FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE INGENIERIA

BIOTECNOLOGICA

INFORME N°1: NORMAS DE SEGURIDAD.

Dina luz Montejo Rincón 1611571.

RESUMEN

Para trabajar en el laboratorio de genética molecular, es necesario el entendimiento de las

normas que rigen la seguridad y el comportamiento de los estudiantes, con su cumplimiento se
podrán prevenir distintos incidentes, como incendios y explosiones, entre otros. Los estudiantes
deben conocer los riesgos físico-químicos y biológicos de las sustancias que se utilizan en las
diferentes prácticas; así como identificar los distintos componentes que deben conformar el
botiquín de emergencias. Para la presentación de los informes de las prácticas de laboratorio, el
estudiante deberá cumplir con las normas expuestas por el docente al inicio del curso.

Palabras claves: seguridad, incidentes, riesgos, emergencia.

ABSTRACT

To work in the molecular genetics laboratory, it is necessary to understand the rules that govern
the safety and behavior of students, with their compliance it will be possible to prevent different
incidents, such as fires and explosions, among others. Students must know the physical-chemical
and biological risks of the substances used in the different practices; as well as identifying the
different components that should make up the emergency kit. For the presentation of the reports
of the laboratory practices, the student must comply with the norms set forth by theteacher at the
beginning of the course.

Keywords: security, incidents, risks, emergency.

OBJETIVOS

 Inculcar en los estudiantes una mentalidad preventiva que minimice la probabilidad de

accidentes en el laboratorio de biología molecular. Y también disminuir riesgos derivados
de la generación de residuos peligroso.

 Promover criterios uniformes alrededor del manejo de los riesgos para la salud y
ambientales asociado con las prácticas experimentales que se realizan en los laboratorios de
la universidad.

 Concientizar en los estudiantes que se deben tener en cuenta todas las recomendaciones y
consideraciones indicada por el docente.

 Informar y motivar a los estudiantes sobre principios y normas de bioseguridad para su

aplicación activa en el trabajo de laboratorio.

 Identificar los diferentes equipos necesarios para las prácticas a realizar en el laboratorio de
biología molecular.
.
MARCO TEORICO
 Universidad: todo el personal debe
seguir las precauciones estandarizadas
de manera rutinaria para prevenir la
exposición de la piel y de las mucosas,
en todas las situaciones que puedan
dar origen a accidentes. Estas
precauciones deben ser aplicadas por y
para todas las personas.
 Uso de barreras: Comprender el
concepto de evitar la exposición
directa a agentes infecciosos o
sustancias potencialmente
contaminantes, mediante la utilización
de materiales adecuados que se
interpongan para evitar el contacto con
estos agentes y sustancias. La
utilización de barreras como lo son
bata, guantes, lentes y mascarillas, etc.
No evitan los accidentes a estos
fluidos, pero disminuyen las
consecuencias de dichos accidentes.
 Medios de eliminación de material
contaminado: Comprende el conjunto
de dispositivos y procedimientos
adecuados a través de los cuales los
materiales biológicos y químicos
utilizados en los laboratorios son
depositados para el almacenamiento y
posterior eliminación sin que
presenten algún riesgo.
RECOMENDACIONES GENERALES
DURANTE LA PERMANENCIA EN EL
LABORATORIO.
 Antes de utilizar un reactivo,
verificar los datos anotados en la
etiqueta, revisar sus propiedades
físicas, químicas y toxicológicas
paraser manejadas adecuadamente.
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD
 Para manejar sustancias volátiles,
inflamables y explosivas se
deben llevar a la campana de
extracción o en su defecto a un
lugar ventilado.
 No pipetear con la boca
ningúnlíquido.
 Para la dilución de los ácidos,
añadir lentamente el ácido al agua
contenida.
IDENTIFICACIÓN DE SUSTANCIAS
PELIGROSAS
Para cualquier producto químico utilizado en
el laboratorio se debe tener la información
sobre el riesgo inherente a su uso. Esta
información aparece en las etiquetas o en las
fichas de seguridad, en la que aparecerá el
nombre de la sustancia o preparado e
identificaciones de peligro. En la ficha de
datos de seguridad aparecerá información
precisa, tal como:
La identificación de la sustancia: El término
empleado para la identificación de la
sustancia deberá ser idéntico al que figure en
la etiqueta.
Composición: La información aportada debe
permitir a la persona conocer sin dificultad
los peligros que puedan presentar los
componentes de la sustancia. No es
necesario indicar la composición completa
(naturaleza de la sustancia y su
concentración) aunque puede ser útil la
descripción general de la sustancia y su
concentración.
Identificación de los peligros: Se
proporciona la clasificación de la sustancia.
Se deben indicar clara y brevemente los
peligros que representa la sustancia para el
estudiante y el medio ambiente. Se
distingueclaramente de las sustancias
clasificadas como peligrosas o no
peligrosas y se describen los principales
efectos adversos tanto físico-químicos
como para la salud y el medio ambiente.
Algunos peligros dentro dellaboratorio son:

