CARRERA: Ingeniería en Innovación Agrícola Sustentable MATERIA: Diagnóstico de enfermedades en plantas

GRUPO: 72IB
DOCENTE: Ma. de Lourdes Velázquez Hernández FECHA: 02 de diciembre NOMBRE DEL ALUMNO: Carolina Yanin Méndez Ochoa
de 2022
COMPETENCI Conoce, aísla y realiza la identificación de ACTIVIDAD DE Tabla comparativa de las técnicas de identificación de
A ESPECIFICA: patógenos de plantas. EVALUACIÓN: fitopatógenos.
Unidad 3

Tabla comparativa de las técnicas de identificación de fitopatógenos .

Técnica Fundamento Nombre ejemplos de estas El análisis ¿Para qué tipo de Mencione el equipamiento
técnicas mantiene los microorganismo necesario para la técnica
patógenos es apto?*
vivos o
muertos
Cultivo de Método para la multiplicación de
microorganismo microorganismos, tales como lo  Medios Simples: Poseen  Placa Petri con
s son bacterias en el que se prepara los requisitos nutricionales agar agar.
un medio óptimo para favorecer para permitir el desarrollo  Asa de siembra o
el proceso deseado. El cultivo es bacteriano general, material estéril.
el proceso de proliferación de ejemplos:  Estufa de
microorganismos al  agar nutritivo, caldo laboratorio.
proporcionarles un entorno nutritivo, entre otros. VIVOS BACTERIAS, VIRUS  Mechero Bunsen.
apropiado. Los microorganismos  Medios enriquecidos: Y HONGOS.  Agua destilada.
en proliferación producen réplicas Son medios simples o  Rotulador
de sí mismos y necesitan los comunes, a los que se le permanente.
elementos presentes en su añaden ciertos elementos  Papel secante.
composición química. Además, los como sangre, suero,  Guantes latex.
microorganismos requieren líquido ascítico, huevo,
energía metabólica para sintetizar glucosa, vitaminas, etc. Lo
macromoléculas y mantener que permite el aporte de
gradientes químicos esenciales a factores de crecimiento o
través de sus membranas. sustancias que neutralizan
agentes inhibidores del
crecimiento en bacterias
exigentes
nutricionalmente, entre
algunos ejemplos:
 agar sangre, medio de
 Löwenstein-Jensen,
enriquecido con huevo
para facilitar el
crecimiento de
Mycobacterium;
 agar desoxicolato-lactosa
(DLA), enriquecido con
lactosa y desoxicolato.
 Medios selectivos:
Se consiguen añadiendo al
agar nutritivo compuestos
químicos nocivos para
algunas bacterias cuyo
crecimiento no es de
interés o también
mediante una alteración
de las condiciones físicas
del medio, entre algunos
ejemplos tenemos:
 El agar Mac Conkey que
contiene cristal violeta.
Thayer-Martin medio
selectivo para Neissar, ya
que este posee
antibióticos como la
vancomicina colistina y
nistatina.
 Caldo lactosado bilis verde
brillante en donde la bilis
inhibe el crecimiento de
bacterias gran positivas.
 Löwenstein-Jensen con
verde de malaquita es
selectivo para
Mycobacterium.
 Medios diferenciales:
permiten observar
macroscópicamente
ciertas propiedades de
 crecimiento que ayudan a
diferenciar sus colonas de
otras especies diferentes,
entre algunos ejemplos:
 Agar eosina azul de
metileno (EMB), diferencia
E. coli (color verde
metálico brillante) de
colonias de Enterobacter
aerogenes (color rosado,
consistencia mucosa y
crecimiento abundante).
 Agar sangre, diferencia
variedades de
Streptococcus pyogenes
en Streptococcus
betahemolíticos de
Streptococcus alfa
hemolítico y gama
hemolítica.
 Agar Salmonella-Shigella
tiene lactosa y un
indicador de Ph que
permite diferenciar las
colonias de bacterias
fermentadoras de este
disacárido.
 Medios de
enriquecimiento
Son medios líquidos que
favorecen o permiten la
multiplicación de las
bacterias cuando la
muestra obtenida es muy
pobre, por ejemplo:
 Caldo tioglicolate,
favorece el crecimiento de
las bacterias anaeróbicas.
 Caldo tetrationato
 favorece crecimiento de
bacterias microaerófilas.
 Los caldos bilis y de
Muller-Kauffman,
favorecen el crecimiento
del género Salmonella.
 Caldo o agua peptonada
se utiliza para el
crecimiento de Vibrio
Cholerade.
Serológicas o Las técnicas serológicas clásicas
inmunológicas (neutralización, fijación del  Inmunofluorescencia (IF).  Autoanalizador
complemento e inhibición de la
 Radioinmunoensayo (RIA).  Espectrofotómetro
hemaglutinación, entre otras)
detectan anticuerpos totales, por  Enzima; ensayo de VIVOS. VIRUS  Lectores de micro
lo que no proporcionan un
diagnóstico rápido. En general, inmunosorbentes placas
requieren de procesos vinculados (ELISA).  Monocromador
preanalíticos para eliminar
reactantes inespecíficos, y no  Inmunodifusión (ID).
están automatizadas, por lo que  Antígenos
no son técnicas de rápida
ejecución. Las técnicas  Inmunoelectromicroscopí
inmunológicas de detección de a (IEM).
antígenos nos permiten detectar
la presencia de microorganismos
o de fragmentos de los mismos en
las muestras clínicas.
Microscopia El funcionamiento de un
óptica microscopio óptico se basa en el  Microscopio de campo  Microscopio
empleo de un haz de fotones que oscuro. óptico, Olympus
incide sobre la muestra a observar  Microscopio de luz BX60 :
y de una serie de lentes ópticas polarizada o petrográfico. transmisión-
para crear una imagen aumentada  Microscopio de contraste MUERTOS. BACTERIAS, VIRUS reflexión, campo
de dicha muestra. Por lo general de fases. y PROTOZOOS. claro-campo
se utilizan microscopios  Microscopio de contraste oscuro y con luz
compuestos, que disponen de por interferencia polarizada en
varias lentes con las que se diferencial. modo de
consigue aumentar la imagen transmisión y un
 hasta dos mil veces. Los sistema de
microscopios ópticos actuales adquisición de
tienen un poder de resolución de imágenes digital
0,2 µm, unas mil veces superior al Motic 3,
del ojo humano. accesorios para el
acoplamiento de
cámaras digitales.

