AREA: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

DOCENTE: MAGALY VARGAS CORONEL

NRC: 18409
INTEGRANTES

MAYDA MEDRANO HUAMANI (100%)

GLADYS SHEYLA MOLLOCAHUANA PATIÑO (100%)
GUSTAVO ADOLFO ALMANZA QUISPE (100%)
RAUL FERNANDO TICONA OCHOCHOQUE (100%)
HENRY PAUL HUANCA ADCO (100%)

TEMA

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Resumen: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios
de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos,
ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad.

INTRODUCCIÓN.
Son sustancias nutritivas líquidas o sólidas, que se utilizan en el laboratorio para el
crecimiento de los microorganismos, pudiendo ser similares a sustratos naturales, en los
cuales estos crecen normalmente. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Los microorganismos necesitan de condiciones bioquímicas y biofísicas
apropiadas para su desarrollo. El principal objetivo de los medios de cultivos es crear un
ambiente adecuado para el crecimiento, simulando las condiciones lo más cercanas posibles
a las naturales, asegurando así el apropiado funcionamiento de la maquinaria enzimática de
los microorganismos (1), lo cual implica un adecuado balance de los componentes. Teniendo
en cuenta los requerimientos de cada microorganismo en particular y de los fines del
investigador, se ha desarrollado una gran variedad de medios de cultivo con diferentes
propósitos y usos. El éxito del diseño y la formulación de medios de cultivo para procesos
microbianos, está muy relacionado con la aplicación de conocimientos básicos acerca de los
microorganismos y sustratos. Para el desarrollo de un medio de cultivo es necesario
seleccionar adecuadamente los componentes a usar. Esto incluye la selección del tipo y la
concentración de los diferentes nutrientes, como son: fuente de carbono, energía, nitrógeno,
fósforo, factores de crecimiento, entre otros, también de condiciones tales como
concentración de oxígeno, temperatura y pH.

OBJETIVO.

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los
microorganismos.

2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio

de microbiología.

3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. Adquirir la idea de

la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas más comunes para
realizarlo.
MARCO TEÓRICO.
1.Definición de Medio de Cultivo: Un medio de cultivo es una mezcla de nutrientes que
permite el crecimiento de microorganismos en un ambiente controlado.

2. Tipos de Medios de Cultivo: Existen varios tipos, como los medios selectivos, diferenciales
y enriquecidos. Cada uno tiene un propósito específico y se utiliza para cultivar diferentes
tipos de microorganismos.

3. Componentes de un medio de cultivo: Los ingredientes pueden variar, pero generalmente

incluyen una fuente de carbono (como glucosa), una fuente de nitrógeno (como peptonas),
sales minerales, vitaminas y agua.
 4. Proceso de Preparación: La preparación de un medio de cultivo implica mezclar los
ingredientes en las proporciones correctas, disolverlos en agua, y luego esterilizar la mezcla
para eliminar cualquier organismo indeseable.

5. Esterilización: La esterilización se realiza generalmente en un autoclave, que utiliza calor y

presión para matar cualquier microorganismo presente.

6. Uso de Medios de Cultivo: Una vez preparado y esterilizado, el medio de cultivo se puede
utilizar para cultivar microorganismos. Esto puede implicar la inoculación del medio con una
muestra, y luego la incubación a una temperatura específica para permitir el crecimiento.

