Laboratorio de Microbiología

Facultad de Ingeniería Civil y Ambiental – FICA

Escuela de Formación de Tecnólogos - ESFOT

Práctica Nº 4 Medios de Cultivo

Elaborado: JC 20210508
Revisado: PM 20210525
Aprobado: AB

Medios de Cultivo
Objetivo general:
Preparar diferentes tipos de medios de cultivo, siguiendo los protocolos del laboratorio de
microbiología y entendiendo su importancia.

Objetivos específicos:
 Comprender el concepto de medio de cultivo en microbiología, así como sus usos en el
laboratorio.
 Preparar medios de cultivo con diferente estado físico y explicar la diferencia en el
procedimiento de preparación.

Marco teórico:
Un medio de cultivo es una mezcla de compuestos orgánicos e inorgánicos disueltos en agua que
sirven para el crecimiento de bacterias. Es decir, es un conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de los microorganismos es muy amplia; por ello, la
variedad de medios de cultivo es también muy grande, no existiendo un medio de cultivo universal
adecuado para todos ellos. No todos los medios de cultivo son iguales, ni todos los microorganismos
pueden crecer en todos los medios de cultivo.
Un medio de cultivo está constituido por una mezcla de agua y sustancias orgánicas e inorgánicas,
los que en conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los
microorganismos.
Además, existen diferentes tipos de medios de cultivo

 De acuerdo a su estado físico: sólidos, semisólidos o líquidos.

 De acuerdo a su composición: en medio sintético y en medio complejo.
Un medio mineral o basal se trata de un medio que sólo contiene compuestos inorgánicos. Con la
adición de una fuente de carbono orgánica a este medio mineral se tiene un medio mínimo. Un
medio rico es aquel medio con todos los tipos de requerimientos nutritivos (fuente de carbono,
nitrógeno, fósforo, azufre, sales minerales y factores de crecimiento).
En cuanto a la preparación de los medios de cultivo, los microorganismos son seres ubicuos que han
colonizado todos los tipos de ecosistemas: el agua, el suelo, el aire u otros organismos. Por ello
todas las manipulaciones para conseguir cultivos puros se deben realizar en un ambiente estéril que
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impida el acceso al medio de otros microorganismos diferentes a los que se desea aislar. Los
recipientes más utilizados en el crecimiento de microorganismos son los tubos de ensayo, los
matraces (ambos para los medios líquidos) y las cajas Petri (para los cultivos sólidos y semisólidos).
En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados y su preparación
consiste en pesar la cantidad deseada del mismo, redisolverlo en agua destilada siguiendo las
instrucciones del fabricante y esterilizarlo. Las sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y
se añaden al resto de componentes previamente esterilizados en autoclave. Antes de su
esterilización, los medios líquidos en caldo se distribuyen en los recipientes adecuados (tubos o
matraces). Si es un medio sólido, habitualmente se procede a fundir el agar en un baño maría antes
de esterilizarlo. Una vez fundido, se distribuye en caliente en tubos o matraces (no en cajas Petri),
se tapa y se esteriliza.
Además, cuando se prepara un medio de cultivo añadiendo cada una de sus partes, se debe
controlar el pH de acuerdo a normas estandarizadas mediante la aplicación de soluciones tampón.
En el caso de los medios prefabricados por casas comerciales solamente es necesario comprobar el
pH, pues este ya ha sido ajustado previamente.

Equipos, materiales y reactivos:

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS

•Cajas Petri
•Balanza •Tubos de ensayo •Agar nutritivo
•Autoclave •Cuchara •Agua de peptona
•Plancha de calentamiento •Matraces Erlenmeyer •Agua destilada
•Mechero Bunsen •Pipetas •Agua de llave
•Cabina de flujo •Papel de empaque o
aluminio
•Algodón o tapas
•Funda plástica
•pHmetro
•Gradilla
•Dispensador
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Procedimiento:

1) Medio de cultivo líquido

 Tener listo y esterilizado el material de vidrio e instrumental a utilizar.
 Calcular la cantidad necesaria para preparar 100 mL de caldo del medio de cultivo
deshidratado (las cantidades son descritas por cada casa comercial).
 Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado. Esta operación debe ser rápida para
evitar que la humedad del ambiente no afecte el resto del contenido del frasco.
 Disolver el medio en aproximadamente 50 mL de agua destilada en un matraz con un
volumen mayor a 100 ml, y una vez disuelto completar el volumen con los 50 ml faltantes
con agua destilada.
 Verificar las recomendaciones de esterilización del fabricante, pues podría variar según el
medio empleado. Para esta práctica el fabricante pide repartir los medios en los recipientes
antes de su esterilización. Los medios líquidos se deben distribuir en tubos o matraces con
ayuda de pipetas o probetas. Los tubos o matraces se tapan con algodón o tapas y se
recubren con papel de empaque o aluminio para su esterilización en la autoclave.
 Después de la esterilización, comprobar el pH según lo que indique la casa comercial. Se
debe haber separado previamente un tubo para usarlo en la comprobación de pH.
 Los tubos con medio líquido se dejan enfriar en una gradilla. Los caldos pueden conservarse
en refrigeración bien tapados.

2) Medio de cultivo sólido

 Tener listo y esterilizado el material de vidrio e instrumental a utilizar. Los medios líquidos
no llevan solidificantes y sus componentes se disuelven en agua destilada. En cambio, los
medios sólidos llevan un agente solidificante siendo el más utilizado el agar. Estos medios
deben fundirse en agua hirviendo hasta su fase líquida.
 Calcular la cantidad necesaria para preparar 100 mL de medio de cultivo sólido
deshidratado, según las indicaciones de la casa comercial.
 Disolver según las indicaciones del fabricante, la cantidad del medio a elaborar en un matraz
con un volumen mayor. Para preparar medios de cultivo sólidos añadiendo cada una de sus
partes, el agar debe ser añadido al final.
 Verificar el pH según las indicaciones del fabricante. Se debe haber separado previamente
un envase para usarlo en la comprobación de pH. Empaquetar y esterilizar.
 Después de la esterilización, si se van a verter en cajas Petri hay que dejar enfriar los
matraces, para ello es conveniente dejar los matraces en un baño a 50 ℃ aproximadamente.
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 El llenado se debe realizar cerca de la llama del mechero. La manera de realizar el

vertimiento sobre las cajas es apilar las mismas y, cerca del mechero ir vertiendo el medio
en estado líquido.
 Finalmente, cuando se haya solidificado el medio, las placas se conservan en posición
invertida en una funda plástica hasta su posterior uso.

Preguntas para el análisis de los resultados obtenidos:

 ¿Cuál es el punto crítico para preparar un medio de cultivo sólido?
 Discuta los cálculos para preparar los medios de cultivo en diferentes estados físicos

Bibliografía:
 Domenech, A., Ramírez, A., López, A., & Oliver, A. (2010). Microbiología (Guión de Prácticas).
Prácticas De Microbiología, 1, 1–45.
http://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/practicas.pdf
 Martin, R. (2013). Esterilización y preparación de medios de cultivo. 1–12.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/P2.MediosCultivoEsterilizacion_20891.pdf
 Microbiolog, I. (2013). Guía de Prácticas Microbiológicas aplicadas a laboratorio. 1–12.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolo2_3_19088.pdf
 Sanz, S. A. (2011). Prácticas de Microbiología. Universidad de la Rioja.