químicos y físicos, aunque los más resistentes pueden sobrevivir. Se conocen tres grados
de desinfección:

• Desinfectante de grado alto: mata patógenos microbianos, tiene una eficiencia

semejante a la esterilización, pero hay algunas formas resistentes como microorganismos
formadores de esporas. Ejemplos: calor húmedo, glutaraldehído, peróxido de hidrogeno,
compuestos clorados entre otros.

• Desinfectante de grado medio: erradica microorganismos patógenos, con excepción de

endosporas bacterianas. Ejemplos: alcoholes, compuestos yodados entre otros.

• Desinfectante de grado bajo: mata la mayoría de las bacterias en estado vegetativo y

virus de tamaño intermedio y con envoltura lipídica. Ejemplos:
compuestos de amonio cuaternario.

Antisepsia es un procedimiento en caminado a combatir y prevenir las infecciones

ocasionadas por microbios; pero este término se reserva para agente que se aplican en
tejidos vivos. Los antisépticos se utilizan para reducir el número de microorganismos
patógenos presentes en la superficie cutánea. Algunos de los compuestos utilizados son:
alcoholes, compuestos yodados, clorhexidina entre otros.
 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es enorme,
la variedad de medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los medios de
cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar al momento de
usarlos.
Los medios de cultivo pueden clasificarse según su estado físico, composición, y al uso que
se destinan:

Según su estado físico

Se dividen en sólidos, semisólidos y líquidos:

 Sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos y presentan en su composición un

agente solidificante como el agar que es un polímero de azúcares, obtenido de algas
marinas. En este tipo de medio se utiliza en una proporción de 1.5 a 2 % de agar.
 Semisólidos: presentan agar en su composición, pero a una concentración menor que
el medio sólido. En este medio se utiliza 0.5% de agar. Uno de los usos de este tipo de
medio es la investigación de la movilidad de las bacterias.

 Líquidos: también son llamados caldos, estos medios no presenta ningún agente
solidificante.

Según su composición

 Definidos: se conocen las cantidades exactas de compuestos químicos que los

conforman ya sean de tipo orgánico e inorgánico.

 Complejos: están compuestos de un número limitado de sustancias complejas de

extractos de plantas y animales cuya composición química exacta no se conoce.
Según su
utilización

 Medios básicos o comunes: contienen sustancias nutritivas mínimas para el crecimiento

de las bacterias metabólicamente no exigentes, también son la base para la
preparación de otros medios. Agar nutritivo, agar base sangre, agar tripticasa.

 Medios enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran

número de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biológicos poco
usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc.
Agar sangre, agar chocolate, agar BHI.

 Medios selectivos: Son aquéllos que poseen uno o más componentes añadidos, los
cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias
y/o promoverán el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las
condiciones físicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para
hacerlo selectivo para los organismos de interés. Un medio selectivo es el MacConkey
que permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de
los Gram positivos.

 Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de

bacterias con base en alguna característica observable en su patrón de crecimiento en
el medio, ya sea por producción de algún pigmento o por cambios de color en el medio
debido a indicadores de pH, o por halos de degradación de algún componente en el
medio de cultivo. Agar SS, Mc Conkey, CLED.

 Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que contienen un agente que inhibe
las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento irrestricto del agente
infeccioso. Caldo tetrationato, caldo selenito.

 Medios de transporte: son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin

multiplicación significativa de los microorganismos desde el momento de su extracción
hasta su posterior estudio. Utilizan generalmente cuando las muestras deben ser
enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un límite de dos horas desde la
recolección de las muestras y su estudio en el laboratorio. s. Los medios de transporte
más frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies, Carey – Blair, buffer
glicerinado.
 Medios
bioquímicos: son aquellos que revelan las características bioquímicas particulares de las
bacterias. TSI, SIM, UREA, LIA, citrato.

MATERIALES
 Bata*
 Guantes*
 Tapabocas*
 Marcador de vidrio*
 Encendedor*
 Erlenmeyer
 Balanza
 Mechero de Bunsen
 Espátula
 Probeta
 Medios de cultivo (agar sangre, agar nutritivo, Mc Conkey)
 Autoclave
 Agua destilada
 Cinta indicadora

*Deben ser traídos por el estudiante

PROCEDIMIENTO

 Lea cuidadosamente las indicaciones del medio asignado y siga las indicaciones de la
casa comercial para la preparación.

 Realice los cálculos para preparar 200 ml de medio de cultivo y pese la cantidad de
medio necesaria para la preparación.

