UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

Escuela Profesional de Ingeniería Química

INFORME N°2

“PREPARACIÓN DE MEDIOS Y SIEMBRA DE BACTERIAS”

ASIGNATURA: Laboratorio de Microbiología

GRUPO HORARIO: 91 G

DOCENTE: Herrera Sanchez Sonia Elizabeth

INTEGRANTES:

● ARRIETA ARRIETA SHANDALL

● RAMOS HUAYA ADRIANA
● REYES CÓRDOVA MAYK

● PACHECO MENDOZA ABNER

Callao, 06 de agosto del 2022

INDICE

Contenido
I. INTRODUCCIÓN.............................................................................................................................3
II. OBJETIVOS.....................................................................................................................................4
III. MARCO TEÓRICO.......................................................................................................................5
IV. EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO...............................................................................9
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL................................................................................................10
VI. CONCLUSIONES........................................................................................................................12
VII. RECOMENDACIONES................................................................................................................13
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS................................................................................................14
IX. ANEXOS....................................................................................................................................15
 I. INTRODUCCIÓN

Un cultivo es aquel que se obtiene de la multiplicación de una sola bacteria, se

supone que una colonia aislada proviene de una sola bacteria; el cultivo puro se
incrementa en un medio de cultivo apropiado. En la naturaleza las bacterias
conviven con gran variedad de otros microorganismos y solo en muy raras
ocasiones se encuentran como especie única. En muchos procesos industriales es
necesario recuperar solo el agente de interés, dentro de una flora mixta. Por estas y
otras razones, se emplean técnicas que permitan la separación de los diferentes
tipos de bacterias presentes en una muestra, así como también que permitan
evaluar la pureza de un cultivo. Solo al tener la certeza de que el cultivo está puro,
es posible realizar cualquier estudio bacteriológico. Además, los medios de cultivo
son preparaciones utilizadas para diferentes propósitos tales como: aislamiento e
identificación de microorganismos, prueba de esterilidad, análisis de agua,
ambientales, alimentos y productos bacteriológicos.
 II. OBJETIVOS

 Aplicar las técnicas básicas utilizadas en el laboratorio de microbiología,

preparación de medios de cultivo y esterilización del material de laboratorio.
 Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el
crecimiento de microorganismos en el laboratorio.
 III. MARCO TEÓRICO
3.1. Medios de cultivo

La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en

selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares, acida sódica,
telúrico potásico, antibióticos, etc., la concentración adecuada hará que actúen
como agentes selectivos frente a determinados microorganismos.

Constituyentes habituales de los medios de cultivo

 Agar

Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el
agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de
ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que, a excepción de
algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al
1-2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC,
dependiendo de su grado de pureza.

 Extractos

Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales

(carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y
posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los
medios de cultivo. Los más utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de
malta.

 Sistemas amortiguadores

Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano a veces, es
necesario añadir algunos componentes al medio de cultivo. Debido a que la mayoría
de las bacterias son neutrófilos, se suelen emplear sales del tipo de los fosfatos
disódicos ò dipotásicos u otras sustancias como las peptonas para prevenir la
desviación del pH.

 Agentes selectivos
La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en
selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares, acida sódica,
telúrico potásico, antibióticos, etc., la concentración adecuada hará que actúen
como agentes selectivos frente a determinados microorganismos.

3.2. Tipos de medios de cultivo

Medio que proporcione substancias nutritivas para los microorganismos y que les
permita desarrollarse, puede ser considerado como tal.

Se pueden clasificar en:

a) Por su origen
 Naturales: Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal,
las que son usualmente complementadas por la adición de minerales y otras
sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades
exactas presentes de cada uno de ellos.
 Artificiales o sintéticos: Son los medios que tienen una composición química
definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en
trabajos de investigación.

b) Por su consistencia:

 Sólidos: Son aquellos que se preparan a partir de los medios líquidos que
contienen un agente solidificante entre sus componentes, normalmente
agar de las cuales se preparan en placas de Petri.
 Líquidos: Se denominan caldos ya que contienen los nutrientes disueltos
en agua y se preparan en tubos o matraz Erlenmeyer.

c) Por su composición:

 Medios generales: Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran

variedad de microorganismos. Como por ejemplo el agua de peptona y el
caldo de tripticasa-soya.
 Medios de enriquecimiento: Son aquellos que favorecen el crecimiento de un
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el
crecimiento de los demás.
  Medios selectivos: Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás. Por
ejemplo, el agar contiene cristal violeta, que inhibe el crecimiento de bacterias
grampositivas y hongos, facilitando el desarrollo de las bacterias
gramnegativas.
 Medios no selectivos:Contienen suficientes nutrientes como para soportar el
crecimiento de gran variedad de microorganismos.