- Riesgo de inflamabilidad: Un riesgo

comúndentro de un laboratorio es un
incendio, que puede ocurrir debido a
diversos combustibles, comburentes y
fuentes de ignición que se encuentran en el
laboratorio. Si se produce un incendio, se
debe informar inmediatamente a los demás
y pedir ayuda. Si el incendio es pequeño se
puede intentar apagarlo utilizando medios
apropiados como el extintor, en caso de no
conseguirlo trate de evacuar lo más rápido
posible el lugar.

- Riesgo de explosión: Las explosiones

pueden ocurrir fácilmente en un
laboratorio si no se conocen las
propiedades de las sustancias. Algunos
riesgos de explosión sepueden presentar
por: reacciones exotérmicas no
controladas en las que se liberen grandes
cantidades de energía, exposición al fuego
de sustancias altamenteinflamables y mal
manejo de sustancias incompatibles, entre
otras.

Primeros auxilios: Debe especificarse en
primer lugar si se precisa asistencia médica
inmediata. La información sobre primeros
auxilios debe ser breve y fácil de entender
por parte del afectado, los allí presentes y los
servicios de emergencia. Deben describirse
brevemente los síntomas y los efectos,
además es importante indicar si se requiere
o es aconsejable consultar a un médico.
Manipulación y almacenamiento:
Especificar las precauciones necesarias para
garantizar una manipulación sin peligro,
incluyendo recomendaciones sobre medidas
de orden técnico tales como las de
contención, de ventilación local y general,
las destinadas a impedir la formación de
aerosoles y polvo, o para prevenir
incendios, así como las medidas de
protección del medio ambiente. Para el
almacenamiento se debe especificar las
condiciones necesarias para un
almacenamiento seguro como lugares
ventilados y protegidos contra variables de
temperatura, humedad, luz, entre otras.
Propiedades físicas y químicas: Para
permitir la adopción de las medidas
adecuadas de control. Proporcionar toda la
información pertinente sobre la sustancia
como:
- Aspecto: Indicar el estado físico (solido,
liquido, gas) y el color de la sustancia tal y
como se suministra. Si el olor es
perceptible, describirlo brevemente. Indicar
el pH de la sustancia tal y como se
suministra, en caso de solución acuosa
indicar la concentración.
- Otros datos: Indicar otros parámetros
importantes para la seguridad, tales como
la miscibilidad, conductividad y punto de
ebullición o de fusión, entre otros.
Información toxicológica: Las sustancias o
algunos preparados que por algún efecto
como inhalación, ingestión o penetración
cutánea, puede producir efectos nocivos
no hereditarios en la descendencia, o
aumentar la frecuencia de éstos, así como
afectar de forma negativa a la función o a
la capacidadreproductora masculina o
femenina, se consideran como sustancias
toxicas. A estassustancias se les debe
prestar total cuidado con la finalidad de
evitar accidentes graves.
PRIMEROS AUXILIOS EN
ELLABORATORIO
Cuando se trabaja en un laboratorio los
estudiantes se encuentran expuestos a
diversos accidentes que pueden afectar su
integridad física, por tal razón se deben
exponer las pautas que se deben cumplir
como parte de prevención en caso de
algúnaccidente. Los accidentes más
comunes enlos laboratorios son: cortes y
heridas, quemaduras o corrosiones,
salpicaduras enlos ojos e ingestión de
productos químicos. Los primeros
auxilios que se deben prestar en caso de
alguno de los anteriores accidentes se