 Mida el volumen del agua destilada con una probeta y agregue el medio de cultivo,
mezcle bien hasta que desaparezcan los grumos.
 Tape el
Erlenmeyer con papel kraft y selle con cinta indicadora, marcar el recipiente con el
nombre del medio y el número del grupo.

 Esterilizar en autoclave según las indicaciones impresas en el producto.

 Una vez esterilizado saque de la autoclave deje reposar y sirva de forma aséptica cerca
del mechero, sirva de 15 a 20 ml en cajas de Petri grandes.

 Deje solidificar por 30 minutos.

POSTLABORATORIO

1. Complete la información de la siguiente tabla:

MEDIO DE TIPODE MEDIO COMPOSICIÓN DEL MICROORGANISMOS

CULTIVO (Estado físico, Composición MEDIO
y Utilización)
Agar Nutritivo Sólido, definido, de Lab-lemco powder Estreptococos y
medios básicos o (1.0), yeast extract neumococs
comunes (2.0), peptone (5.0),
sodium chloride
(5.0), agar (15.0)
Agar Sangre Sólido, definido Lab-lemco powder Estafilococos
(1.0), yeast extract patógenos en
(2.0),peptone especial
(10.0),mannitol Staphylococcus
(10.0),sodium aureus
chloride(75.0),phenol
red (0,025), agar
(15.0)
Caldo BHI Sólido. Infusion solido de Bacterias, levaduras,
(Brain Heart Infusion) definido, cerebro (12,5), beef mohos
medio enriquecido heart infusion solid Haemophilus
(5.0), proteose influenzae
peptone (10.0),
sodium chloride
(5.0), glucose (2,0),
di-sodium phosphate
 (2.5), agar (10,0)
Agar McConkey Sólido, Lab-lemco powder Bacterias,
medio diferencial (1.0), peptone (5.0), salmonellas y
lactosa (10.0), bile shigellas
salts (5.0), citrato de
sodio (10.0), sodium
thiosulphate (8.5),
citrato ferrico (1.0),
verde brillante
(0.00033), rojo
neutral (0.25), agar
(12.0).
Agar TSI Sólido Mycological peptone Hongos patógenos y
(Triple Sugar Iron) (10.0), glucose no patógenos
(40.0), agar (15.0) dermatofitos
Agar LIA Sólido Beef dehydrated Estafilococos,
(Lysina Iron Agar) infusion from enterococos, en
(300.0), cosein especial
hydrolysate (17.5), Enterobacteriaceae y
storch (1.5), agar bacilos gram
(17.0) negativos aeróbicos
Agar EMB Semisólido. Peptona (10.0), Familia
(Eosin Methylene blue lactosa (5.0), Enterobacteriaceae y
Lactose)
sacarosa (5.0), bacilos gram
fosfato dipotásico negativos
(2.0), eosina (0.4),
azul de metileno
(0.0065), agar
(13.5)

CONCLUSIÓN
Por medio de esta práctica al investigar la teoría y realizar la preparación de un medio de
cultivo, se logró la elaboración adecuada de los mismos, así como la selección apropiada
para el uso que se les da posteriormente a los medios del método esterilización que
eliminaría los restos microbianos que pudiesen haber quedado en el medio de cultivo ya
que, si existe alguno de estos, ya no sería adecuado para el uso que se le pudiera llegar a
dar. También se observó con la teoría que de acuerdo al tipo de bacteria que se requiera
sembrar, será el tipo de medio de cultivo, esto, ya que cada bacteria requiere cierto tipo de
nutrientes para subsistir y formar sus colonias, además de cada cierto tipo de medios de
cultivo, nos puede mostrar de acuerdo a su composición ciertas características que
presentan determinado tipo de bacterias, ya sea por su pH y que éste se ha indicado por los
indicadores de los medios o porque reacciona con ciertos componentes del medio creando
colores o formas. Por último, se aprendió envolver correctamente los medios de cultivo y
que estos cuando se almacenan en la caja de Petri deben colocarse inversamente para
evitar su deshidratación por evaporación y de esta manera no tener que desechar las
muestras.

REFERENCIAS

- López Reyes, Cecilia; escudero, Eliana. Guía de materiales de laboratorio. DuocUC

(Departamento universitario obrero campesino universidad católica). Escuela de medicina.
Chile.

- Pedrique de Aulacio M, Gutiérrez S. Microbiología. Manual de métodos generales. Facultad

de farmacia universidad central de Venezuela.2001.