3.3. Almacenamiento de los medios de cultivos

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo

las condiciones que señale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar
fresco (entre 15 y 25ª) con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca
se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor.
Los medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener
la precaución de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados
para prevenir la entrada de humedad. La absorción de agua produce cambios de
pH, formación de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben
ser descartados porque pueden haber sufrido cambios químicos o estar
contaminados. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado,
puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo máximo de 2 semanas
protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 – 15ºC. Sin embargo, almacenados
bajo refrigeración entre 2 y 8ºC se prolonga la vida útil de los mismos, (nunca por
debajo de 0ºC porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se
deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratación y cuando
se usa tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura de papel
(Craft). Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de
cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en
donde se determinan sus propiedades fisicoquímicas (apariencia. pH, etc.) y
microbiológicas (esterilidad y promoción de crecimiento) verificando que cumplan
con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para
su uso.

3.4. Esterilización
Es el proceso de destrucción de toda vida microbiana. El término estéril es absoluto;
algo está estéril o no lo está. El proceso de esterilización remueve todos los
microorganismos que pueden estar presentes en los materiales y medios de cultivo.
Se puede esterilizar por varias vías: con el uso de agentes físicos (calor), radiación,
filtración o agentes químicos (desinfectantes). Se debe tener en cuenta el tipo de
material y medio de cultivo para aplicar un tipo de esterilización adecuado, este
dependerá de la sensibilidad térmica de los materiales. Todos los medios de cultivo
deben estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que
puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o
de los especímenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar
los medios de cultivo es la autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como
agente esterilizante) aplicando 121°C por 15-20 minutos a una presión de 1
atmósfera (15 PSI).
IV. EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

PLACAS PETRI

VASO PRECIPITADO

AGITADOR MAGNETICO

VARILLA

AGAR EN POLVO

PICETA CON AGUA DESTILADA

 V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 Pesar la cantidad de medio (si el preparado contiene agar debemos añadirlo
a una concentración de 15 g/L.) y rehidratarlo con agua destilada en una
botella.

 Autoclavar la botella sin cerrar totalmente el tapón de rosca.

 Sacar del autoclave, enroscar del todo el tapón e introducir la botella a
calentamiento apoyándonos de un agitador magnético y una bagueta para
llegar a temperaturas de 55-60 ºC ( temperatura a sembrar) al menos durante
30 minutos.
 Distribuir el medio en las placas de Petri que están estériles dentro de una
campana de flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien
la boca de la botella para evitar las contaminaciones.

 Dejar que el medio solidifique, siendo el inóculo el medio ambiente.

 VI. CONCLUSIONES

 Los microorganismos como las bacterias requieren medios de cultivos

especiales (selectivos), por lo que no se las puede sembrar en cualquier
medio de cultivo.
 Para realizar un cultivo, se debe de tomar muchas precauciones de limpieza,
orden y asepsia necesaria para evitar contaminar los cultivos.

 VII. RECOMENDACIONES
 Evitar que el medio de cultivo se riegue por todas las paredes de la placa
Petri, ya que, al solidificarse por los bordes de la placa, pueden presentar
errores al momento de contar las colonias.
 Seguir las instrucciones de preparación que indica el productor del medio de
cultivo a preparar.
 Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para
evitar su deshidratación y/o contaminación propia del ambiente.
 VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos

Generales (segunda edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central de
Venezuela.

Krikorian, A. D. (1991). Medios de cultivo: generalidades, composición y

preparación. Cultivo de tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones. Cali:
CIAT, 41-77.

Mondino, P. (2009). Preparación de medios de cultivo. Métodos en Fitopatología.

Romero, E., Cobo, J., Melendres, K. P., Polo, L. Á. T., & General, M.
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MANEJO DEL AUTOCLAVE.

Bacteriological agar, Merck https://www.sigmaaldrich.com/PE/es/product/sial/a5306?

gclid=Cj0KCQjw39uYBhCLARIsAD_SzMTlQJqhOS22OxEPAeGbqmdCN2eLIlZd_-
c2ZXNfTDz5811xscXtdj0aAh50EALw_wcB

El moho en los medios de cultivo https://www.bvb-substrates.nl/es/referencias-y-

soporte/el-moho-en-los-medios-de-cultivo/
 IX. ANEXOS
Cuestionario
1. ¿Qué cuidados deben tenerse al preparar un medio de cultivo sólido en caja
de Petri?