describen a continuación:
Cortes y heridas: Lavar la parte del cuerpo
afectada con agua y jabón. No importa
dejarsangrar algo la herida, pues ello
contribuye a
 evitar la infección. Aplicar después agua
oxigenada y cubrir con gasa esterilizada
yalgodón. Si persiste la hemorragia o han
quedado restos de objetos extraños acudir
inmediatamente a un centro de salud.
Quemaduras o corrosiones: Por fuego u
objetos calientes, no lavar la lesión con
agua,tratarla con disolución acuosa o
pomada especial para quemaduras,
posteriormente cubrir la herida con una
venda. Por ácidos en la piel, identificar la
zona afectada y aplicar abundante agua.
Aplicar crema especial para quemaduras,
posteriormente cubrir la herida con una
venda.
Salpicaduras en los ojos: Lavar
inmediatamente con agua la zona afectada,
aunque se sienta dolor o irritación, la
persona afectada debe tratar de mantener
losojos abiertos, de tal modo que el agua
penetre debajo de los parpados. Cuando se
tenga al paciente estabilizado buscar
atención medica inmediatamente.
Inhalación de sustancias químicas: llevar al
paciente al aire fresco inmediatamente,
prestarle atención médica tan pronto como
sea posible. Al primer síntoma de dificultad
respiratoria, iniciar la respiración artificial
boca a boca. El oxígeno debe ser
administrado solamente por personal
entrenado. Continuar la respiración
artificialboca a boca hasta que el médico lo
aconseje. Tratar de identificar el humo o
vapor causante de la dificultad respiratoria.
Ingestión de sustancias químicas: Cuando
seproduce un accidente en el cual se ingiere
Cuestionario
una sustancia química se debe tener en
cuenta las siguientes recomendaciones
antes de llevar al paciente a una entidad
promotorade salud:
- Ácidos corrosivos, no inducir jamás al
vómito, de lo contrario puede ocasionar
lesiones en el tracto digestivo.
Administrar lechada de magnesia (óxido
de magnesio +agua) en grandes
cantidades.
- Álcalis corrosivos, no inducir jamás al
vómito, de lo contrario puede ocasionar
lesiones en el tracto digestivo.
Administrar abundantes tragos de
disolución de ácido acético al 1%;
administrar grandes cantidades de leche
o algunas claras de huevo batidas en
agua.
- Sustancias toxicas, cuando se haya
ingerido una sustancia toxica o venenosa,
tratar al paciente con antídoto universal, el
cual se prepara con 2 partes de carbón
activado, 1 parte de óxido de magnesio y 1
parte de ácido tánico. Se homogeniza
totalmente y se guarda en seco. Para
administrarlo se disuelven 15 gramos en
medio vaso de agua caliente. Si el paciente
no mejora, se debe llevar rápidamente a un
centro de salud en elcual se le realice un
lavado estomacal.
a. Consultar otras sustancias toxicas que se utilizan en el laboratorio de biología molecular.

1. VA-044

VA-044 para el metodo de analisis cerebralEn biología molecular se utiliza para la

separación de las proteínas la electroforesis en gel de poliacrilamida. Esta técnica conocida
como PAGE por sus siglas en inglés, polyacrylamide gel electrophoresis, se basa en que las
diferentes proteínas migrarán a una velocidad distinta en un medio cargado eléctricamente.
ÉlVA-044 (2,2' - Azobis [2- (2-imidazolin-2-il) propano]dihidrocloruro) es un iniciador de
la polimerización de la acrilamida, soluble en agua. Las condiciones en que se produce la
polimerización usando este iniciador son suaves, a una baja temperatura y usando agua
como disolvente.

Entre las aplicaciones del VA-044 están la polimerización de la acrilamida y de otros

monómeros. Cuando se compara con otros iniciadores hidrosolubles en la polimerización de
la acrilamida se observa que es un producto recomendado para llevar a cabo esta reacción.
Este reactivo puede ser usado para el método de análisis cerebral desarrollado por Chung y
colaboradores que permite realizar una exploración estructural y molecular de los sistemas
biológicos intactos.

2. TAPS

Otro buffer comercializado por Wako es el ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-3-

aminopropanosulfónico (TAPS). El TAPS tiene capacidad reguladora entre pH 7.7 y 9.1.
Puede ser usado para electroforesis capilar de ADN, como fase móvil para cromatografía y
en otras técnicas de biología molecular.

3. HEPES

El HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-piperazínetanosulfónico) es uno de los tampones

zwitteriónicos más usados en experimentos biológicos. Tiene capacidad reguladora entre los
valores de pH de 6.8 y 8.2 y su pKa varía con la temperatura, disminuyendo la disociación a
temperaturas más bajas, característica que no tienen otros tampones con grupos funcionales
como el fosfato y el carbonato y por esto se usa para mantener las enzimas a bajas
temperaturas, se comporta igual que el agua en este aspecto. Por su baja toxicidad y no
interacción con sustratos metálicos es el buffer de elección para muchos cultivos de órganos
y tejidos (donde además mantiene el cultivo sin cambios de pH debidos a la liberación de
dióxido de carbono que se produce), para técnicas de deposición de proteínas en
microscopía electrónica y cuando son usadas disoluciones de Hanks y Earle.

4. Bis-Tris

Bis-Tris es la forma abreviada de llamar al bis(2-hidroxietil)amino-tris(hidroximetil)metano

usado en biología molecular para gran cantidad de ensayos. En su estructura química se
encuentra una amina terciaria que es la encargada de mantener el equilibrio ácido base que
le confiere capacidad reguladora a esta sustancia en el rango de pH de 5.8 a 7.3. Puede ser
usado en el ensayo de la creatina quinasa, como medio protector de biomoléculas
refrigeradas y en la biosíntesis de muchas otras moléculas de interés en la investigación
biomédica.
5. Target mRNA Cloning Kit Wako

Kit laboratorio Target mRNA CloningEste reactivo de laboratorio es útil para la

amplificación del ARN mensajero cuando se cuenta con pocas moléculas de este. Está
especialmente diseñado para utilizar con los anticuerpos monoclonales anti Ago2
comercializados por Wako. Puede ser usado para cuantificar la cantidad de ARN etiquetado
que está presente en un cultivo. Además se ha visto que es una herramienta muy útil para
clonar ADN complementario obtenido a partir de ARN mensajero asociado al complejo
RISC (complejo silenciador inducido por el ARN, en inglés: RNA-
inducedsilencingcomplex).

6. PIPES

El nombre común del PIPES es ácido piperazín-N,N′-bis(2-etanosulfónico) y se usa también

como tampón en ensayos biológicos. Es uno de los buffers estudiados por Good y
colaboradores en la década de los 60. Este tampón ácido tiene una constante de equilibrio
cercana al pH fisiológico por lo que es muy útil en experimentos que precisan del cultivo de
células, resiste el paso por la autoclave, lo que le confiere una ventaja adicional para ser
seleccionado como tampón ácido en estudios que requieren la fijación de células.

7. ACES

ACES o ácido N-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfónico es un tampón zwiteriónico con

capacidad reguladora en el rango de pH entre 6.4 y 7.4. Es útil para la separación de
proteínas por electroforesis de enfoque isoeléctrico (IEF) en dos dimensiones.