PROCESO DE EXPERIMENTACIÓN.
COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: Sus componentes básicos deben satisfacer
las mínimas exigencias nutricionales para el desarrollo microbiano y varían según el tipo de
bacteria. Incluyen: agua, nutrientes como fuentes de nitrógeno, carbono y energía; y en
ciertos casos, factores de crecimiento. Se considerarán además para el crecimiento,
necesidades de O2 (aerobios), CO2 parcial (microaerófilos) o total (anaerobios) y
condiciones óptimas de pH y temperaturas de incubación. Los constituyentes habituales de
los medios de cultivo son:
1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacárido que se obtiene de ciertas
algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo. Se licúa completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40°C.
2. Azúcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los más empleados son la
glucosa, la lactosa y la sacarosa.
3. Peptonas. Son proteínas hidrolizadas, se obtienen por digestión química o enzimática de
proteínas animales o vegetales.
4. Extractos. Son preparados de ciertos órganos o tejidos animales o vegetales obtenidos con
agua y calor. Los extractos son ricos en proteínas de bajo peso molecular y en factores de
crecimiento.
5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo son
añadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos microorganismos patógenos.
6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se añaden al medio para mantener el pH dentro
del rango óptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos bisódicos o bipotásicos.
7. Indicadores de pH. Son indicadores ácido-base que se añaden para detectar cambios de
pH en el medio.
8. Agentes reductores. Sustancias que se añaden al medio para crear las condiciones que
permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios. Ej.: cisteína y
tioglicolato.
9. Agentes selectivos. Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares etc. que a
determinadas concentraciones en el medio actúan como agentes selectivos frente a
determinados microorganismos.
10. NaCl que se añade al nutriente aumenta la presión osmótica del medio.

UTILIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: La mayoría de los medios de cultivo son

empleados para el desarrollo inicial y aislamiento de microorganismos heterotróficos, son
ricos en componentes proteicos derivados de carnes, corazón, cerebro, caseína, fibrina, soya,
por digestión con enzimas proteolíticas (pepsina, tripsina, papaína). Estos derivados son
principalmente péptidos, peptonas, proteosas, aminoácidos, sales inorgánicas como fosfatos
y trazas de K y Mg que los organismos utilizan como compuestos parcialmente degradados,
al ser incapaces la mayoría de hidrolizar proteínas completas.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: Según su composición y objetivos se

clasifican de la siguiente manera: MEDIOS COMUNES: Aquellos que contienen los mínimos
componentes nutricionales para organismos heterotrófícos no exigentes. Estos pueden ser
LÍQUIDOS, SÓLIDOS y SEMISÓLIDOS. Ejm: Medios Líquidos: Son de consistencia líquida.
Ejm: Caldo nutritivo, caldo peptonado, caldo triptosa, caldo carne y otros. Medios Sólidos:
Nutrientes compuestos de un medio líquido base, al que se le agregan sustancias orgánicas
de poco o nulo valor nutritivo como el agar o gelatina, para dar al medio consistencia de gel.
Ejm.: Agar nutritivo, agar peptonado, agar almidón, medio de gelatina y otros. El Agar
Nutritivo depositado en placas Petri, permite el aislamiento de bacterias no exigentes a partir
de una fuente problema. También es importante su utilidad para otros fines como para la
preparación de cosechas bacterianas masivas en la elaboración de antígenos, vacunas,
conservación de cepas para estudios culturales en tubos de prueba, etc. • Medios
Semisólidos: Compuesto por cualquiera de los medios líquidos antes mencionados, a los que
se adiciona una cantidad suficiente de agar (0.5%). para obtener un estado de gel blando
(semisólido) Principalmente se les usa para estudios de motilidad macroscópica en columna
de los microorganismos, mantenimiento en cepario y estudios de la capacidad respiratoria.

PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO CON AGAR TSI

EQUIPOS:

MÁQUINA DE ESTERILIZACIÓN
HORNILLA

MATERIALES:

MATRAZ
PIPETA
BOMBILLA
AGUA DESTILADA
MECHERO BUNSEN
FÓSFORO

REACTIVO:
AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar
bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas
marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos microorganismos
marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los
100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

Para hacer las medidas correctas utilizamos la regla de tres simple que nos ayudó a calcular
la cantidad de AGAR TSI que dio como resultado 6.45 gr
64.52gr—-----------1000ml 64.52gr x 1000ml
= —----------------------- =6.45gr de AGAR TSI
x—-----------100ml 100ml

Preparación de los medios de cultivo Agar nutritivo (TSI) para bacterias. Se preparan 100 ml
del cultivo, se pesan 6.45 gr AGAR TSI. Se colocan 100 ml de agua destilada en un matraz
Erlenmeyer con agitación y se van agregando los reactivos según el orden, posteriormente se
ajusta el pH de 6.5-7.0 y se pone calentar hasta ebullición durante un minuto evitando el
desorden. Al finalizar cuando hierve el reactivo pasamos a colocar el medidor de ph y el
resultado de la tabla fue 7 neutro.
Esterilización de medios de cultivo