-Primero debemos limpiar bien nuestro espacio de trabajo, convenientemente con

lejía diluida en agua.

-Segundo debemos tener las manos bien limpias y con los guantes puestos, porque
si no se tiene ese cuidado se puede contaminar de otras bacterias que no son parte
del cultivo.

- Tercero, debemos asegurarnos que la caja de Petri este totalmente esterilizada,

para tener los datos exactos del cultivo al momento de contabilizar.

-Cuando se coloca el cultivo, debemos poner en el centro de la caja Petri ya que, si

el cultivo se coloca por el borde de la placa, las bacterias se desarrollaran, pero en
el borde y como consecuencia estas no se podrán ver, teniendo así errores en la
lectura de las colonias.

- Colocar el correcto etiquetado, preferentemente al borde de la placa Petri, para

evitar confusiones con placas de otros grupos.

2. ¿De los siguientes medios, mencionar en qué consiste su capacidad

diferencial o selectiva y qué tipos de microorganismos crecen en ellos? Agar
Rosa de Bengala y Agar Papa Dextrosa.

AGAR ROSA DE BENGALA AGAR PAPA DEXTROSA

Composición - Agar 15.00
(g/L) - Dextrosa 10.0
- Peptona micológica 5.00
- Fosfato monopotásico 1.00
- Sulfato de magnesio 0.50
- Rosa de bengala 0.05
- Agua destilada 1L
- papa 4.00
-dextrosa 20.00
-Agar en polvo 15.00

Usos -Se utiliza para el aislamiento -El agar de papa y dextrosa es

 selectivo y la enumeración
de levaduras y mohos de
materiales y alimentos
ambientales
el medio más utilizado para el
crecimiento de hongos y
levaduras que atacan a las
plantas vivas o materia vegetal
muerta en descomposición.

3. ¿Cuál es la función de los colorantes e indicadores en los medios de

cultivo?

Son usados en los medios selectivos y diferenciales. Los colorantes actúan como
agentes bacteriostáticos o como inhibidores del crecimiento. Se utilizan
principalmente: Fucsina básica, Verde brillante, Verde de Malaquita, Cristal Violeta,
Eosina, Azul de Metileno, Tionina, etc.

Los indicadores son sustancias químicas que varían de color según el pH del medio.
Se utilizan en los medios diferenciales y permiten visualizar, por cambios de color
del medio de cultivo o de las colonias, la ocurrencia de distintas reacciones
bioquímicas.

4. De los medios usados indica cuáles son específicos para mohos y cuáles
para bacterias y ¿por qué?

Para los mohos el medio usado es el Agar Sabouraud Glucosado, porque al ser un
agar peptona suplementado con dextrosa, las peptonas proporcionan compuestos
nitrogenados y la glucosa proporciona la fuente de energía, promueven el
crecimiento moho.

Para las bacterias como la listeria, enteroccocus, el medio usado es el Agar Base
Sangre por contener el 5% de sangre bovina que favorece el desarrollo de este tipo
de bacterias.
5. Cuando se siembran hongos en medio líquido, describe cómo es el
crecimiento con y sin agitación.

En un medio líquido con agitación el crecimiento se ve con turbidez, mientras que en

un medio líquido sin agitación el crecimiento se puede ver en ciertas partes dentro
del medio líquido como grumos.

6. ¿En qué casos se siembra en medio semisólido y cuáles son las

precauciones que se deben tomar?

Se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor porcentaje

de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura ambiente.

Las precauciones que se debe tomar es que el material destinado a cultivo no debe
estar en contacto con sustancias desinfectantes o anestésicas, siempre que sea
posible.

7. Anota la morfología colonial de un moho y de una bacteria, indicando de

que medio lo obtuviste.

Los mohos forman túbulos cilíndricos y ramificados denominados hifas, poseen un

diámetro de 2 a 10 µm y crecen por extensión en longitud desde el extremo de un
filamento, así se forma una masa de hifas entrelazadas denominada micelio. Se
pueden obtener en el medio de Agar Sabouraud.

Las bacterias pueden presentar ciertas variaciones morfológicas, entre estas se

encuentran las que tienen forma de estrella, las planas, rectangulares, las alargadas
en forma de pera y por último aquellas que forman pedúnculos no celulares como
cocos. Se obtienen a partir del Agar base sangre.