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FACULTAD Informe de Práctica de Laboratorio

BIOLOGIA Y MICROBIOLIGIA
DE GENERAL
INGENIERÍAS

MEDIOS DE CULTIVO: SU IMPORTANCIA, USO, Y PREPARACION


Juan David Posada Garcés, Kevin Gerald Muñoz Ramírez, Jorge Hernán Cortez Izasa

Fecha de presentación 13/11/2014


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Resumen
Los medios de cultivos son soluciones de nutrientes que en las condiciones adecuadas, permiten el desarrollo óptimo de los diferentes
microorganismos. En el laboratorio se tienen unas condiciones específicas que permiten realizar un cultivo de los microorganismos a estudiar, para
que así, estos tengan una adecuada reproducción en el cultivo elegido. A continuación se van a dar a conocer los diferentes medios de cultivos que
son óptimos para el crecimiento de los diferentes tipos microorganismos, también se mencionan los procedimientos adecuados y la importancia que
tiene sobre la preparación de estos medios algunos factores como la temperatura, pH, entre otros que influyen en los resultados. Además de esto, se
van a mencionar en principio los tipos de siembra estándar para el cultivo de microorganismos.

Palabras Clave: Cultivo; Aislamiento; Composición; Calidad de nutrientes; Diagnostico de microorganismo

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1. Introducción
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos


es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos
es el Cultivo; un medio de cultivo es un sustrato o una solución
de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En
las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las
que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias.

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra,


pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y Figura No 1
tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de Medios de cultivo
nichos ecológicos, siendo en general un medio de cultivo aquel
conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias
para el desarrollo de los microorganismos.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el
cultivo artificial deben reunir una serie de condiciones como crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígenos crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante pero se
adecuados, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de licuación, en los diferentes medios de cultivo se encuentran
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de
microorganismo contaminante. carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos
preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la fundamentales:
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40

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Para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar hacemos una onda por todo el agar esparciendo así la
reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden muestra. Este tipo de siembra se hace con el fin de
a identificarlos. propagar la muestra y conocer las colonias que se
pueden formar en todo el agar.
El suero y la sangre completa se añaden para promover el
crecimiento de los microorganismos menos resistentes.  En la siembra por agotamiento, con el asa totalmente
También se añaden colorantes que actúan como indicadores esterilizado se procede a hacer estría apiñada en los
para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como tres extremos de la caja de Petri; después de terminar
inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el en el primer extremo se esteriliza el asa y se toma la
Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico muestra para continuar con los extremos restantes.
y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como Con este tipo de siembra se conoce las colonias muy
inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las apiñadas y se juntan mucho más.
bacterias Gram-positivas).
 En la siembra mixta, en el tubo de ensayo que tenga
un agar semisólido con el agar esterilizado tomamos
la muestra y la introducimos por el ángulo que hace
2. Procedimiento Experimental el agar con la pared del tubo, después de haber
introducido el asa con la muestra retiramos muy
lentamente tocando el agar con el asa.
 Usar solamente recipientes de vidrio

 Seguir las recomendaciones de la caja comercial, para


la hidratación únicamente usar agua destilada.

 Adicionar únicamente los componentes determinados 3. Resultados


por la casa comercial.

 Pesar exactamente la cantidad adecuada de cada


medio.

 A la hora de la mezcla entre el medio y el agua


asegurarse de que no queden restos del medio en las
pareces del recipiente.

 Una vez la mezcla este homogénea llevarla a la estufa


hasta ebullición y que quede completamente
transparente.

 Para envasar los medios de cultivo en los tubos de


ensayo o en cajas de Petri se hace lo más cerca del
mechero, dejar solidificar, por lo general se realiza un
control de esterilización por 24 horas, y si no se
utilizan inmediatamente llevarlos a la nevera.

 En el caso de medios en tubos de ensayo generar una


inclinación hasta que se solidifiquen.

 Una vez listo el medio de cultivo se procede a hacer la


siembra.
Figura No 2
 Para su conservación almacenarlos en lugares secos y
Siembra por estría
frescos sin exposición a la luz, protegerse al medio
ambiente, deben guardarse con previo control de
esterilidad en una nevera a 4°c hasta el momento de
uso.