 Microscopio
óptico invertido
(preparado para
observar cultiuvos
celulares,
plancton, mostras
de aguas...) en
camp claro y con
contraste de
interferencia, y un
sistema de
adquisición digital.
És un Zeiss
Axiovert 100.

 MO Leitz.
Microscopia El Microscopio electrónico de  Microscopio
electrónica de barrido o SEM (Scanning Electron  Nano-estructurados. electrónico de
barrido Microscope), es aquel que utiliza  Aleaciones metálicas. Barrido JEOL JSM-
un haz de electrones en lugar de  Polímeros. 6460LV con
un haz de luz para formar una  Minerales. VIVOS. BACTERIAS, detectores de
imagen. Tiene una gran  Fibras. VIRUS, HONGOS. electrones
profundidad de campo, la cual  Películas delgadas. retrodispersados,
permite que se enfoque a la vez  Biomateriales. electrones
una gran parte de la muestra.  En algunos casos muestras secundarios y
También produce imágenes de con alto contenido en energía dispersiva
alta resolución, que significa que humedad. de Rayos X.
características espacialmente
cercanas en la muestra pueden  Es un detector de
ser examinadas a una alta área que permite
magnificación. La preparación de realizar análisis de
las muestras es relativamente fácil composición
pues la mayoría de SEMs sólo químico elemental
requieren que estas sean de una gran
conductoras. variedad de
muestras de forma
En el microscopio electrónico de puntual, de área,
barrido la muestra generalmente mapping, etc.
es recubierta con una capa de
carbón o una capa delgada de un  Dispone de un
metal como el oro para darle sistema de bajo
propiedades conductoras a la vacío que permite
muestra. Posteriormente es obtener imágenes
barrida con los electrones de muestras poco
acelerados que viajan a través del o no conductoras.
cañón.
 En el servicio se
cuenta con un
equipo de
metalización con
Au y C (Emitech
500).

Partes esenciales del

microscopio electrónico de
barrido son: el sistema de
vacío, la columna de
electrones, la cámara
portamuestras y el sistema
de adquisición y
procesamiento de
imágenes.

Instrumentos:
 Cañón
termoiónico de W.
 Potencial de
aceleración de 0.3
kV a 30kV.
 Configurable para
 trabajar en modo
de alto vacío y a
presión variable
(VP-SEM).
 Resolución en
modo alto vacío
de hasta 3.0 nm y
de 4.5 nm en
modo VP-SEM.
 Rango de presión
variable de 1 a 270
Pa.

