Instituto Tecnológico de Sonora

ITSON

Departamento de biotecnología y ciencias alimentarias

Laboratorio de microbiología

Reporte No.4:

“Preparación y esterilización de medios de cultivo”

Equipo #2:

Rosa María Vasquez Espinoza 00000230407

Axtrid Alicia Bustamante Brambila 00000219080

Monica Michelle Borbón Gamez 00000

Patricia Jaqueline Servín Agramon 00000

Maestro encargado:

Dante Alejandro Ruiz Vega

Materia:

Laboratorio de microbiología general

Clase:

Miércoles 1:00 p.m.- 4:00 p.m.

Cd. Obregón, Sonora.

Objetivo.

Conocer los medios de cultivo que frecuentemente se utilizan para el crecimiento de

microorganismos, así como su composición y forma de preparación.

Introducción.

El estudio de algunos procesos bioquímicos fundamentales de las células se ha

realizado en microorganismos debido a que son fáciles de cultivar en el laboratorio
bajo condiciones controladas que permiten verificar sus características en
generaciones sucesivas en tiempos relativamente cortos.
Para cultivar los microorganismos en el laboratorio es necesario conocer los
requerimientos nutricionales de cada cepa en particular y controlar factores físicos
como temperatura y pH (la mayoría de las bacterias pueden crecer a una temperatura
de 30°C o más, aunque algunas cepas se alejan mucho de este rango); el rango normal
del pH tolerado es de 5 a 8; para controlar el pH se usan generalmente medios de
cultivo regulados.
Todas las células requieren para su crecimiento normal de agua, una fuente de
carbono, de nitrógeno, azufre, fósforo, energía y sales minerales en pequeñas
cantidades como sodio, potasio, calcio, magnesio; tanto los microorganismos como
las plantas requieren que estos nutrientes estén en solución para poderlos asimilar. Por
ello se debe seleccionar el medio de cultivo de tal manera que contenga los elementos
necesarios para el adecuado crecimiento de la cepa que se desea.
Los medios de cultivo se han clasificado de acuerdo con su composición química y el
uso a que se destinan en: enriquecidos, selectivos, diferenciales principalmente. O
bien considerando su consistencia se clasifican en: sólidos, semisólidos y líquidos.
En la preparación de medios de cultivo existen algunos materiales de uso muy común
como son las peptonas, el extracto de carne, extracto de levadura y el Agar. Estos
materiales, nutrientes para la célula, hacen posible el desarrollo de una gran cantidad
de microorganismos.
El caldo nutritivo y el Agar nutritivo son ejemplos de medios de cultivo líquido y
sólido que permiten el desarrollo de muchos tipos de microorganismos heterótrofos.

Materiales y equipos.

Material
-Medios de cultivo (agar nutritivo,
caldo nutritivo, agar dextrosa de
papa, agar extracto de
malta, agar endo, agar Kligler, agar
citrato de Simmons, caldo
lactosado, medios SIM).
-Mecheros.
-Tripie.
-Tela de asbesto.
-Matraces.
-Espátulas.
-Balanza analítica.
-Balanza semianalítica.
-Autoclave.
-Algodón.
-Aluminio.
-Tela gasa.
 Diagrama de flujo.

Medios de cultivo.

Técnica para preparar

medios de cultivo.

Según las instrucciones de cada uno de los medios de cultivos, tomar la parte proporcional de éste y disolverlos
en agua destilada, mezclar hasta obtener una suspensión uniforme, calentar agitando frecuentemente. (Si es agar
o medio, los caldos solo disolver agitando), hervir durante un minuto.

Tapar el matraz con

algodón de tal manera que
quede firme, cubrirlo con
papel aluminio y colocar
cinta testigo.

Esterilizar en autoclave a
una temperatura 121°C o
15psi por 15 minutos (o
la temperatura indicada
para el medio).

Sacar el medio de la
autoclave, enfriar a una
temperatura
aproximadamente a 45°C,

Vaciar en placas hasta la altura

indicada (aproximadamente 15 a 20
minutos), tapar y dejar solidificar.
Cuestionario.

1. Explique concretamente a qué se llama medio de cultivo.

Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permite el crecimiento de microorganismos.
2. Defina medio sintético y medio no sintético. Dar cinco ejemplos de cada uno.
Sintético: se utiliza para realizar estudios metabólicos.
No sintéticos: se les añade factores de crecimiento bajo una forma de un
extracto orgánico complejo.
3. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de emplear medios de cultivos sintéticos
y no sintéticos?
Ventaja: permite que crezcan bacterias que se encuentran en poca cantidad.
Desventaja: Exceso de sustancias naturales.
4. Cite algunas propiedades de Agar-Agar y la gelatina.
Facilita y regular el tránsito intestinal. Aporta minerales. Ayudas a eliminar la
acidez estomacal. Es saciante.
5. Indique un método para ajustar el pH de un medio de cultivo.
Tomar una alícuota de 50 ml, medir el pH y ajustar usando HCl 0, 1N o NaOH
0, 1N. Al resto del medio usar la solución con 1N.5.
6. Indique las propiedades químicas de las peptonas, extracto de carne, extracto
de levadura.
1. Hidrosoluble de polipéptidos, péptidos, aminoácido. 2.Hisrosoluble de la
carne.
7. ¿Cuáles son los ingredientes del Agar nutritivo y qué tipo de nutrientes
proporcionan para el desarrollo de los microorganismos?
.5% de peptona, 0.3% de extracto de carne/ extracto de levadura, 1.5% de agar,
0.5% de cloruro de sodio, agua destilada y el pH casi neutro (6.8) a 25°C.
8. Indique las diferencias entre un medio de cultivo enriquecido, selectivo y para
pruebas bioquímicas.
Enriquecidos: son aquellos que favorecen el crecimiento de unos determinados
microorganismos.
Selectivo: Inhibiendo el desarrollo de los demás.
9. ¿Qué precauciones se deben considerar en la preparación y esterilización de
los medios de cultivo?
Se deben mantener en recipiente bien cerrado para evitar su deshidratación y
cuando se usa el tapón de algodón, se debe colocar por encima una envoltura
de papel (craft).
Conclusiones.

Los medios que contienen agar deben empaparse adecuadamente con la agitación
apropiada antes de calentar. El pH debe ajustarse, y el medio dispensarse en los
recipientes apropiados para esterilización con calor húmedo en una autoclave. La
contaminación del tejido vegetal y del medio de cultivo es
causada por microorganismos, en su mayoría hongos y bacterias, que encuentran en
los medios nutritivos el ambiente adecuado para su desarrollo. La presencia de
microorganismos afecta los resultados o incluso mata al tejido vegetal cultivado in
vitro.

Bibliografía.

WebMaster. (n.d.). Método para la esterilización de medios de cultivos utilizado en

la micropropagación comercial de plantas. Colpos.mx. Retrieved April 25, 2022,
from: http://www.colpos.mx/wb/index.php/notas-informativas/metodo-para-la-
esterilizacion-de-medios-de-cultivos-utilizado-en-la-micropropagacion-comercial-
de-plantas
Neal, J. D. (1973). Microbial culture media preparation. Laboratory Practice, 22(6),
477-9 passim: https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/applications/microbiological-
testing/microbial-culture-media-preparation
(N.d.). Ucv.Ve. Retrieved April 25, 2022, from:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Prepa
raci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf