ULICORI

Universidad Libre de Costa Rica

Instituto Parauniversitario Plerus

Fundamentos de Biología

Preparación de reactivos o medios de cultivo en laboratorio clínico

para análisis de muestras biológicas

Helmer Angulo Martínez

I Cuatrimestre

Julio del 2021

Objetivo General:
Investigar la preparación de reactivos o medios de cultivos en laboratorio
clínico para el análisis de muestras biológicas.

Objetivos específicos:
1. Comprender el origen de los medios de cultivo y la utilidad que se les
da.

2. Analizar las actividades del laboratorio.

3. Identificar tipos de medios de cultivos basados en su consistencia,

composición y su función, en microorganismos.

4. Explicar los constituyentes habituales de los medios de cultivo.

 INTRODUCCIÓN
La presente investigación se refiere al tema de la preparación de reactivos o medios de
cultivo en laboratorio clínico para análisis de muestras biológicas, nos llamó mucho la
atención los siguientes aspectos:
Su origen y la utilidad de los medios de cultivo, que es estimular el crecimiento de algunos
microorganismos necesarios en la producción y conservación de alimentos, producción
vegetal y animal, además de insumos industriales, entre otros.
Las actividades que realizan, que tienen como objetivo dotar de medios de cultivo,
reactivos y preparaciones especiales garantizadas, a los laboratorios para el desarrollo de
una población microbiana.
También, se van a indicar los diferentes tipos de medios de cultivos y señalar que se basan
en consistencia, que son líquidos, sólidos, semisólidos y bifásicos; composición, que
varía en función de: grupo microbiano donde se pretende estudiar, complejidad química,
estado físico y aplicación, de los cuales existen tres y son: medios naturales, medios
sintéticos ,medios semi-sintéticos y medios de cultivo celulares; igualmente están los
microorganismos que se clasifican para los medios de cultivo basada en el tipo de
microorganismo, los cuales son: medios generales, medios de enriquecimiento y medios
selectivos y diferenciales, medios nutritivos, de transporte, de identificación, cuantificación
de colonias, pruebas de susceptibilidad y medios de cultivo para mantenimiento.
Así mismo, es importante saber que los componentes más habituales usados en los
medios de cultivos para tener una idea general de su preparación son: agar, extractos,
peptonas, amortiguadores, indicadores de pH, agentes reductores, agentes selectivos y
fluidos corporales.
Por último, rescatar que los medios de cultivo pueden ser materiales alimenticios,
naturales o artificiales que en síntesis aportan los nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos y asimismo obtener una gran cantidad de microbios,
tenerlos en cultivo puro y así aislarlos para así estudiar los diferentes tipos, los cuales
pueden ser: muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y
microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias.
Origen y utilidad de los medios de cultivos.
Los medios de cultivo son preparaciones nutritivas especiales para la recuperación,
aislamiento y mantenimiento de microorganismos bacterianos y fúngicos. Estos medios
pueden ser sólidos, líquidos o semisólidos.

Con respecto a lo anterior mencionado, los microbiólogos como Louis Pasteur, Robert
koch, Julius Richard Petri y Walter Hesse, todos ellos formaron parte de la importancia de
los medios de cultivo y en el área de la microbiología.

Según la historia se dice que Pasteur fue el que preparo el primer cultivo líquido utilizado,
esto ocurrió cuando él estaba demostrando que la vida microbiana no era producto de la
“vida espontanea”, porque los microorganismos se pueden multiplicar y provienen del aire.
Utilizo unos trozos de carne, donde uno lo tenía expuesto al aire donde notó que se veía
turbio y en el caldo había microorganismos y en los otros trozos de carne que había
hervido y herméticamente se mantuvo translucido al pasar de los días.

Se puede mencionar que estos microorganismos eran responsables de descomponer la

carne y producir algunas enfermedades, muchos microbiólogos no dudaron en investigar
sobre el tema.

Robert diseño la primera caja Petri con ayuda de Julius y Walter, dio aportes sobre las
técnicas en el laboratorio, como por ejemplo el aislamiento bacteriano, en algunos de sus
experimentos utilizo rodajas de patatas, como un medio sólido, pero luego agrego gelatina
en los caldos de carne, al ver que se la gelatina se derritió decidió convertirlo en un cultivo
líquido, al que llamaron agar-agar, poco a poco se fue modificando, hasta llegar a los
diferentes medios de cultivo que hoy utilizamos.