8. ADA

El ácido N-(Carbamoilmetil)iminodiacético o ADA es un tampón biológico útil en el rango

de pH entre 6.4 y 7.4, usado para la preparación de gradientes de pH con sustratos
inmovilizados, por ejemplo en una columna capilar monolítica.

9. BES

El tampón conocido como BES es el ácido N,N-Bis(2-hidroxietil)-2-aminoetanosulfónico,

este buffer biológico tiene utilidad en mucho procesos dependientes del pH, entre los que se
encuentra la separación por electroforesis capilar.

10. GoldMAN™

GoldMAN™ es una solución de nanopartículas magnéticas de hierro con coloides de oro.

Estas nanopartículas pueden utilizarse para transferir biomoléculas como ADN, ARN y
oligonucleótidos a las células. Permite lograr la sensibilización directa de los vectores
víricos en la región de oro de la nanopartícula, una alta eficiencia en la transferencia de
genes a las células sin que contengan el receptor del virus y pueden utilizarse para separar
por magnetismo y purificar aquellas células donde se han expresado los genes del virus.
Además no presentan citotoxicidad y se pueden usar en varios tipos de células.

11. TES
El ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanosulfónico, conocido como TES que es
usado, entre otras aplicaciones, para el crecimiento de células epidérmicas a pH entre 7.4 y
7.9. Es también un buffer de Good.

12. Bicine

El bicine, nombre con el que se conoce a la N,N-bis(2-hidroxietil)glicina es un tampón

recomendado para ensayos bioquímicos que se realicen a bajas temperaturas. Tiene un pKa
de 8.35 y ha sido usado en ensayos de cristalografía, determinación cuantitativa de
biomoléculas y muchos otros experimentos de biología molecular.

13. Tricine

La N-tris-(hidroximetil)metilglicina conocido como Tricine es un buffer usado en el rango

de pH de 7.4 a 8.8. Este buffer se usa en la separación de péptidos y proteínas de bajo peso
molecular, por la técnica de electroforesis, en gel y de membrana. Su gran fuerza iónica
causa mayor movilidad de las especies iónicas y una menor velocidad de migración de las
proteínas. Además es usado con gran eficacia en los ensayos de biología molecular que
utilizan luciferasa para cuantificar la expresión de un vector de expresión transfectado
mediante la catálisis de la reacción del ATP con la luciferina.

14. MES

El buffer preparado con MES (ácido 4-morfolínetanosulfónico) es útil para el cultivo celular
de plantas en el rango de pH entre 5.8 y 6.5. Es usado como fase móvil para aislar la
tubulina de cerebro por cromatografía de gel. Como otros tampones biológicos de los
denominados buffers de Good presenta alta solubilidad en agua y poca en otros disolventes,
fácil de sintetizar, es estable y tiene poca absorción en el visible.

15. Vector de expresión de proteínas fluorescentes básicas Evrogen (TagFP)

Vector de expresión de proteínas fluorescentes básicas EvrogenEl marcaje o etiquetado de

proteínas u otras biomoléculas con compuestos fluorescentes es necesario para diversos
estudios moleculares. Wako es distribuidor del vector de expresión de proteínas
fluorescentes desarrollado por Evrogen (empresa rusa liderada por científicos que se dedican
a producir productos para biología molecular y celular). Se puede realizar el etiquetado de
las proteínas de interés con otras que fluorescen a diferentes longitudes de onda, lo que
posibilita hacer estudios de localización e interacción de estas. El hecho de contar con
proteínas que fluorescen en todo el rango del espectro visible hace que se puedan marcar
diferentes estructuras subcelulares con varios colores para diferenciarlas entre sí.