Microscopia El microscopio electrónico de  Cañón de

electrónica de transmisión emplea la  Bacteriófagos que son electrones.
transmisión transmisión/dispersión de los virus que infectan  Lentes
electrones para formar imágenes, exclusivamente a las magnéticas.
la difracción de los electrones bacterias.  Sistema de vacío.
para obtener información acerca  Levadura de pan  Placa fotográfica o
de la estructura cristalina y la (Saccharomyces pantalla
emisión de rayos X característicos cerevisiae) que es un fluorescente.
para conocer la composición hongo unicelular. VIVOS. BACTERIAS,  Sistema de
elemental de la muestra.  Rotavirus causante de HONGOS, registro.
gastroenteritis o infección NEMATODOS Y  Microscopio
Para que se produzca la intestinal. VIRUS. electrónico de
transmisión de electrones a través transmisión marca
de la muestra es necesario que JEOL modelo JEM-
ésta sea delgada, es decir, 2010. La cámara
transparente a los electrones. Es de adquisición de
recomendable no utilizar imágenes es de la
muestras de más de 100 nm de marca GATAN
grosor ya que cuanto menor sea el modelo ORIUS
espesor de la muestra mejor SC600. Está
calidad de imágenes se puede montada en eje
obtener. con el microscopio
en la parte inferior
Se utiliza, entre otras cosas, para y está integrada
obtener imágenes del interior de dentro del
las células (en secciones), la programa de
estructura de las moléculas de adquisición y
proteína (en contraste con el tratamiento de
metal imágenes GATAN
sombreado), la organización de DigitalMicrograph
moléculas en virus y 1.80.70 para GMS
citoesqueleto. 1.8.0.
Filamentos (preparados por la
técnica de tinción negativa). Instrumental para la
En el microscopio electrónico de preparación de muestras:
transmisión se irradia una
muestra delgada con un haz de  Ultramicrotomo
electrones de 200 keV. Parte de marca RMC
esos electrones son transmitidos, modelo MTXL con
otra parte son dispersados y otra sistema de
parte da lugar a interacciones que criocorte y
producen distintos fenómenos máquina de
como emisión de luz, electrones preparación de
secundarios y Auger, rayos X. cuchillas de vidrio
de la misma
marca.

 Adelgazador por
bombardeo iónico
marca GATAN
modelo 691. Con
los accesorios de
la misma marca:
punzón por
ultrasonidos,
pulidor manual y
adelgazador
cóncavo-convexo.

 Adelgazador
electrolítico marca
STRUERS modelo
Tenupol-5.

 Cortadora de disco
 marca STRUERS
modelo Accutom-
5.
Técnicas Estas técnicas están basadas en la  Micropipetas.
moleculares reacción de PCR y sus derivados,  La PCR múltiple.  Puntas para PCR.
(PCR) en algunos casos además se  PCR anidada  Placas.
requieren cortes de los  RT-PCR  Autoclave.
fragmentos amplificados con  PCR cuantitativa  Tubos para PCR.
enzimas de restricción o  PCR múltiple  Gradilla para tubos
secuenciación de los fragmentos  PCR in situ de PCR.
amplificados.  PCR en tiempo real o VIVOS. BACTERIAS.  Instrumentos de
qPCR. PCR en tiempo
La reacción en cadena de la  PCR digital real.
polimerasa (PCR) es una técnica  Preparar fragmentos de  Computadora.
para la síntesis "in vitro" de ADN para su clonación en  Termociclador.
secuencias específicas de ADN. Es plásmidos bacterianos o  Buffer de Reacción
una forma simple y muy rápida de virus para utilizarlos como Taq 10X.
multiplicar el ADN presente en vectores, paso  dNTPs.
diferentes muestras biológica, imprescindible en el  Primers.
obteniéndose millones de copias desarrollo de terapias  ADN estándar.
de una determinada secuencia de génicas.  Agua libre de
ADN. Nucleasas.
 Taq Polimerasa.

Plantas Las plantas indicadoras pueden

indicadoras emplearse para la identificación  Tranmision mecánica o  Gradillas
de enfermedades virales, por jugos.  Frascos de cristal
mediante la sintomatología  Transición por pulgones.  Micropipetas
desarrollada. Es una planta que  Tranmision por  Pipetas
reacciona a ciertos virus, otros propagación vegetativa. VIVOS. VIRUS.  Microscopio
patógenos o factores ambientales  Inoculacion al suelo o  Termómetros
con producción de síntoma raíces.  Aire
específicos y es usada para la  Inoculacion al tallo o acondicionado
detección e identificación de estos rama.
factores. Estas plantas deben ser  Inoculación en órganos
variedades muy susceptibles de la carnosos.
misma especie estudiada, debe
tener reproducción por semilla y
ser de talla pequeña. Este método
 se utiliza cuando es limitado el
uso de métodos tradicionales
microbiológicos para la
identificación del patógeno.
* Bacterias, hongos, nematodos o virus.