FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA GENERAL
LABORATORIO

MEDIOS DE CULTIVO PARA MICROORGANISMOS

INTRODUCCIÓN
La posibilidad de cultivar microorganismos en el laboratorio sobre medios definidos, es una de
las herramientas más valiosas en la microbiología. En la actualidad se dispone de varias clases
de medios de cultivo para uso en el laboratorio, los cuales tienen fórmula definida y cumplen
con los estándares internacionales de calidad, que permiten ofrecer al microorganismo las
mejores condiciones para su crecimiento.

Clasificación de los medios de cultivo:

A. Por su aspecto físico:
Líquidos: estos medios contienen los nutrientes y factores de crecimiento en
suspensión o dilución en agua, así como sales o iones en concentración definida. Se
emplea fundamentalmente para cultivar los microorganismos y obtener grandes
cantidades de los mismos o bien la producción de metabolitos específicos.
Sólidos: estos medios se preparan a partir de medios líquidos pero se le adiciona como
polímero gelificante agar-agar al 1.5%. Este agar es obtenido de algas marinas y está
constituido principalmente por subunidades de galactosa. Se emplean para obtener y
aislar colonias de microorganismos (bacterias y hongos). Los medios sólidos constituyen
la mayor parte de los medios de cultivo que se emplean en microbiología.
Semisólidos: se preparan a partir de medios líquidos, agregando a estos agar-agar al
0,7%, lo cual permite que su consistencia sea más blanda que un medio sólido; esta
característica hace que estos medios sean utilizados para determinar la movilidad de los
microorganismos.
B. Según su origen o composición:
Naturales: son los preparados a partir de sustancias de origen animal o vegetal como
extractos de tejidos o infusiones; su composición química no se conoce exactamente.
Sintéticos: son los medios que contienen una composición química definida tanto
cualitativa como cuantitativamente.
Semisintéticos: son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento en
forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
C. Por su uso:
Medio enriquecido: son medios que contienen compuestos orgánicos que estimulan el
crecimiento y desarrollo de un amplio grupo de microorganismos.
Medios selectivos: contienen sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos, pero facilitan el crecimiento de otros.

Medios diferenciales: son aquellos que contienen indicadores de ácido base, redox o
sustancias que permiten detectar diferentes características bioquímicas de uno o más
grupos de microorganismos.
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Medios de transporte: sirven para trasladar muestras que contienen microorganismos.

Estos medios impiden que se altere la proporción original de la microbiota en las
muestras recolectadas.

OBJETIVOS
 Conocer y aprender a preparar los diferentes medios de cultivo empleados
rutinariamente en Microbiología.
 Ejercitarse en los cálculos matemáticos necesarios para la preparación de los medios de
cultivo.

MATERIALES
 Balanza
 Erlenmeyers de 250mL.
 Probeta graduada 100mL o 250mL.
 10 cajas de Petri.
 Espátulas.
 Agar Nutritivo (AN).
 Glucosa.
 Agar-agar.
 Extracto de Papa.
 Cajas de Petri estériles.

PROCEDIMIENTO

Día 1.

1. Preparación de un medio de cultivo sintético - Agar Nutritivo (AN)

El agar nutritivo es un medio de cultivo que se utiliza para propósitos generales, como lo es el
aislamiento de bacterias poco exigentes con respecto a requerimientos nutricionales. Los
medios de cultivo comercialmente disponibles se presentan como polvos deshidratados,
estériles y deben ser conservados en sus frascos originales con la tapa fuertemente ajustada.
Antes de preparar cualquier medio se debe leer cuidadosamente el rótulo del envase y fijarse la
fecha de vencimiento.

Instrucciones para la preparación del AN:

1. Leer el rótulo del empaque del medio AN.

2. Realizar los cálculos para preparar 5 cajas de Petri de agar nutritivo, teniendo en cuenta
que el volumen por caja es de 20mL.
3. Pesar el medio y adicionar en un erlenmeyer.
4. Completar con agua destilada según el volumen previamente calculado.
5. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.
6. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución.
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7. Tapar y enviar a esterilización por autoclave 121°C (15 libras de presión 15 minutos) el
medio previamente preparado.
8. Almacenar en nevera luego de esterilización (actividad a cargo de monitrores).

2. Preparación de un medio de cultivo semisintético Agar Papa Dextrosa Agar (PDA)

Este medio se utiliza para estimular el crecimiento y la esporulación de hongos. Aunque el PDA
se encuentra comercialmente, puede ser preparado en el laboratorio.

Fórmula:

Papa 250 gramos

Glucosa 20 gramos
Agar-agar 20 gramos
Agua destilada Llevar a 1 Litro

TRABAJO PREVIO EN CASA:

Instrucciones para preparar el extracto de papa:

1. Pesar 250 gr de papa (sabanera), pelar, lavar y partir en rodajas.

2. Agregar 200mL de agua destilada y dejar hervir 20 minutos.
3. Dejar enfriar.
4. Filtrar en un recipiente limpio utilizando una gasa. Guardar el filtrado en nevera (4°C) y
traer luego al laboratorio.

Instrucciones para la práctica:

1. Realizar los cálculos para preparar 5 cajas de Petri de agar PDA, teniendo en cuenta
que el volumen por caja es de 20mL.
2. Medir la cantidad necesaria de filtrado de papa para preparar 5 cajas de Petri.
3. Pesar la cantidad de glucosa (requerida) sobre papel en la balanza.
4. Pesar la cantidad de agar-agar (requerida) sobre papel en la balanza.
5. Medir la cantidad necesaria de agua destilada para preparar el agar nutritivo.
6. Adicionar en un erlenmeyer el filtrado de papa, la glucosa, el agar-agar y el agua
destilada.
7. Mezclar vigorosamente sin derramar el contenido del erlenmeyer.
8. Calentar hasta ebullición con agitación constante y a fuego suave para lograr su
disolución completa.
9. Tapar y enviar a esterilización por autoclave 121°C (15 libras de presión 15 minutos) el
medio previamente preparado.
10. Almacenar en nevera luego de esterilización (actividad a cargo de monitores).

Día 2

1. Fundir el medio de cultivo esterilizado.

2. Distribuir en cajas de Petri estériles, cuando el medio esté a una temperatura de 55°C
aproximadamente.
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Cuestionario complementario:

1. ¿Cuál es la fuente de carbono de cada uno de los medios preparados en el laboratorio?

2. ¿Cuál es la fuente de nitrógeno de cada uno de los medios preparados en el
laboratorio?
3. ¿Qué clase de microorganismos crecen en los medios de cultivo preparados?
4. ¿Qué es un suplemento? ¿Con qué fin se utilizan los suplementos en los medios de
cultivo?
5. ¿Qué otros métodos de esterilización existen?
6. En medios suplementados, ¿Cómo debe ser el proceso de esterilización y de adicione
de suplementos?