 En la siembra por estría, en un agar solido en la caja de


Petri tomamos la muestra con el asa esterilizado y

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 Los medios de cultivo son muy importante cuando
necesitamos diferenciar una colonia de
microorganismos o tener un microorganismo con vida
para así observar el comportamiento del mismo.

 Las bacterias necesitan de medios que estén con los


suficientes nutrientes para que así puedan reproducirse y
formar colonias, entonces los medios de cultivo deben
ser ricos en nutrientes.

 Los materiales dentro del laboratorio son muy


importantes al momento de trabajar con baterías pues se
requiere de mucha protección ya que estos pueden
ocasionar problemas en la salud en las personas que
están.
Figura No 3
Siembra por agotamiento
5. Preguntas de discusión

1) Cuáles son los medios sintéticos.

Son los medios de cultivo preparados comercialmente todos y


cada uno de sus componentes son conocidos de acuerdo a la
utilidad de cada medio y al desarrollo microbiano deseado, se
acondicionaran sustancias especiales. Se obtiene en el
comercio en forma de polvo o granular. Llevan fuente de
carbono, fuente de hidrogeno, sales que suplen iones, otros
elementos como son estimuladores del crecimiento pero
siempre a concentraciones conocidas y algunas son: agar
nutritivo, agar blanco, caldo nutritivo agar eosina azul de
metilo.

2) Describa los medios naturales.

Son los medios que se utilizan naturalmente para el


crecimiento de agentes microbianos en general. Estos medios
son fundamentalmente: leche, pan, tierra, jugos vegetales, agar
V8 entre otros.

Figura No 4 3) Cuáles son las propiedades de los medios de


Siembra mixta cultivo.

4. Conclusiones Disponibilidad de nutrientes adecuados. Un medio de


cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de
 Se puede concluir que para preparar un medio es contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y
importante saber o considerar el aspecto nutricional, sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
condiciones ambientales de habitad natural (pH,
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
concentración de sales, etc.), forma de cultivar, para tener ejercer de donantes o captadores de electrones para las
un medio apto para el crecimiento de un microorganismo reacciones químicas que tengan. Ciertas bacterias tienen
especifico y para utilizarlo con un propósito específico de necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a
estudio. muchos medios, sustancias como suero, sangre, líquido
ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos
carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio,
manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del

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crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica, también Esterilidad del medio. Todos los medios de cultivo han de
se añaden a los medios de cultivo ciertos colorantes, bien como estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas
indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos crecimiento microbiano normal del o de los especímenes
microorganismos. inoculados en dichos medios. El sistema clásico para
esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
Consistencia adecuada del medio. Partiendo de un medio vapor de agua a presión como agente esterilizante.
líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos
como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos
medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados
con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
Bibliografía:
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a
temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y Textos
de que otros tienen la capacidad de licuarla.  [1] P.R Murray, Microbiología, Microbiología
médica, S.A. ELSEVIER ESPAÑA, 2, 960 págs.
Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases. Gran  [2] D.R. Toro & M.J Botero, El Microscopio,
cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con Prácticas de laboratorio de Microbiología,
tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno Universidad de caldas, 1, 63 págs.
directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos
anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en Internet
una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio,
 [1] López Tévez Leonor, Microbiología general,
los microorganismos microaerófilos crecen mejor en
biología.edu.ar, fecha de publicación 07/2006,
condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf.
oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos
tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las
citadas condiciones.

Condiciones adecuadas de humedad. Un nivel mínimo de


humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células
vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el
mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de
cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua
que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los
cultivos y evitar así que se deseque el medio.

Luz ambiental. La mayoría de los microorganismos crecen


mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay
excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

PH. La concentración de iones hidrógeno es muy importante


para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de
ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque
los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe
olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no
impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo
o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

Temperatura. Los microorganismos mesófilos crecen de


forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los
psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales,
los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho
más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofitos tienen rangos
más amplios.

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Evaluación (Espacio para el docente)

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Introducción 1.0
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Procedimiento experimental 1.0

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Resultados 1.0

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Conclusiones 1.0
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