BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES

LAB. DE MICROBIOLOGÍA
NRC. 54108. SECCIÓN: 05L

PRÁCTICA N° 4 Y 5: MEDIOS DE CULTIVO Y

ESTERILIZACIÓN

INTEGRANTES
AVENDAÑO LÓPEZ ROMINA
DOMÍNGUEZ HERNÁNDEZ LUZ ANGÉLICA
LÓPEZ PÉREZ DULCE MICHELLE
RAMÍREZ VÁZQUEZ LESLIE
VÁZQUEZ SALVADOR DANA VANESA

FECHA DE ENTREGA: 09 DE FEBRERO DE 2023

 PRÁCTICA 4 Y 5: MEDIOS DE CULTIVO Y ESTERILIZACIÓN
Los microorganismos no se pueden estudiar como individuos únicos, por tal
motivo se necesitan realizar cultivos de éstos, para que así podamos
reproducirlos y manejar poblaciones las cuales permiten con más facilidad su
estudio. Para ello es necesario el uso de medios en los cuales dichos seres
estén con todos los nutrientes y factores que necesitan para desarrollarse; sin
embargo, para poder llevar a cabo esto no solo es necesario proveerlos de
lo que necesitan, sino también eliminar a todos aquellos microorganismos
que pudieran ser competencia y afectaran el crecimiento de nuestro
microorganismo de interés, por tal motivo se requiere de mecanismos de
control y esterilización que nos garanticen lo anterior.
Es importante conocer ambos que es un medio de cultivo y que es la
esterilización en los laboratorios de microbiología.
Un medio de cultivo es una preparación que puede ser natural o artificial, que
les proporciona a los microorganismos los nutrientes necesarios para su
crecimiento y multiplicación. Deben poseer condiciones ambientales
adecuadas como pH, presión osmótica, temperatura, aireación, etc. Es decir,
un medio de cultivo se utiliza para crear ambientes adecuados para la siembra
de microorganismos específicos que se desean estudiar.
Los medios de cultivo se pueden clasificar según el estado físico, su
composición y la función. Por su estado físico los clasificamos como sólidos,
semisólido y líquidos, por su composición se clasifican en definidos y
complejos y, por último, por su función en: generales, selectivos, diferenciales
y de enriquecimiento.
La esterilización es el proceso en el que se eliminan todas las formas de vida
microbianas a partir de la muerte. En otras palabras, en la esterilización se
realiza la eliminación de microorganismos mediante calor, radiación,
filtración o bien mediante el uso de compuestos químicos. El proceso de
esterilización se lleva a cabo en los procedimientos quirúrgicos y en los
laboratorios de microbiología.
En este último, esterilizar es de mucha importancia para poder analizar,
estudiar y observar gérmenes puros, eliminando cualquier tipo de vida
microbiana que no se quiera observar. Existen diversos métodos de
esterilización, se dividen en dos tipos: físico y químico.
Glosario:
-Medio de cultivo. Es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y
se multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar
diferentes especies bacterianas, con el fin de identificarlas y realizar estudios
complementarios.
-Esterilización: Proceso de destrucción o remoción de todas las formas de vida
microbiana (bacterias, hongos y virus) patógenas o no, tanto en su forma
vegetativa como esporulada de un material o un objeto.
- Agar: Agente gelificante en los medios de cultivo microbiológicos constituido
por polisacáridos de algas rojas.
- Inoculación: Introducción de un microbio.
- Inhibición: Prevención del crecimiento o multiplicación de los microbios.
- Incubar: Colocar los cultivos microbianos en condiciones favorables
(especialmente la temperatura) para su crecimiento.
-Inducción: Aumento de la velocidad de síntesis de una enzima debido a la
presencia del sustrato específico en el medio.
- Autoclave: Un recipiente metálico de paredes gruesas con un cierre
hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción
industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua.
- Cepa microbiana: Colonia microbiana procedente de un solo germen, y
multiplicado por pases sucesivos en diferentes medios de cultivo. Tienen el
mismo patrimonio genético.
- Cultivo in vitro: Cultivo en un medio nutritivo, en condiciones estériles, de
plantas, semillas, órganos, tejidos, células y protoplastos de plantas superiores.
- Desinfección: proceso físico o químico que mata o inactiva agentes
patógenos tales como bacterias, virus y protozoos impidiendo el crecimiento
de microorganismos patógenos en fase vegetativa que se encuentren en
organismos vivos.
- Metabolito: Es una sustancia producida por cambios biológicos sobre un
producto químico.
- Muestra: Parte representativa de la materia objeto del análisis.
- Vertido: Deposición de los residuos en un espacio y condiciones
determinadas.
-Punto crítico: Fase en la que puede aplicarse un control y que es esencial para
prevenir o eliminar un peligro relacionado con la inocuidad del proceso.
Objetivo:
Aprender a preparar el material necesario para el uso en el Laboratorio de
Microbiología
Aprender a preparar correctamente los diferentes medios de cultivo (líquido,
semisólidos y sólidos) para el uso en el laboratorio de Microbiología
Material:
➢ Algodón
➢ Jeringas
➢ Mechero
➢ Medios de cultivo en polvo
➢ Probeta
➢ Balanza
➢ Espátula o cuchara
➢ Parrilla de calentamiento
➢ Guantes para calor
➢ Aplicadores
➢ Papel manila, de estraza o aluminio
➢ Tubos de ensaye
➢ Frascos de vidrio de aproximadamente 200 ml
➢ Ligas
Protocolo:
Prepara diferentes materiales que se utilizan para el aislamiento de los
microorganismos.
Se prepararán 3 tipos de medios de cultivo, los cuales serán medios sólidos,
medios líquidos y caldos.
Nota: Utiliza un recipiente de volumen 2.5 veces mayor al que se va a preparar
(matraces, vasos de precipitado o frascos de vidrio de jugo)
1. Agar para métodos estándar: pesar 2.35 g se agar en polvo
2. Diluir con 100 ml de agua destilada, tapar y mover ligeramente hasta que se
disuelva por completo el agar en polvo
3. Cerrar con su tapa del frasco sin hacer presión y colocar un capuchón de
papel o aluminio, posteriormente reforzar con una liga.
4. Si es necesario calienta el medio, este calentamiento debe ser paulatino y
agitando continuamente, evita el calentamiento prolongado.
5. Si el medio liquido o semisólido se prepararán 12 ml del medio
6. Se verterán 3 ml en 4 tubos de ensaye, posteriormente, taparlos (torundas
de algodón) y meterlos en una rejilla o bote, taparlo y luego esterilizar en la
autoclave.
7. Procede a esterilizar el material y medios de cultivo para su posterior
utilización.
8. Verifica el nivel de agua de la autoclave.
9. Introduce a la autoclave los matraces con los medios de cultivo
perfectamente cubiertos con un tapón de algodón y una cubierta de papel, (en
el caso de esterilizar medios de cultivo en tubos con tapón de rosca, estos no
deben estar COMPLETAMENTE tapados y cerrados, junto con el material
que se utilizará para la práctica.
10. Cierra la tapa de la autoclave y esperar que se sature de aire caliente antes
de poner válvula de presión.
11. Esteriliza a 121°C (15 lb/pulg2 de presión) por 15 min.
12. Deben incluirse controles de esterilización para autoclave.