16. CAPS

Se conoce como CAPS al ácido 3-(ciclohexilamino)-1-propanosulfónico, buffer utilizado en

experimentos de biología molecular, de naturaleza zwiteriónica, que puede usarse en el
rango de pH entre 7.9 y 11.1. Entre otras aplicaciones se encuentra el secado de proteínas, la
secuenciación y análisis de aminoácidos y todos aquellos experimentos donde la glicina
 puede actuar como interferente.

17. CHES

El ácido 2-(ciclohexilamino)etanosulfónico (CHES) es un tampón muy utilizado en

enzimología. Puede ser usado como buffer en el rango de pH entre 8.6 y 10, por lo que es
útil en procesos que ocurren en medio básicos o cuando se quiere estudiar un proceso
determinado a varios valores de pH para conocer su dependencia con el pH.

18. EPPS

El EPPS (ácido 3-[4-(2-hidroxietil)-1-piperazinil]propanosulfónico), también conocido

como HEPPS, tiene un pKa de 8. Es usado como buffer en la región entre 7.6 y 8.6,
comúnmente en enfoque isoeléctrico ultrafino.

19. MOPS

Se conoce como MOPS al ácido 3-(N-morfolín)propanosulfónico. Es un buffer cuyo pKa es

de 7.2, por lo que se usa en muchos experimentos biológicos que se realizan a un pH
cercano al pH neutro. Este buffer se recomienda para la electroforesis en gel de acrilamina.
Es uno de los tampones que componen la disolución de corrida para el fraccionamiento del
ARN.

20. pEBMulti

pEBMulti: reactivos de laboratorio de quimicaEl pEBMulti es un vector de expresión de

genes para ser usado en primates y también en líneas celulares provenientes de perros. Entre
las ventajas que reporta la utilización de este producto se encuentra el menor tiempo que se
necesita para lograr una línea celular estable.

Además permite la eliminación de plásmidos transfectados de las líneas celulares y no es

necesario llevar a cabo la confirmación de que el vector se ha integrado correctamente en el
genoma hospedero como en el caso de otros vectores de expresión

b. Consultar uso de los siguientes equipos y menciónelos: termociclador de tiempo real,

fotodocumentador de geles, secuenciador automático y macroarrays (microarreglos).

Termociclador es un aparato con capacidad para calentar y enfriar rápidamente las muestras, de
modo que se aprovechen las cualidades fisicoquímicas de los ácidos nucleicos y las enzimáticas de
la ADN polimerasa.

Fotodocumentador El E-Gel® Imager es un sistema compacto, asequible y fácil de usar, esta

equipado con una cámara digital de alta resolución, el sistema E-Gel ® se puede utilizar para
imagenes de geles que incorporan manchas fluorescentes (por ejemplo, bromuro de etidio y
manchas SYBR®) o manchas colorimétricos (Coomassie ™ y manchas de plata).

El secuenciador automático ABI Prism 377 es un sistema de electroforesis y detección de

fluorescencia controlado por microprocesador que se utiliza para secuenciación automática o
análisis de fragmentos empleando el método de secuenciación automática en geles
desnaturalizantes.
Microarrays es una tecnología en desarrollo para estudiar la expresión de muchos genes a la vez.
Consiste en colocar miles de secuencias génicas en lugares determinados sobre un portaobjetos de
vidrio llamado chip. Una muestra que contiene ADN o ARN se pone en contacto con el chip.

c. Consultar acerca de las señales que se deben tener en el laboratorio de genética y bilogía
molecular.

CONCLUSIONES
 En el laboratorio se debe conocer y ser consiente de cada una de las normas de
bioseguridad con el fin de evitar accidentes.

 Cuando estamos trabajando dentro del laboratorio, debemos tener las prendas adecuadas
para la labor que estamos realizando.

 La higiene es un factor importante, del cual depende el buen desempeño de las actividades
que se realizan durante la práctica.

 El conocimiento de soluciones para realizar limpieza antes y después de la práctica, nos

concientiza del peligro que podemos correr si no lo hacemos de la forma correcta.

 Prestar la debida atención a cada experimento o prácticas que se llevara a cabo, estar
concentrados.