Para los medios de cultivos se debe tomar las siguientes indicaciones:

Revisar que el agua en el autoclave esté limpia y el nivel coincida con la marca en el tubo
indicador. Conectarla y poner la perilla de control en calentamiento máximo. Con el uso de
guantes de asbesto, acomodar los medios y materiales en la canasta de la autoclave y
colocarla dentro. Cerrar la tapa, apretar las manijas de dos en dos en posición encontrada y
esperar a que salga el vapor por el orificio de purga, después cerrarlo con la válvula. Dejar
que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121°C o 15 lbs /in2 de presión y mantener estas
condiciones durante 15 minutos. Revisar continuamente el manómetro y regular el control
de temperatura a valor medio o mínimo Apagar la autoclave y dejar que la presión baje al
valor de cero. Quitar la válvula y con la ayuda de guantes de asbesto, abrir cuidadosamente la
tapa, desde la parte trasera para evitar que el vapor caliente cause quemaduras.

RESULTADOS.

1. Esterilidad: Uno de los objetivos principales de la preparación de medios de cultivo es

asegurar que estén estériles y libres de cualquier organismo no deseado. Los resultados
deseados serían la ausencia de crecimiento microbiano en el medio después de la
esterilización.

2. Crecimiento microbiano: Si el objetivo del medio de cultivo es cultivar

microorganismos, el resultado deseado sería un crecimiento saludable y abundante de
las colonias microbianas en el medio.

3. Los medios de cultivo deben almacenarse a las temperaturas especificadas para evitar que
se modifique su composición, y no más allá del periodo de validez del producto. La
preparación y la conservación asépticas son esenciales para proteger los medios de cultivo de
la contaminación microbiana.

CONCLUSIÓN:
Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis de
microorganismos con varios fines, como el de multiplicación, identificación, antibiograma,
entre algunos otros, y puede ofrecer información valiosa sobre los mismos si se realiza de
manera adecuada e higiénica para evitar la contaminación del medio y la alteración de los
resultados. Mediante el desarrollo de esta práctica, definimos y aplicamos los
procedimientos que se deben realizar para la elaboración de un medio de cultivo y a su vez
aprendimos la importancia de preparar medios de cultivo que nos van a servir para
identificar diferentes microorganismos. Concluyendo que es de gran importancia preparar
adecuadamente los medios de cultivo, tomando en cuenta todos los puntos necesarios para
llegar al resultado esperado

REFERENCIAS:
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio (2005). Organización Mundial de la Salud. 3ª.
Edición. Ginebra. Suiza
https://itescam.edu.mx/principal/docentes/formatos/f3051a7c1a20d76b2013aaf7c7bf6fa0.
pdf

Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000). Microbiología. 6ª ed. McGraw Hill.
México.https://itescam.edu.mx/principal/docentes/formatos/f3051a7c1a20d76b2013aaf7c7
bf6fa0.pdf

Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003). Microbiología. 5ª ed. McGraw Hill.
España.https://itescam.edu.mx/principal/docentes/formatos/f3051a7c1a20d76b2013aaf7c7
bf6fa0.pdf

KRIKORIAN, A. D. Medios de cultivo: generalidades, composición y preparación. Cultivo de

tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones. Cali: CIAT, 1991, p.
41-77.https://www.exa.unne.edu.ar/biologia/fisiologia.vegetal/Cultivo%20de%20Tejidos%2
0en%20la%20Agricultura/capitulo3_parte1.pdf

GÓMEZ, Gretel; BATISTA, C. Optimización de medios de cultivos para microorganismos, una valiosa
estrategia para la producción de biopreparados de interés agrícola. Cultivos tropicales, 2006, vol. 27,
no 3, p. 17-24.https://www.redalyc.org/pdf/1932/193215825002.pdf
ANEXOS.