Metodología:
Resultados:
En este caso se prepararon 3 medios de cultivos en donde estos eran líquidos
y sólidos:
• Caldo nutritivo
Lo preparo el equipo 2 y 4 de una cantidad de 12 ml:
8 g por cada litro, entonces:
8 𝑔 → 1000𝑚𝑙
𝑥 𝑔 → 12𝑚𝑙 = 0.096 𝑔 ≈ 0.1 𝑔
Tiene como características:
 Es un medio liquido
 Utilizado para propósitos nutricionales, para el desarrollo de
microorganismo con escasos requerimientos nutricionales
 Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que
constituye una fuente de HC y N necesarias para el desarrollo
adecuado bacteriano.
 Puede ser utilizado, además, como preenriquecimiento en la
búsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que permite
recuperar células dañadas, diluir metabolitos tóxicos y sustancias
inhibitorias.
 Ingredientes:
 Pluripeptona: 5.0
 Extracto de carne: 3.0
 pH final: 6.9 ± 0.2
• Método estándar
Lo preparo la mesa 1, se preparó 100 ml
23.5 g por cada litro, entonces:
23.5 𝑔 → 1000𝑚𝑙
𝑥 𝑔 → 100𝑚𝑙 = 2.35 ≈ 2.4 𝑔
Este medio de cultivo se utiliza para cuenta microbiana total en la leche,
para la cuenta de bacterias de interés sanitario, que son indicadores de
contaminación o biocarga en alimentos, agua, agua residual y productos
lácteos. También se conoce como Agar para Cuenta en Placa. En este
medio la peptona de caseína proporciona los aminoácidos, el nitrógeno
y otras sustancias necesarias para el crecimiento de los
microorganismos. La vitamina B es proporcionada por el extracto de
levadura. La dextrosa provee la fuente de carbohidratos. El Agar es el
agente solidificante.
Los ingredientes de este medio de cultivo son:
 Peptona de caseína: 5.0 g
 Extracto de levadura: 2.5 g
 Dextrosa: 1.0 g
 Agar Bacteriológico: 15.0 g
 pH 7.0 ± 0.2 a 25°C
• MIO
En este caos este medio de cultivo se encargo el equipo 1 y 3 para su
preparación, en este caso se preparo 12 ml, donde:
31 g por cada litro, entonces:
23.5 𝑔 → 1000𝑚𝑙
𝑥 𝑔 → 100𝑚𝑙 = 2.35 ≈ 2.4 𝑔
Características:
 Es un medio de cultivo de tipo sólido.
 Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia
Enterobacteriaceae en base a la movilidad
  Altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura,
peptona y tripteína
 Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo,
libre deslizamiento.
 Medio de cultivo preparado: color púrpura ligeramente
opalescente
Ingredientes:
 Lucosa: 1.0 g
 Extracto de levadura: 3.0 g
 Peptona: 10.0 g
 Tripteína: 10.0 g
 Clorhidrato de l-ornitina: 5.0 g
 Púrpura de bromocresol: 0.02 g
 Agar: 2.0 g
 pH final: 6.5 ± 0.2

Ilustración 1. Medio de cultivo MIO y caldo nutritivo

Discusión:
Antes de identificaron los medios de cultivo que se emplean para diferentes
fines en el área de microbiología, así como logramos realizar una buena
preparación de nuestros medios, puesto que serán técnicas que seguiremos
usando durante el resto del curso para diferentes fines, conociendo los
métodos de preparación de los diferentes medios de cultivo, debido a que no
siempre vamos a requerir de una sola técnica para
Conclusión:
Finalmente podemos decir que es importante hacer una buena preparación de
los medios de cultivo, con los cuales podemos hacer diferentes tipos de
crecimiento de microorganismos que necesitemos para diversas
investigaciones o prácticas, además de realizar una correcta esterilización de
los materiales y de los medios a usar para la eliminación de restos microbianos
que pudieron quedar en los medios de cultivo, en esta práctica logramos hacer
la preparación de medios de cultivo sólido y líquido logrando los resultados
que necesitemos.

Referencias:
Prats G., Microbiología Clínica, 1ª ed.; Panamericana: Argentina, 2005; pp. 106
Ramirez, G., et.al., Manual de Prácticas de Microbiología General, Facultad de Química, UNAM:
México, 2011; pp.55-59, 62-69.
Madigan, M., et.al, Brock. Biología de los Microoorganismos, 10a ed.; Pearson: España, 2004;
pp. 107-109,688-694
Rojas Valenciano, L. (2010). La Educación Prenatal: Una Mirada Desde La Educacion
Para La Salud. Enfermería actual en Costa Rica, 19, 1–
45.https://doi.org/10.15517/revenf.v0i19.3643
Pérez-Uz, B. (2011, 6 octubre). Metodología De Esterilización En El Laboratorio Microbiológico
|Pérez-Uz| REDUCA (Biología).
http://www.revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/818/833
Nutritivo Caldo. (s. f.). Britanialab.com.
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070769bd7fef.pdf
MIO Medio. (s. f.). Britanialab.com.
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070743f4ed75.pdf
Agar para Métodos Estándar. (s. f.). mcd.com.mx. https://expo.thefoodtech.com/wp-
content/themes/summit-expo/directorio/assets/fichas/8f309878-65c5-4ae4-9dcd-
cdd2afea2796.pdf