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FACULTAD DE AGRONOMIA - UNSA

PRACTICA: Preparacin de medio de cultivo PDA


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PREPARACION DE MEDIOS NUTRITIVOS DE CULTIVO PDA
I. INTRODUCCION
Los medios de cultivo son soluciones que contienen una consistencia y propiedades para
permitir el desarrollo favorable de microorganismos, clulas y tejidos.
Estas sustancias son utilizadas en el campo de la biotecnologa, biologa y en nuestro caso la
fitopatologa para proveer a nuestros organismos un ambiente ptimo para desarrollarse y ser
estudiados, evaluados, comparados, etc
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones
extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una amplia diversidad de nichos
ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes para su desarrollo estn el carbono, el
oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del
aporte extra de factores de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de
levadura entre otros.
II. OBJETIVOS

a. Preparar un litro de medio de cultivo PDA (papa dextrosa agar).
b. Utilizar el medio PDA para la siembra de microorganismos del suelo.

III. REVISION BIBLIOGRAFICA

MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar
un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en
las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.

Segn su origen:
o Naturales
o Sintticos
o Semi-sintticos
Segn su consistencia:
o Lquidos
o Solidos
o Semislidos
Segn su composicin:
o Comunes o universales
o Enriquecidos
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o Selectivos
o Diferenciales
o De enriquecimiento
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio tenemos:
Cambio de pH: por ejemplo agregando cido actico para favorecer el crecimiento de
Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil para la mayora de las especies que crecen
entre 6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6 y S. faecalis a pH 9,6.
Cambio de temperatura: la mayora de las bacterias crece ptimamente entre 20 C y
40 C. Los cultivos tpicos de S. Faecalis requieren 60 C de temperatura y los de
Listeria son capaces de desarrollarse y crecer a 4 C.
Alteraciones osmticas: se acrecientan las propiedades osmticas un medio con el
agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la seleccin de bacterias
halfilas como Staphylococcus spp. (7,5%).
Ajuste en la tensin de oxgeno: es importante en la seleccin de aerobios y
anaerobios.
Ajuste en la tensin de anhdrido carbnico: muchos patgenos importantes pueden
ser cultivados a menos que se eleve la tensin ms all de la atmosfrica.
Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:
Antispticos: sustancias antibacterianas inespecficas que pueden actuar como
inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial S - S (Salmonella - Shigella) que
contiene verde brillante (inhibe las bacterias gram positivas) y sales biliares (que inhiben
un gran nmero de gram negativas menos enterobacterias). Otro ejemplo es el medio de
Mc Conkey que contiene cristal violeta (inhibe las gram positivas pero no las
enterobacterias)
Antibiticos: sustancias antibacterianas especficas que impiden el crecimiento de
aquellos microorganismos que no nos interesa que crezcan en ese medio. Un ejemplo
es el medio de Thayer - Martin con VCN (vancomicina, colistina y nistatina) que se utiliza
para el aislamiento de gonococos. La penicilina en una concentracin de 5,50 unidades/
ml inhibe la mayora de las gram positivas. Otro ejemplo es el medio de Sabourand -
cloranfenicol para el aislamiento de Cndida albicans.

Papa Dextrosa Agar (PDA)
Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos. Beauveria,
Paecilomyces, Lecanicillium (Verticillium) y Metarhizium, los ms importantes hongos
parsitos de insectos, al igual que los parsitos de plantas y los hongos saprofitos
crecen muy bien y esporulan en este medio. Cuando se aslan hongos a partir de
insectos colectados del suelo, es recomendable acidificar el medio con cido lctico al
25%. Se agregan 3 4 gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de evitar
el desarrollo de bacterias.
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El Papa Dextrosa Agar puede ser suplementado con antibiticos o cidos para inhibir el
crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. Tambin
puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clnica.
La infusin de papa promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el agar es
adicionado como agente solidificante.
Los medios de cultivo por ser los ms comunes en el aislamiento de hongos se clasifican de
diversa forma, as tenemos de acuerdo a su origen, que puede ser natural, sinttico y semi
sinttico
Decimos que es un medio natural cuando son preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como extractos de tejidos e infusiones y aquel medios sinttico es aquel
que contiene una composicin qumica definida cualitativa y cuantitativamente y aquel cultivo
semi sinttico son aquellos sintticos a los que se le aade factores de crecimiento.
Tenemos otro tipo de clasificacin que puede ser importante en la utilizacin de este medio en el
curso, esta clasificacin es aquella que se caracteriza por ser solida semislida y liquida.