Gracias al transcurso de los años y los aportes de los microbiólogos, podemos decir que
estamos muy bien preparados y tenemos los medios necesarios para hacer el estudio de
diferentes medios de cultivo, en las áreas de: diagnóstico clínico en medicina humana y
veterinaria, industria farmacéutica y biotecnológica, industria alimenticia, y sectores
productivos (agricultura, química), Control del medio ambiente e Investigaciones

Por otro lado, el autor jsuaalo (2016) dice que las utilidades de los medios, son las
siguientes:

 Separación y aislamiento de microorganismos presentes en una muestra.

 Paso previo para la identificación de un microorganismo problema. Se pueden
obtener cultivos puros (axénicos) a partir de colonias aisladas.
 Conocer el tipo de metabolismo: en función de los nutrientes que utiliza o los
metabolitos que produce.
 Estudios macroscópicos, es decir, de las características de las colonias en medio
sólido.
 Realización de antibiogramas.
  Pruebas de concentración mínima inhibitoria (CMI)
 Conservación de especies
Son importantes las utilidades antes mencionadas debido a que gracias a ellas se realizan
diagnósticos, que tienden a reflejar el crecimiento de los medios de cultivos; tener un mejor
control de calidad, para asegurarse de que estén óptimas condiciones para trabajar y por
ultimo reforzar las investigaciones en la existencia de contaminación de alimentos,
medicamentos, cosméticos, enfermedades. elaboración de vacunas, etc.

Actividades del laboratorio.

Las actividades del laboratorio no solo nos ayudan desvelar los cultivos, sino que también
ayudan al desarrollo de las competencias primordiales, por lo que además de ser una
obligación son una oportunidad, contribuyendo a la propia disciplina y responsabilidad del
manejo de instrumentos y técnicas, además de fomentar la cooperación y el trabajo en
equipo; por eso vamos mencionar y recatar las siguientes actividades según la autora
Marielsa Gil: preparación, condiciones para el cultivo, control de calidad y el desecho
de los medios de cultivo.
Preparación

Los distintos medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de
sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Habitualmente se prefiere el uso de los
deshidratados porque simplifican el trabajo y gracias a eso con ellos se tiene mayor
probabilidad de obtener resultados reproducibles. Además de los siguientes pasos que se
van a citar a continuación:

Descontaminació Lavado de Secado y Esterilización Almacenaje de

n material Preparación de Material material estéril

Condiciones para el cultivo:

 Disponibilidad de nutrientes adecuados
 Consistencia adecuada del medio
 Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases
 Condiciones adecuadas de humedad
 Luz ambiental
 pH
 Temperatura
 Esterilidad del medio

Control de calidad de los medios de cultivo

La preparación y uso de los medios de cultivo no debe realizarse a la ligera, ya que todo
laboratorio que trabaje con ellos debe tener un departamento que aplique protocolos de
control de calidad a los medios, cada vez que se preparan lotes nuevos, y así garantizar
que están debidamente preparados, estériles y funcionales.
Para evaluar su esterilidad, se toman al azar uno o dos medios de cada lote y se incuban a
37 °C por varios días (no debe existir crecimiento). Para comprobar su función se utilizan
cepas de referencia ATCC, debidamente cultivadas y viables. Asimismo, se llevan a cabo
los siguientes controles de calidad:

Control de Control de Calidad de Control de Calidad Bioseguridad y

Calidad de la producto terminado ambiental y Bioriesgo
materia prima personal

Desecho de los medios de cultivo

Al trabajar con los medios de cultivo siempre hay que tener presente que estos deben ser
descartados de tal manera que no contamine al medio ambiente; para esto es necesario
que todo material sea: esterilizado en autoclave antes de que sea desechado.
Posteriormente, se retira el material de la cristalería. Esta última pasa a ser lavada,
secada, esterilizada y guardada para su posterior uso. En caso de usar placas
desechables estas se esterilizan y posteriormente se desechan en bolsas especiales.

Tipos de medios de cultivos

Las autoras Mariana Gelambi y Marielsa Gil (2019), mencionan que los medios de cultivo
se clasifican según su consistencia, su composición y su utilidad en los
microrganismos.

Consistencia
 Líquidos: no contienen agar-agar. El crecimiento bacteriano o fúngico se evidencia
por la turbidez del caldo, que originalmente es traslúcido.

 Sólidos: contienen entre 1,5 a 2% de agar-agar. La mezcla solidificada posee una

superficie que resiste el fino desplazamiento del asa de platino, sin que este se
rompa.

 Semisólidos: contienen 0,5% aproximadamente de agar-agar, por tanto, es un

estado intermedio entre el líquido y el sólido. Ideal en medios para ver motilidad.
También son recomendables para la conservación de cepas, pues estos mantienen
más tiempo la humedad.

 Bifásicos: se preparan de tal manera que existe una fase sólida y sobre este un
medio líquido. Muy utilizado para los hemocultivos.

Composición
  Medios de cultivo naturales: Son sustancias tomadas directamente de la
naturaleza para cultivar bacterias, brindándoles un ambiente lo más parecido a
cómo se desarrollan en el ecosistema normalmente. Ejemplo, leche, jugos, sangre
diluida, suero, etc.
 Medios de cultivo sintéticos: Son los más utilizados hoy en día, son los medios
deshidratados que adquirimos en las casas comerciales y a los cuales se les
conoce toda su composición química, ya que han sido diseñados estratégicamente
de acuerdo al tipo de microorganismo que se busca aislar.

 Medios de cultivo semi-sintéticos: Es la combinación de un medio sintético al cual

se le añade un elemento natural para enriquecer el medio.

 Medios de cultivo celulares: especiales para el cultivo de virus, porque estos

microorganismos son incapaces de sobrevivir fuera de las células, estos deben
contener tejido o células vivas, provenientes de un animal o una planta. Ejemplo: los
cultivos celulares de riñón de mono o los huevos embrionados.

Según su utilidad en el tipo de microrganismo

Se rescata que los medios generales tienen como objetivo el desarrollo de una gran
variedad de microrganismos, ya que estos necesitan de condiciones especiales para su
crecimiento.
Por otra parte, los medios de enriquecimiento son medios útiles para sembrar
muestras estériles, rescatar cepas débiles y así aislar microrganismos exigentes.
Seguidamente están los medios selectivos: en donde contienen nutrientes esenciales
para crecimiento de organismo de interés, añadiendo sustancias inhibidoras como:
antibióticos, antifúngicos, colorantes, sales biliares, entre otros.
También mencionar que estas sustancias inhibidoras tienen como finalidad de reducir
la variedad de cepas que puedan crecer, beneficiando el crecimiento de los grupos
especiales que se quieren rescatar.
Es importante resaltar de igual manera los medios diferenciales, ya que poseen
elementos nutricionales para crecimiento de microrganismo, para luego utilizar sus
características diagnosticas de los organismos de interés para poder emparejarlo con
otra especie que crece al mismo tiempo, además se pueden distinguir las bacterias
fermentadoras de lactosa (colonias color fucsia) de las no fermentadoras (color rosado
pálido o incoloro).
Además, están los medios nutritivos, estos buscan recuperar la microbiota o fúngica
que se encuentra en una muestra determinada; no discriminando entre
miroorganismos, ya que es capaz de crecer una gran cantidad de baterías; así como
también hongos. Así mismo estos medios de cultivo posen muchas sustancias con
nutrientes.
 Los medios de transporte son utilizados para transportar muestras, conservando
estas en excelentes condiciones para tener resultados confiables, pero no pueden
tener excedentes de nutrientes porque se ocupa mantener viable sin que aumenten en
número.
Se analiza que los medios de identificación presenten sustancias que pueden ser
metabolizadas por bacterias, produciendo reacciones químicas que exhiben la
presencia de enzimas o vías metabólicas específicas. Por otro lado, ayudan al recocer
el género y la especie de grupos de cepas, además también nos permite observar la
reacción, el indicador de pH y los iones de hierro.
Los medios para cuantificación de colonias: promueven los medios son simples y no
selectivos. El crecimiento del microrganismo depende de la temperatura y de oxigeno
Se incluye como otro medio de cultivo las pruebas de susceptibilidad, que estudian
el comportamiento de los antibióticos frente a un patógeno aislado; súper útil con
bacterias no exigentes y en exigentes solo si es suplementado con sangre.
Por último, están los medios de cultivo para mantenimiento, que pretenden buscar
reproducir al microorganismo y tener la viabilidad de la bacteria u hongo el mayor
tiempo posible, preservando sus funciones biológicas. Este medio no debe tener
glucosa, pues fermenta y disminuye la vida del microorganismo.

Constituyentes habituales en los medios de cultivo

Son los más frecuentemente usados en la preparación de los medios de cultivo, aunque
pueden no ser los únicos e incluso alguno de ellos puede estar ausente de la preparación y
se llegan a clasificar en: agar, extractos, peptonas, amortiguadores, indicadores de pH,
agentes reductores, agentes selectivos y fluidos corporales.

 AGAR: es un agente gelificante, el cual los microorganismos no pueden degradarlo

y que se utiliza para dar solidez a los medios de cultivo, un gel de agar al 1-2%.se
licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su
grado de pureza. En el agar bacteriológico el componente dominante es un
polisacárido, obtenido de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja
de que no es utilizado como nutriente, como otros microorganismos marinos.
 EXTRACTOS: su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales, (carne, hígado, semillas) sean extraídos con agua y calor, para ser
concentrados hasta la forma final de pasta o polvo; y así es como son deshidratados
a menudo estas preparaciones, para ser empleadas en la elaboración de los medios
de cultivo.
 PEPTONAS: son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y
sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas
animales o vegetales; agregar también que las peptonas son muy ricas en pépticos
y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales
minerales, los cuales son las unidades fundamentales de las proteínas.
 AMORTIGUADORES: evitan los cambios bruscos de pH y ayudan a mantener el
rango óptimo del crecimiento que el organismo tolera.
 INDICADORES DE PH: se añaden con frecuencia al medio de cultivo con el
objetivo de poder detectar variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros
procesos, y así comprobar si los microrganismos son capaces de utilizar ciertas
sustancias.
 AGENTES REDUCTORES: crear en los medios de cultivo condiciones que permitan
el desarrollo de los gérmenes microaerofilos ò anaerobios se añaden estos agentes
reductores siendo, los más empleados la cisteina y el tioglicolato entre otros.
 AGENTES SELECTIVOS: la adición de determinadas sustancias a la concentración
adecuada a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo, haciendo que frene a
determinados microorganismos. Por ejemplo: la adición de cristal violeta, sales
biliares, azida sódica, antibióticos, etc.
 FLUIDOS CORPORALES: es fundamental añadir a los medios de cultivo de
algunas patógenas sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma
o suero sanguíneo, para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador.
Los fluidos corporales no solo se añaden a los medios de cultivo porque contienen
factores de crecimiento, sino que también aportan sustancias que neutralizan a
inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.
Conclusión

Es transcendental este tema, ya que nos ayuda en una buena preparación en condiciones
adecuadas, a un medio de cultivo, en donde permite tener nutrientes y condiciones para
favorecer el crecimiento de microorganismos en un laboratorio clínico y a la vez tener un
mejor control en su fabricación, preparación, confiable y reproducción de los resultados.

Existen muchas clases de cultivos en la actualidad cada uno con fines distintos y se
clasifican según su función; sin embargo, todos tienen algo en común y es que facilitan o
promueven la reproducción de los microorganismos uno de los sistemas más importantes
para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticia artificiales preparadas en el laboratorio.

En esta investigación aprendimos que cada medio de cultivo tiene una composición
diferente, pero es especial que contenga los nutrientes específicos para un buen desarrollo
del tipo de microorganismo que se buscan. También se conocen algunos constituyentes
habituales en los medios de cultivo como, por ejemplo: Agar, Extractos, peptonas,
indicadores de PH y fluidos corporales.

También agregar que nos llamó mucho la atención de cómo tiene como diferentes
funciones la preparación de reactivos, tales la como dotación de medios de cultivo,
reactivos y preparaciones especiales garantizadas, a los laboratorios dependientes del
Área de Diagnóstico, Control y Producción, así como para la venta a personas particulares
e instituciones externas.

Los medios de cultivo se clasifican por o según su consistencia, su composición y su

función. Según su consistencia dividen en líquidos, sólidos, semisólidos y bifásicos, según
su composición se dividen en cultivos natural, semi-sintéticos y celulares.

Estas fueron algunas de las cosas que aprendimos en esta investigación nos sirvió para
ampliar nuestro conocimiento un poco más sobre este tema que en nuestro futuro nos
podrá ser de gran utilidad.
ANEXOS
Bibliografías:
Gelambi Mariana. (21 de septiembre de 2018). Preparación de medios de cultivo:
objetivos y pasos. Lifeder. Recuperado de https://www.lifeder.com/preparacion-
medioscultivo/.
Gil Marielsa. (21 de noviembre de 2019). Medios de cultivo: historia, función, tipos,
preparación. Lifeder. Recuperado de https://www.lifeder.com/medios-de-cultivo/.
Jsuaalo. (8 de junio de 2016). Preparación de medios de cultivo. Recuperado de Práctica
11: Preparación de medios de cultivo. – jsuaalo (wordpress.com)
Medio de cultivo (Microbiología). Recuperado el 17 de julio del 2021 de internet: Medio de
cultivo (Microbiología) - EcuRed