UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIA, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA

DE ALIMENTOS

“PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS”

CURSO : MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS I

DOCENTE : ING.CONDORI RONDAN, VICTOR ELVIS

ALUMNOS : SEVILLANO VILLANUEVA, Daivid

BERAUN RIVERA CESAR

TINGO MARÍA – PERÚ

2020
 I. INTRODUCCION

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones

adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de
Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes
tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en
forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se parte de un medio
líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la
sílicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza
de sus constituyentes en:

• Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de

origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la
adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los
componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.
Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición
química definida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos
de investigación. De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

• Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el

crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el
número de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más
sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción
de los que se quieren cultivar.

• Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian

por ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de
microorganismos específicos.

• Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos

derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos. Los medios de cultivo se
pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes
básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles comercialmente
(medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los
medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con
ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.
 II. OBJETIVOS

- Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización.

- Aplicar algunas metodologías para esterilizar material y medios de
cultivo.
- Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
- Explicar el concepto de medio de cultivo en microbiología
- Eliminar adecuadamente los desechos biológicos.
 III. REVISION BIBLIOGRAFICA
III.1. Fundamento
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de los
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de
cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Se han
preparado más de 10.000 medios de cultivos diferentes. Para que las
bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presión de oxigeno adecuado, así como un grado
adecuado de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener
los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante.
III.2. Tipos básicos de medios de cultivo
Atendiendo su estado:
a) Naturales, constituyen únicamente de material vegetal natural,
b) Semisinteticos complejos, el componente posee 50% natural y
50% de sustancias químicas.
c) Sintéticos definidos, es químicamente definido cuyos
componentes son medibles.
Atendiendo a su utilidad práctica:
a. Líquido: también se llaman caldos de cultivo, no contienen agar.
b. Semisólido: contiene 0.5% de agar
c. Solidos: contienen de 1.5 a 2% de agar y se preparan en cajas
petri (placa) o en tubos de ensayo.
Atendiendo a su actividad practica
a. Medios para aislamientos comunes: Para usos generales no
selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos
difíciles de hacer crecer. Pertenecen a esta categoría las infusiones
de extractos de carne y peptona, caldos nutritivos, agar nutritivo, etc.
b. Enriquecidos: son aquellos medios en los cuales a una media
base se le añaden determinadas sustancias nutritivas que son
necesarias para el crecimiento de un microorganismo exigente. Por
ejemplo, el caldo selenito cistina, caldos agar sangre, caldo cerebro
corazón (BHI).
c. Medios especiales:
• Selectivos: (pueden ser de moderada o alta selectividad) se
añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando la
sustancia añadida, se varia del tipo y grado de selectividad (Mac
Cokey, Kanamicina- Vancomicina, caldo lactosa bilis verde brillante o
el agar salmonella, shiguella)
• Medios diferenciales: incorpora determinadas que nos permiten
diferenciar entre dos tipos inhibiendo el de otros.se utiliza para
seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas.
Ejemplo: El agar de sal y manitol (nos permite diferenciar en el caso
de staphylococos, los que utilizan el manitol en su metabolismo de
los que no.
Entre los factores selectivos que alteran las condiciones del medio
tenemos:
1. Cambio de pH: agregando ácido acético para favorecer el
crecimiento de lactobacillus (pH final: 5,4 que es ostil para la mayoría
de las especies que crecen entre (6,5 y 7,2). Los hongos crecen
entre pH 4 y 6.
2. Cambio de temperatura: La mayoría de las bacterias crece
óptimamente entre 20° C y 40° C. Los cultivos típicos de S. faecalis
requieren 60° C de temperatura y los de listeria son capaces de
crecer a 4° C.
3. Alteraciones osmóticas: se acrecientan las propiedades
osmóticas un medio con el agregado de cloruro de sodio. Estos
medios intensifican la selección de las bacterias halófilas como es
staphylococus spp. (7.5%).
4. Ajuste de la tensión de oxigeno: es importante en la selección de
aerobios y anaerobios.
5. Ajuste en la tensión de anhídrido carbónico: muchos patógenos
importantes pueden ser cultivados en medios que se eleve la tensión
más allá de la atmosfera.
Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias
indeseables tenemos:
1. Antisépticos: sustancias antibacterianas inespecíficas que pueden
actuar como inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial
s-s (salmonella- shiguella) que contiene verde brillante (que inhibe a
las bacterias Gram positiva) y sales biliares (inhiben un gran número
de gram negativas menos enterobacterias).
2. Antibióticos: sustancias antibacterianas específicas que impiden
el crecimiento de aquellos microorganismos que no nos interesa que
crezcan en el mismo medio. La penicilina en una concentración de
5,50 unidades / ml inhibe la mayoría de las grampositivas. Otro
ejemplo es el medio de sabourand- cloranfenicol para el aislamiento
de Candida albicans.
 IV. MATERIALES Y METODOS
IV.1. MATERIALES Y EQUIPOS
• pipeta
• matraz
• tubos
• tapones de algodón
• mechero
• autoclave
• balanza
COMPOSICION
 extracto de carne
 peptona
 pH final 6.8
IV.2. METODOS
La presencia de microorganismos en todos los medios ambientales
hace imprescindible que para estudiar una bacteria determinada sea
necesario destruir todas aquellas que pudieran encontrarse
contaminando los medios o los instrumentos de trabajo. Esto se
consigue mediante la ESTERILIZACION, consistente en la
destrucción de todo microorganismo. En estas prácticas vamos a
utilizar especialmente el calor como método de esterilización
rutinario, aunque tal y como se ha explicado en clase existen otras
posibilidades. Los medios con contenido acuoso han de ser
esterilizados en el AUTOCLAVE mediante calor húmedo, obtenido
por calentamiento en un depósito hermético que contiene agua y del
que previamente ha sido evacuado el aire con el fin de limitar las
oxidaciones. En este sistema el vapor de agua sobrecalentado a 121
(2 atm) o 111 ºC (1.5 atm) difunde muy rápidamente, haciendo que
los elementos termosensibles de las células se desnaturalicen,
especialmente sus enzimas.
 Por lo tanto, una vez preparados los medios de cultivo hay que
proceder a su esterilización en autoclave, realizada habitualmente a
1 atm de sobrepresión (121ºC) durante 15 ó 20 min., salvo en el caso
de medios cuyos componentes sufran alteraciones tales que los
hagan inadecuados para el crecimiento.
 V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
V.1. RESULTADOS
Descripción del cultivo en medio líquido.