IV. MATERIALES Y METODOS

MATERIALES

Para preparar 1 un litro de PDA
250 gr de papa.
25 gr de azcar.
25 gr de agar.
2 litros de agua destilada.
Un litro de alcohol.
Un paquete de algodn.
Un cojn de leja clorox.
Cinco botellas de vidrio que soporten esterilizacin con capacidad de 246 mL
cada una.
Para diversas actividades en la preparacin
Baguetas
Beaker
Cocina elctrica
Ollas
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Olla a presin
Bolsas de polipropileno
Colador
Balanza
METODO
1. Se colocaron a hervir las papas cortadas en pedazos con cascara (lavadas con agua
destilada) ms un litro de agua destilada por aproximadamente 30 min hasta conseguir
que la papa este cocida.
2. El lquido se decanta hacia un recipiente, del recipiente se hace colar hacia un beaker
de un litro.
3. Se agrega el azcar y el agar en el extracto an caliente para disolverlos finalmente se
agrega agua destilada hasta llegar a un litro del preparado.
4. Luego de que la mezcla est homognea se vierte en las cinco botellas para ser
cubiertas por algodn y hojas bond para lograr un sello.
5. Se colocan las botellas en bolsas de polipropileno para pasar a autoclave en la olla a
presin.
6. El autoclave o esterilizacin se hace a 121 C a una presin de 15 PSI durante 30 min
para evitar la activacin de endosporas que son resistentes al calor.
7. Se deja enfriar dentro de la olla para regular las presiones con el exterior y se retiran
para su conservacin.

V. RESULTADOS Y DISCUSIONES

RESULTADOS

La solucin preparada servir como medio de
cultivo para hongos Fitopatgenos en la misma
practica de microorganismos del suelo.
La solucin de PDA preparada ser colocada
sobre las placas Petri para la posterior instalacin
de los cultivos.


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Las cantidades a preparar deben ser
razonables y segn bibliografa.











La utilizacin del equipo adecuado
garantiza un buen resultado en este caso
una olla a presin ptima para el autoclave
del PDA




DISCUCIONES
El autoclave se realiza a tal temperatura y a tal presin como una forma de esterilizacin y
evitar la posterior aparicin de microorganismos no deseados, asegurando un medio libre
de patgenos ajenos al que se desea cultivar.
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El autoclave se realiza en una olla a presin especial capaz de soportar tal presin y
temperatura a la cual es sometida en esta actividad.
El uso de las cantidades adecuadas y el orden de stas garantiza el xito en la preparacin
del medio de cultivo en este caso PDA.

VI. CONCLUSIONES

a) Tales cantidades son recomendadas para la preparacin de un litro de solucin
PDA.
b) La preparacin de la solucin PDA lograda servir como medio de cultivo de
organismos del suelo a estudiar.

VII. RECOMENDACIONES
Toda la preparacin debe hacerse en laboratorio con las condiciones necesarias para
mantener un ambiente asptico, desinfectando todo y usando material limpio.
La consistencia que debe lograrse debe ser espesa y una coloracin clara para la correcta
observacin.

VIII. BIBLIOGRAFA

Facultad de agroindustrias, UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE,
consultado el 24 de septiembre del 2014, disponible en:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf