UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGIENERIA QUÍMICA

TEMA: PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

PROFESOR: ING. ERICK ALVAREZ YANAMANGO

INTEGRANTES:
ACOSTA CORALES MAGALY
AMARO CALDAS OSCAR
BORJAS CELIS JULIO CESAR
SULCA CHUMPITAZI ANGIE VIANA
VARGAS ALBARRAN ANTHONY

CURSO: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

2015
 PREPARACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

I. Introducción

Por su minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como

individuos, sino que es n e c e s a r i o m a n e j a r l o s c o m o p o b l a c i o n e s .
P a r a   e l l o   e s   n e c e s a r i o   c u l t i v a r l o s ,   e s   d e c i r ,   f a v o r e c e r   s u multiplic
ación in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a
las de sus hábitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquello
microorganismos que interfieren en el estudio del microorganismo de interés,
al que además de proporcionar los nutrientes necesarios
para su crecimiento multiplicación

II. Objetivos

 Preparar adecuadamente medio de cultivo a partir de sus ingredientes y a partir de

medios de cultivo deshidratados.
 Indicar el método de esterilización apropiado

III. Marco teorico

Medios de cultivo
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos
medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en
su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y
reproducibilidad de los resultados obtenidos.
Clasificación de los medios de cultivo
En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo
que pueden ser  preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un
medio sólido se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar,
la gelatina o la sílicagel.
 Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:

° Medios naturales o complejos:

Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente
complementadas por la adición de minerales y otras sustancias. En ellos no seconocen todos los
componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

°Medios definidos  o  sintéticos:

S o n l o s   m e d i o s   q u e t i e n e n u n a   c o m p o s i c i ó n   q u í m i c a d e f i n i d a cualitativa y
cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigación.
(Para bacterias como: Echerichia coli y Leuconostoc citrovorum)
 De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

°Medios  de  enriquecimiento:

Son medios  líquidos  que favorecen  el  crecimiento  de  un  tipo  de
microorganismo  en  particular.  Permiten  aumentar el  número  de  microorganismos
de  ese  tipo. Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras del crecimiento de los
microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar.

°Medios selectivos:
Son parecidos a  los de  enriquecimiento, se  diferencian por ser  medios sólidos
ye s t á n   d i s e ñ a d o s   p a r a   e l   a i s l a m i e n t o   d e   m i c r o o r g a n i s m o s   e s p e c í f i c o s .
( P a r a   b a c t e r i a s   c o m o Salmonella typhi y Clostridium botulinum)

°Medios diferenciales:
Son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad m i c r o b i a n a d e
los  microorganismos.  No  contienen  ningún  tipo  de  sustancia  con 
a c t i v i d a d antimicrobiana. Permiten revelar características fisiológicas de los
microorganismos. (Para bacterias como: Streptococcus pyogenes y Escherichia coli)

Por su composición los medios de cultivo se clasifican en:

°Líquidos
:  conocidos  como  caldos,  estos  son  especialmente  útiles  para  hacer  diluc
iones,  para homogenizar mezclas   de  microorganismos, para  enriquecer
cultivos  y  para  rehidratar cepas liofilizadas .

°Sólidos
: Para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de las colonias aisladas en las quees
posible observar las características típicas de un solo tipo de microorganismo.

°Semisólidos
: Son aquellos medios líquidos a los que se adiciona agar en concentraciones de 0.4
a0.8%. Estos se emplean para determinar la movilidad de los microorganismos microaerofílicos.
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de
sus.constituyentes.b á s i c o s   o   p o r   s i m p l e   r e h i d r a t a c i ó n   d e   p r o d u c t o s   a s e q u i b l
e s   c o m e r c i a l m e n t e   ( m e d i o s   d e   c u l t i v o deshidratados). Generalmente se prefiere el uso
de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos se tiene
mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparación se deben tener en
cuenta los siguientes aspectos:
∼Prepararlos sólo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores
que suministren productos de calidad.
∼Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica
adecuada.
∼Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o desmineralizada.
∼Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilización.
∼Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el fabricante.
IV. Materiales
. Mechero
.Medios de cultivo deshidratados
.Agua destilada
.Autoclave
.Materiales
.Placas
.Matraces
.Pipetas
V. Desarrollo experimental

IV.I. Preparación del medio

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio d cultivo

asignado.
2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada
uno de los ingredientes. Cerrar inmediatamente el frasco e medio de cultivo.
3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si es
necesario calentar se debe tener en cuidado de nos sobrecalentar.
4. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el
profesor.
5. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre, distribución
y fecha de preparación.
6. Esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las instrucciones señaladas
por el profesor.

VI. Resultados

Medio de Caldo láctico Caldo Hagar Hagar Plate

Cultivo Nutritivo nutritivo count
Cantidad 10mL 10mL 200mL 200mL
Preparada
Cantidad 10g 10g
Pesada
Aspecto del liquido semisólido Solido Solido
medio
Estado físico Liquido Liquido Solido Solido
Tipo de medio Liquido semisólido solido solido
de cultivo
Distribución Tubo Tubo Placa Placa
Condiciones de 121ºC por 121ºC por 121ºC por 121ºC por 15
esterilización 15 min 15 min 15min min
Condiciones de 37ºC 37ºC 37ºC 37ªC
almacenamiento
VII. Cuestionario

1) Analizar las condiciones del centro de expendio, condiciones de muestreo,

manipulación y transporte que seas relevantes y justifiquen la presencia de
microorganismos de importancia alimentaria.
2) Investigar la composición del medio de cultivo e indicar los posibles
microorganismos que podrían desarrollarse en función de su composición y
temperatura de incubación.
3) ¿Cuáles son los tipos de siembra en placa y en tubos? Indicar su importancia y
utilidad de cada una de ellas.
4) ¿Cuál es la diferencia entre aislamiento, identificación y recuento microbiológico?

VIII. Desarrollo del cuestionario

a) Inspección del medio

La muestra que usamos para esta experiencia fue emoliente, el lugar de expendio
era un carrito usual en los que venden desayunos. El ambiente donde se ofrece el
producto, es este caso emoliente, es al aire libre. Estando propenso a la
contaminación vehicular y ambiental.
El recipiente donde está depositado el emoliente es uno de metal, aparentemente
limpio, y el instrumento con el que lo sirven también es de metal; cada vez que es
usado es dejado dentro del recipiente contenedor del emoliente.

b) Características de muestra
El envase donde se nos deposito el emoliente para un transporte más fácil fue una
bolsa.
c) Siembra por inmersión:
Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el
medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para
microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión.
Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de
una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el
medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.
Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y
se deja solidificar.
 Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml de medio
de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.

d) Análisis

El recuento microbiano trata de conocer el número total de microorganismos

presentes en la muestras, después se procede al aislamiento puede ser por
resiembra directa con asa de cultivo, de cada uno de los tipos morfológicos ya sea
en placas o tubos con agar, una vez aislada cada cepa se procede a su
identificación por métodos diferentes para mohos y levaduras

IX. Conclusiones

 Se puede elaborar medios de cultivo de manera sencilla, siendo muy útil

para el estudio de microorganismos debido a que en este tipo de medio se
los puede reproducir con facilidad.
 Elaborar medios de cultivo resulta eficiente para la reproducción y
posterior aislamiento de alguna cepa de microorganismo que nos interese
estudiar.