Medio de cultivo Presencia de microorganismo

Caldo No se apreció ninguna turbidez
Agar No se presentó ninguna
contaminación

Para el desarrollo de las colonias se utilizó la misma incubadora a 37

°C, pero en la preparación de medio líquido en tubo (caldo) y también medio
solido evidentemente no se presentó ningún cambio en el caldo y el agar ,
recalcando su propiedad para inhibir la producción bacteriana.
V.2. DISCUSIONES
Según Bock: “el problema más común es la contaminación
ambiental a través del aire, ya que este siempre contiene polvo en
suspensión que generalmente lleva a una comunidad de microrganismo.
Cuando las placas o tubos se abren deben manejarse de tal modo que los
contaminantes del aire no penetren. La transferencia aséptica de un cultivo
desde un tubo con medio a otro, se realiza habitualmente con el asa o
aguja de siembra previamente esterilizada a la llama de incandescencia.
Los cultivos en los ha habido crecimiento se puede transferir luego a la
superficie de placa con agar donde se desarrollan colonias como resultado
del crecimiento y división de las células aislada han sido sembradas.
 VI. CONCLUSION

La preparación de cultivos es unas de las primordiales mas importante para lo

que es para el crecimiento microbiano para poder saber que tipo de colonia
crece y en el caldo nutritivo se ve la presencia de microorganismo.

VII. Referencia bibliográfica

RAFÍA Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de

Métodos Generales (2da edición). Facultad de Farmacia. Universidad Central
de Venezuela.

Difco y BBL. 2003. Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos.

Merck. 2002. Microbiology Manual Ortega, Y; Quevedo F. 1991. Garantía

de la Calidad de los Laboratorios de Microbiología Alimentaria. Organización
Panamericana de la Salud. Harla S.A. Méxi
VIII. ANEXOS