Práctica 6 Bacteriología Pii23

Universidad Estatal del Sur de Manabí
CREADA EL 7 DE FEBRERO DEL AÑO 2001, MEDIANTE REGISTRÓ OFICIAL # 261

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE LABORATORIO CLINICO
UNIVERSIDAD ESTATAL DEL SUR DE MANABI

ESTUDIANTE EN FORMACIÓN
ALONZO MACIAS KARLA XIOMARA
ANCHUNDIA PILOSO JERITHZA FABIANA
ARTEAGA ZAMBRANO ANA SOFIA
TEMADEL INFORME:
DIAGNÓSTICO EN EL LABORATORIO CLÍNICO DE ESTREPTOCOCOS
LICENCIADA
TERESA VÉLIZ CASTRO
ASIGNATURA
BACTERIOLOGÍA
SEMESTRE/PARALELO
5to “C”
JIPIJAPA-MANABI-ECUADOR
2023
- P á g i n a 1 | 27-
INFORME DE
PRÁCTICA DE
LABORATORIO N° 6
- P á g i n a 2 | 27-
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 6

INFORMACION GENERAL
ESTUDIANTE: SEMESTRE/PARALELO: : 5to “C”
Alonzo Macias Karla Xiomara
Anchundia Piloso Jerithza Fabiana
Arteaga Zambrano Ana Sofia
ASIGNATURA: BACTERIOLOGÍA FECHA:
DOCENTE: LIC. TERESA VÉLIZ CASTRO. PhD HORA: 09:30 – 10:30
TEMA DE LA PRÁCTICA:
• Diagnóstico en el laboratorio clínico de Diplococos Gramnegativos. Neisserias gonhorroeae,

N. meningitidis
OBJETIVO:
• Fundamentar el diagnóstico en el laboratorio clínico de Diplococos Gramnegativos. Neisserias

gonhorroeae, N. meningitidis
FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA (Bibliografía)

Colocar contenido teórico sobre las pruebas realizadas en la práctica:
Neisserias generalidades
Las Neisserias son un género de bacterias gramnegativas, cocáceas y aerobias. Son diplococos que se agrupan en pares. Las especies más
conocidas son Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae. Pueden causar enfermedades como meningitis y gonorrea. Se transmiten
a través del contacto directo con secreciones respiratorias o genitales de personas infectadas. Se diagnostican mediante cultivo y pruebas
bioquímicas. Son importantes debido a su capacidad para causar enfermedades graves y desarrollar resistencia a los antibióticos. El
diagnóstico temprano, el tratamiento adecuado y las medidas preventivas son fundamentales para controlar estas infecciones. (1)
Especies de importancia clínica
Dentro del género Neisseria, hay dos especies de importancia clínica destacada:
1. Neisseria meningitidis: Es el agente causante de la meningitis meningocócica, una infección grave que afecta las meninges (las
membranas que rodean el cerebro y la médula espinal). También puede causar sepsis meningocócica, una forma potencialmente mortal
de infección generalizada. La enfermedad se transmite a través del contacto cercano con las secreciones respiratorias de una persona
infectada. Existen diferentes serogrupos de N. meningitidis, y la vacunación se utiliza para prevenir la enfermedad en ciertos grupos de
población. (2)
2. Neisseria gonorrhoeae: Es la bacteria responsable de la gonorrea, una enfermedad de transmisión sexual común. La gonorrea afecta
principalmente el tracto genital, pero también puede infectar la garganta, los ojos y el recto. Si no se trata adecuadamente, puede llevar a
complicaciones graves, como la enfermedad inflamatoria pélvica en las mujeres o la esterilidad. La resistencia a los antibióticos es un
problema creciente en N. gonorrhoeae, lo que dificulta su tratamiento eficaz. (3)
Estas dos especies son de gran importancia clínica debido a la gravedad de las enfermedades que pueden causar y a su capacidad de
propagación. El diagnóstico y tratamiento oportunos, así como las medidas preventivas, como la vacunación y el uso adecuado de
preservativos, son fundamentales para controlar la propagación de estas infecciones. (4)
Muestras clínicas de donde se aíslan Neisserias
Las Neisserias se pueden aislar de diversas muestras clínicas, dependiendo de la enfermedad que se sospeche. Algunas de las muestras
clínicas comunes incluyen: (5)
1. Hemocultivos: Se obtienen muestras de sangre para detectar la presencia de Neisseria meningitidis en casos de sepsis meningocócica.
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2. Líquido cefalorraquídeo (LCR): Se realiza una punción lumbar para obtener muestras de LCR y detectar la presencia de Neisseria
meningitidis en casos de meningitis.
3. Exudados genitales: Se recogen muestras de secreciones genitales en hombres y mujeres para aislar Neisseria gonorrhoeae en casos
de gonorrea.
4. Exudados faríngeos: Se toman hisopos de la garganta para detectar la presencia de Neisseria meningitidis en portadores asintomáticos
o en casos de faringitis meningocócica.
5. Secreciones oculares: Se recogen muestras de secreciones oculares en casos de conjuntivitis gonocócica, una infección ocular causada
por Neisseria gonorrhoeae. (6)
Agares en que se recuperan Neisserias
Para el aislamiento y cultivo de Neisserias, se utilizan varios tipos de agar que proporcionan condiciones adecuadas para su crecimiento.
Algunos de los agares comúnmente utilizados incluyen: (7)
1. Agar sangre: El agar sangre es el medio de cultivo más utilizado para las Neisserias. Contiene sangre de oveja o caballo, que
proporciona nutrientes y factores de crecimiento necesarios para el crecimiento de las bacterias. Además, permite la observación de la
hemólisis, lo que puede ayudar a diferenciar las especies de Neisseria.
2. Agar chocolate: El agar chocolate es una variante del agar sangre en el que la sangre se calienta a 80-90°C para liberar los factores
de crecimiento esenciales. Este medio es especialmente útil para el cultivo de Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae.
3. Agar Thayer-Martin: Es un medio selectivo utilizado específicamente para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae. Contiene
antibióticos como la vancomicina, la colistina y la nistatina, que inhiben el crecimiento de otras bacterias y hongos, permitiendo el
crecimiento selectivo de Neisseria gonorrhoeae. (8)
4. Agar Martin-Lewis: Similar al agar Thayer-Martin, el agar Martin-Lewis también es un medio selectivo utilizado para el aislamiento
de Neisseria gonorrhoeae. Contiene los mismos antibióticos, pero a diferentes concentraciones.
Pruebas de identificación para Neisserias
Para la identificación precisa de las especies de Neisseria, se utilizan una combinación de pruebas bioquímicas, serológicas y moleculares.
Algunas de las pruebas comunes incluyen: (9)
1. Pruebas bioquímicas:
- Oxidasa: Las Neisserias son oxidasa positivas, lo que significa que producen la enzima oxidasa. Esta prueba se realiza utilizando un
reactivo oxidasa y se observa un cambio de color característico.
- Fermentación de carbohidratos: Se pueden realizar pruebas para determinar si la bacteria fermenta determinados carbohidratos,
como glucosa, maltosa y sacarosa, utilizando tubos de cultivo con medios específicos.
- Reacción de hidrólisis de arginina: Se puede realizar una prueba para verificar la hidrólisis de arginina por parte de las Neisserias,
utilizando un medio de cultivo con arginina y un indicador de pH.
2. Pruebas serológicas:
- Aglutinación con sueros específicos: Se utilizan sueros específicos para identificar los diferentes serogrupos de Neisseria
meningitidis. La bacteria se expone a los sueros y se observa la aglutinación, lo que indica la presencia de antígenos específicos. (10)
3. Pruebas moleculares:
- Reacción en cadena de la polimerasa (PCR): La PCR se utiliza para detectar secuencias de ADN específicas de Neisseria
meningitidis o Neisseria gonorrhoeae. Se pueden realizar pruebas específicas para identificar serogrupos, determinar resistencia a los
antibióticos u otros marcadores genéticos.
- Secuenciación del ADN: La secuenciación del ADN se puede utilizar para analizar el perfil genético de las Neisserias y compararlo
con bases de datos de referencia para una identificación precisa. (11)
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Susceptibilidad antibiótica de Neisserias
La susceptibilidad antibiótica de las Neisserias, especialmente Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae, es un tema de
preocupación debido al aumento de la resistencia a los antibióticos en estas bacterias. Aquí hay algunas consideraciones generales sobre
la susceptibilidad antibiótica de las Neisserias (12)
1. Neisseria meningitidis:
- Penicilina: La mayoría de las cepas de Neisseria meningitidis son sensibles a la penicilina y otros antibióticos betalactámicos.
- Cefalosporinas: Las cefalosporinas de tercera generación, como la ceftriaxona, son efectivas y generalmente se consideran el
tratamiento de elección para las infecciones invasivas causadas por Neisseria meningitidis.
- Resistencia: Sin embargo, se han informado casos de resistencia adquirida a los antibióticos, especialmente a la penicilina, en algunas
cepas de Neisseria meningitidis. Por lo tanto, se recomienda realizar pruebas de susceptibilidad antibiótica para guiar el tratamiento. (13)
2. Neisseria gonorrhoeae:
- Penicilina y cefalosporinas: En el pasado, la penicilina y las cefalosporinas eran eficaces en el tratamiento de la gonorrea causada por
Neisseria gonorrhoeae. Sin embargo, ha habido un aumento preocupante de la resistencia a estos antibióticos. (14)
- Tratamiento actual: Actualmente, las cefalosporinas de tercera generación, como la ceftriaxona, se consideran el tratamiento de
elección para la gonorrea. Sin embargo, se han reportado casos de resistencia a la ceftriaxona y a otros antibióticos, lo que ha llevado a
la necesidad de monitorear de cerca la resistencia y ajustar las pautas de tratamiento en consecuencia.
- Detección de resistencia: Se recomienda realizar pruebas de susceptibilidad antibiótica para determinar la resistencia de Neisseria
gonorrhoeae a los diferentes antibióticos y asegurar un tratamiento efectivo. (15)
Bibliografía
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2. CONCEPTOS EPIDEMIOLOGICOS GENERALES. [Online].; 01. Available from:

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3. Fernández-Billón M. sciencedirect. [Online].; 2022 [cited 2023 06 11. Available from:

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7. Kramer LD. msdmanuals. [Online].; 2023 [cited 20223 05 31. Available from:
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virales/introducción-a-las-infecciones-virales.
8. Lexis Finder. LEY-ORGÁNICA-DE-SALUD4. [Online].; 2016 [cited 2023 06 12. Available from:
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9. Miguel Leonardo García León. Scielo. [Online].; 2022 [cited 2023 06 11. Available from:
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3.
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5. https://www.ucm.es/mastervirologiaucm/introduccion-a-la-biologia-de-los-virus.
Aquí deben detallar los materiales que se utilizan en esta práctica

MATERIALES/INSUMOS Y EQUIPOS A UTILIZAR
MATERIALES INSUMOS EQUIPOS MUESTRA
Microscopio óptico Soluciones de tinción de Gram Incubadora Muestra de exudado uretral
Láminas y portaobjetos cristal violeta Microscopio óptico Muestra de exudado cervical
Soluciones de tinción de Lugol Vortex Muestra de exudado faríngeo

Gram
alcohol descolorante Microcentrífuga Muestra de exudado rectal
Agar de cultivo
safranina Baño maría Muestra de líquido
Equipo de Protección cefalorraquídeo (LCR)
personal Asas de siembra o asas de Centrífuga
platino
Autoclave Incubadora
Antibióticos
Estufa bacteriológica
Reactivos químicos
Placas de Petri
Hisopos estériles
Pipetas y puntas de
pipeta
Tubos de ensayo
Microtubos
Discos de papel filtro

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DESARROLLO:
Aquí deben describir o detallar lo realizado en prácticas
CULTIVO BACTERIOLOGÍCO DE: Diplococos Gramnegativos. Neisserias gonhorroeae, N. meningitidis
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR DEL DÍA 1: (aquí enumerar y describir cada actividad del día 1, puede
utilizar imágenes, fotos dibujos lo que le quede accesible, toda prueba incluido agares, tipos de estría,
deben describir el procedimiento)
Neisserias gonhorroeae
• Toma de muestra para Neisseria gonorrhoeae
La toma adecuada de muestra para la detección de Neisseria gonorrhoeae es crucial para obtener
resultados precisos en el diagnóstico de la gonorrea. Aquí están los pasos generales para la toma de
muestra:
1. Exudados genitales:
• - Hombres: La muestra se obtiene mediante un hisopo estéril que se frota suavemente en el área
uretral, que es el conducto por el que pasa la orina y el semen. El hisopo se introduce
aproximadamente 2-4 centímetros en la uretra para recolectar el exudado.
• - Mujeres: La muestra se obtiene utilizando un hisopo estéril que se frota suavemente en la uretra,
el cuello uterino o la vagina. Se puede utilizar un espéculo para visualizar y acceder al cuello uterino
de manera adecuada. También se pueden obtener muestras de la región anal en caso de sospecha
de infección en esta área.
2. Secreciones faríngeas:
La muestra se obtiene utilizando un hisopo estéril que se frota suavemente en la parte posterior de la
garganta y las amígdalas.
3. Secreciones rectales:
La muestra se obtiene utilizando un hisopo estéril que se frota suavemente en el recto o en cualquier área
que presente secreciones o signos de inflamación.
Es importante tener en cuenta las siguientes consideraciones durante la toma de muestra:
• - Es esencial utilizar hisopos estériles para evitar la contaminación de la muestra.
• - Se debe tener cuidado para no dañar la punta del hisopo y asegurarse de obtener suficiente
material para el análisis.
• - Las muestras deben recolectarse antes de la administración de antibióticos, si es posible, ya que
el tratamiento previo puede afectar los resultados.
• - Es fundamental seguir las pautas y los protocolos establecidos por el laboratorio clínico para la
toma, el transporte y el almacenamiento adecuados de las muestras.
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Tinción de Gram en Fresco
1. Preparación de la muestra: La muestra clínica, como el exudado genital, se coloca en un portaobjetos

limpio y se extiende en una capa delgada.
2. Fijación: El portaobjetos con la muestra se calienta suavemente sobre una llama o se sumerge
brevemente en una fuente de calor para fijar la muestra al portaobjetos. Esto ayuda a adherir las células a
la superficie y evita que se desprendan durante los pasos posteriores.
3. Tinción de Gram:
- Se aplica la solución de cristal violeta (colorante primario) sobre la muestra y se deja actuar durante
aproximadamente 1 minuto.
- Se enjuaga suavemente con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.
- Se aplica la solución de lugol (mordiente) sobre la muestra y se deja actuar durante aproximadamente 1
minuto.
- Se enjuaga suavemente con agua destilada para eliminar el exceso de mordiente.
- Se realiza una decoloración rápida con alcohol-acetona (desarrollador) para eliminar el colorante de las
células gram negativas, como las Neisserias. La decoloración se realiza durante unos segundos hasta que el
escurrimiento se aclare.
- Se enjuaga nuevamente con agua destilada para detener la decoloración.
- Se aplica la solución de safranina (colorante de contraste) sobre la muestra y se deja actuar durante
aproximadamente 1 minuto.
- Se enjuaga con agua destilada y se seca suavemente.
4. Observación microscópica: El portaobjetos se coloca en un microscopio óptico y se observa utilizando

los objetivos de bajo y alto aumento. Las Neisserias gonorrhoeae aparecerán como diplococos
gramnegativos, es decir, como pares de bacterias con forma de frijol.
Siembra (tipo de estriado)

La siembra o estriado de Neisseria gonorrhoeae se realiza utilizando la técnica de estriado en cuadrante en
placas de agar selectivo. Aquí están los pasos generales para la siembra de Neisseria gonorrhoeae:
1. Preparación del medio selectivo: Se utiliza un medio de cultivo selectivo como el agar Thayer-Martin o
el agar Martin-Lewis, que contienen antibióticos para inhibir el crecimiento de otras bacterias y permitir el
crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.
2. Preparación de la suspensión de la muestra: La muestra clínica, como un exudado genital, se recoge y

se suspende en un medio de transporte adecuado, como el medio Stuart. La muestra se agita suavemente
para dispersar las bacterias en el medio.
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3. Siembra en cuadrante:
- Se toma un asa bacteriológica estéril y se carga con una pequeña cantidad de la suspensión de la
muestra.
- Se realiza un estriado en cuadrante en la superficie del agar selectivo. Esto implica hacer un primer
estriado en un cuadrante del plato, luego girar el plato 90 grados y hacer un segundo estriado que se cruza
con el primero.
- Se repite el procedimiento de estriado en cuadrante con el asa bacteriológica estéril en diferentes áreas
del plato, evitando que los estriados se superpongan.
- Se repite el proceso con diluciones seriadas de la muestra si se desea obtener colonias individuales
aisladas.
4. Incubación: Las placas de agar se incuban en condiciones adecuadas, como una temperatura de 35-37 °C
y una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono (CO2), que favorece el crecimiento de Neisseria
gonorrhoeae. La incubación se realiza durante aproximadamente 24-48 horas.
5. Observación y análisis: Después de la incubación, se observa el crecimiento bacteriano en las placas de

agar. Las colonias típicas de Neisseria gonorrhoeae aparecerán como colonias convexas, lisas y de color
grisáceo. Se pueden realizar pruebas adicionales, como pruebas bioquímicas y pruebas moleculares, para
confirmar la identificación de Neisseria gonorrhoeae.
En que agares se siembra
Para el cultivo de Neisseria gonorrhoeae, se utilizan principalmente dos tipos de agar selectivo:
1. Agar Thayer-Martin: Es un medio de cultivo selectivo y diferencial que contiene ingredientes para inhibir
el crecimiento de bacterias no deseadas y promover el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae. Los
componentes principales del agar Thayer-Martin incluyen:
- Antibióticos: Como la vancomicina, la colistina y la nistatina, que inhiben el crecimiento de bacterias
grampositivas, gramnegativas y hongos.
- Hemoglobina o sangre desfibrinada: Proporciona los factores de crecimiento necesarios para el
crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.
- Medios de enriquecimiento: Como el factor V (NAD) y el factor X (hemina), que ayudan al crecimiento
óptimo de las Neisserias.
2. Agar Martin-Lewis: Similar al agar Thayer-Martin, el agar Martin-Lewis también es un medio selectivo y
diferencial para el cultivo de Neisseria gonorrhoeae. Sus componentes principales incluyen:
- Antibióticos: Como la vancomicina, la colistina y la nistatina, para inhibir el crecimiento de bacterias no
deseadas.
- Factores de crecimiento: Como el factor V (NAD) y el factor X (hemina), que favorecen el crecimiento de
Neisseria gonorrhoeae.
- Carbón activado: Ayuda a absorber sustancias inhibidoras presentes en la muestra clínica.
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Ambos agar Thayer-Martin y agar Martin-Lewis son utilizados para aislar y cultivar Neisseria gonorrhoeae
en muestras clínicas, como exudados genitales, rectales o faríngeos. Estos medios selectivos proporcionan
condiciones óptimas para el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae y permiten la supresión del crecimiento
de otras bacterias no deseadas.
Incubación
La incubación es una etapa clave en el cultivo de Neisseria gonorrhoeae y se realiza después de sembrar las
muestras en los medios de agar selectivos. Durante la incubación, se proporcionan las condiciones óptimas
de temperatura y atmósfera para permitir el crecimiento de las bacterias y permitir su posterior
identificación. Aquí están los aspectos importantes relacionados con la incubación de Neisseria
gonorrhoeae:
1. Temperatura: Neisseria gonorrhoeae se cultiva mejor a una temperatura de incubación de 35-37 °C. Esta
es la temperatura óptima para el crecimiento y desarrollo de las colonias.
2. Atmosfera: Neisseria gonorrhoeae es una bacteria que crece mejor en una atmósfera rica en dióxido de
carbono (CO2) y baja en oxígeno. Se recomienda incubar las placas de agar en una incubadora que
proporcione una atmósfera enriquecida con CO2, generalmente alrededor del 5-10% de CO2.
3. Duración de la incubación: El tiempo de incubación para Neisseria gonorrhoeae varía, pero generalmente
se incuban durante aproximadamente 24-48 horas. Durante este período, las colonias de Neisseria
gonorrhoeae crecerán y se desarrollarán en las placas de agar.
4. Observación durante la incubación: Durante el período de incubación, es importante observar las placas
de agar para detectar el crecimiento de colonias características de Neisseria gonorrhoeae. Las colonias
típicas de Neisseria gonorrhoeae aparecerán como colonias convexas, lisas y de color grisáceo.
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N. meningitidis
Toma de muestra para Neisseria gonorrhoeae
El proceso de toma de muestra para Neisseria gonorrhoeae generalmente sigue estos pasos:
1. Preparación: Antes de realizar la toma de muestra, es importante que el paciente esté adecuadamente
preparado y que se sigan las instrucciones proporcionadas por el profesional de la salud. Esto puede incluir
abstenerse de orinar, limpiar la zona genital con agua y evitar el uso de productos como cremas, duchas
vaginales o lubricantes antes de la toma de muestra.
2. Equipo necesario: El profesional de la salud debe contar con el equipo estéril necesario, que puede incluir
hisopos de algodón o poliéster estériles, espéculos (en el caso de toma de muestra cervical) y contenedores
adecuados para el transporte de la muestra.
3. Identificación del sitio de infección: Dependiendo de los síntomas y la sospecha clínica, se identifica el
sitio específico de infección. Puede ser la uretra, el cérvix, el recto o la faringe.
4. Recolección de la muestra:
- Uretra: Para los hombres, el profesional de la salud inserta suavemente un hisopo estéril en la uretra y
lo gira varias veces para recolectar secreciones. Puede haber una leve molestia o sensación de presión
durante este proceso.
- Cérvix: Para las mujeres, el médico utiliza un espéculo para visualizar y acceder al cuello uterino. Luego,
se inserta un hisopo estéril en el cérvix y se gira suavemente para recolectar muestras de secreciones
cervicales.
- Recto: Para la toma de muestra rectal, se introduce suavemente un hisopo estéril en el recto y se gira
para recolectar secreciones.
- Faringe: Para la toma de muestra faríngea, se utiliza un hisopo estéril que se frota suavemente en la
parte posterior de la garganta y las amígdalas.
5. Manipulación de la muestra: Después de recolectar la muestra, el profesional de la salud debe colocarla

en un contenedor estéril adecuado para su transporte al laboratorio. Es importante seguir las instrucciones
específicas proporcionadas por el laboratorio para el manejo adecuado de la muestra.
6. Registro y etiquetado: Se debe completar correctamente el formulario de solicitud de prueba,

asegurándose de proporcionar información precisa del paciente y del sitio de la muestra. Además, se debe
etiquetar adecuadamente el contenedor de la muestra con la identificación del paciente.
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Tinción de Gram en Fresco
La tinción de Gram en fresco es una técnica utilizada para visualizar las bacterias en una muestra sin la
necesidad de cultivarlas previamente
1. Preparación de la muestra: Se toma una muestra clínica que puede ser obtenida de un líquido
cefalorraquídeo, sangre o líquido sinovial, entre otros. La muestra se coloca en un portaobjetos limpio y se
extiende en una fina capa para permitir una mejor visualización de las bacterias.
2. Fijación: Para fijar la muestra al portaobjetos y evitar la pérdida de las bacterias durante el proceso de
tinción, se puede utilizar calor suave o aplicar una solución fijadora como el calor seco o el metanol.
3. Tinción de Gram: A continuación, se aplica la técnica de tinción de Gram en fresco. Los pasos generales
son los siguientes:
- Se cubre la muestra con cristal violeta, un colorante básico que tiñe todas las bacterias de color púrpura.
- Se enjuaga suavemente con agua para eliminar el exceso de colorante.
- Se aplica el lugol, que es un mordiente, y se deja actuar por un corto periodo de tiempo.
- Se lava nuevamente con agua para eliminar el lugol.
- Se realiza una decoloración rápida con alcohol o una mezcla de alcohol y acetona, conocida como
decolorante de Gram. Este paso es crítico, ya que diferenciará entre bacterias Gram positivas y Gram
negativas.
- Se lava nuevamente con agua para eliminar el decolorante.
- Se aplica el colorante de contraste, safranina, que tiñe las bacterias Gram negativas de color rojo o rosa.
4. Observación microscópica: El portaobjetos se coloca en el microscopio para observar las bacterias

teñidas. Las Neisserias, incluida Neisseria meningitidis, son bacterias Gram negativas, por lo que se
esperaría que aparezcan de color rojo o rosa bajo el microscopio.
Siembra (tipo de estriado)

En el laboratorio, la siembra de Neisseria meningitidis se realiza utilizando una técnica de estriado en placas
de agar selectivas
1. Preparación del medio de cultivo: Se utiliza un medio selectivo adecuado para el crecimiento de
Neisseria meningitidis, como el agar chocolate. El agar chocolate contiene sangre desfibrinada y otros
nutrientes que favorecen el crecimiento de la bacteria.
2. Inoculación de la muestra: Se toma una muestra clínica que puede ser obtenida de líquido
cefalorraquídeo, sangre u otro sitio de infección. La muestra se inocula en el medio de cultivo utilizando un
asa bacteriológica o un hisopo estéril. Se recomienda realizar el estriado en el medio de manera rápida y
uniforme.
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3. Estriado en placa: Para realizar el estriado, se siguen los siguientes pasos:

- Se toma una pequeña cantidad de la muestra y se deposita en un extremo de la placa de agar.
- Con el asa bacteriológica o el hisopo estéril, se extiende la muestra en línea recta hacia el centro de la
placa, cubriendo una pequeña área.
- Sin levantar el asa o el hisopo, se realiza un movimiento en zigzag o se gira la placa aproximadamente
90 grados.
- Con el área ya sembrada en la placa, se continúa extendiendo la muestra en línea recta desde el final del
zigzag hacia otro extremo de la placa.
4. Incubación: Después de la siembra, las placas de agar se incuban en condiciones adecuadas,

generalmente a una temperatura de 35-37 °C en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono (CO2).
Las Neisserias, incluyendo Neisseria meningitidis, requieren un ambiente rico en CO2 para un crecimiento
óptimo.
Durante la incubación, se espera que las colonias de Neisseria meningitidis aparezcan en forma de colonias
pequeñas, redondas y con aspecto de "copa de champaña" en el agar chocolate.
En que agares se siembra

La siembra de Neisseria meningitidis se puede realizar en varios tipos de agar selectivos. Aquí se mencionan
los principales agares utilizados:
1. Agar chocolate: Es el medio de cultivo más comúnmente utilizado para el aislamiento y el crecimiento
de Neisseria meningitidis. El agar chocolate es una forma enriquecida de agar sangre, donde se añade
sangre desfibrinada al medio para proporcionar los nutrientes necesarios para el crecimiento de la bacteria.
El agar chocolate tiene un aspecto oscuro y opaco debido a la lisis de los glóbulos rojos presentes en la
sangre.
2. Agar Thayer-Martin: Este medio de cultivo selectivo se utiliza específicamente para el aislamiento de
Neisseria spp., incluyendo Neisseria meningitidis. El agar Thayer-Martin contiene una combinación de
antibióticos selectivos que inhiben el crecimiento de otras bacterias y permiten el crecimiento de Neisseria
spp. Los principales componentes del agar Thayer-Martin son la vancomicina, la colistina, el ácido nalidíxico
y la trimetoprima.
3. Agar Martin-Lewis: Similar al agar Thayer-Martin, el agar Martin-Lewis es un medio selectivo utilizado
para el aislamiento de Neisseria spp. También contiene una combinación de antibióticos selectivos como la
vancomicina, la colistina y el ácido nalidíxico.
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Incubación
Después de sembrar Neisseria meningitidis en los agares selectivos adecuados, es necesario incubar las
placas en condiciones óptimas para permitir el crecimiento de la bacteria.
1. Temperatura: La incubación se realiza a una temperatura específica que favorece el crecimiento de

Neisseria meningitidis. La temperatura más comúnmente utilizada es de 35-37 °C, que es la temperatura
corporal humana normal.
2. Atmosfera: Neisseria meningitidis es una bacteria que requiere una atmósfera enriquecida con dióxido
de carbono (CO2) para un crecimiento óptimo. Por lo tanto, se recomienda incubar las placas en una
atmósfera enriquecida con un 5-10% de CO2. Esto se puede lograr utilizando sistemas de generación de
CO2 o utilizando incubadoras especializadas que pueden regular la concentración de CO2.
3. Tiempo de incubación: El tiempo de incubación necesario para el crecimiento de Neisseria meningitidis

puede variar, pero generalmente se recomienda incubar las placas durante 24 a 48 horas. Durante este
período, las colonias de Neisseria meningitidis deberían desarrollarse en el agar selectivo.
utilizar imágenes, fotos dibujos lo que le quede accesible, toda prueba incluido agares, tipos de estría,
debe describir el procedimiento)
En qué agar creció
1. Preparación de medios de cultivo selectivos: En esta actividad, se prepararán los medios de cultivo
selectivos adecuados para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae, como el agar Thayer-Martin o el agar
Martin-Lewis. Estos medios contienen antibióticos que inhiben el crecimiento de otras bacterias,
permitiendo el crecimiento selectivo de Neisseria gonorrhoeae.
2. Preparación de muestras clínicas: Se procederá a la preparación de las muestras clínicas recibidas. Esto
puede incluir la identificación y registro de las muestras, el etiquetado adecuado y la preparación de
suspensiones bacterianas a partir de las muestras, siguiendo los protocolos establecidos.
3. Siembra en agar selectivo: Utilizando un asa de siembra estéril o un hisopo, se realizará un estriado en
superficie en el agar selectivo. El objetivo es obtener una distribución uniforme de las bacterias en la placa.
Se puede utilizar el método de estría en zigzag o el método de estría en cuadrante.
- P á g i n a 14 | 27-
a) Método de estría en zigzag: Se realizará un movimiento en forma de zigzag en la superficie del agar
selectivo utilizando el asa de siembra estéril. Se comenzará en un extremo de la placa y se avanzará hacia
el otro extremo, a medida que se realiza el movimiento de zigzag. Este método se utiliza para obtener una
dilución gradual de las bacterias en la placa.
b) Método de estría en cuadrante: Se dividirá la placa en cuatro cuadrantes y se depositará una pequeña
cantidad de la muestra bacteriana en uno de los cuadrantes. Luego, utilizando un asa de siembra estéril, se
extenderá la muestra en forma de línea en el cuadrante inicial. Se transferirá una pequeña cantidad de la
muestra de la línea original al siguiente cuadrante y se repetirá el proceso hasta cubrir los cuatro
cuadrantes. Este método permite obtener colonias aisladas en cada cuadrante.
4. Incubación: Después de la siembra en el agar selectivo, se colocarán las placas en una incubadora a una
temperatura y condiciones adecuadas para el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae. La incubación se
llevará a cabo durante un período de tiempo específico, generalmente entre 24 y 48 horas.
5. Observación y examen de colonias: Una vez completada la incubación, se examinarán las placas de
cultivo en busca de colonias características de Neisseria gonorrhoeae. Las colonias de Neisseria
gonorrhoeae suelen tener un aspecto grisáceo a blanco, redondeado o ligeramente convexo. Pueden ser
translúcidas u opacas, y algunas colonias pueden presentar una textura pegajosa.
Características morfológicas de las colonias

Se puede utilizar el método de estría en zigzag o el método de estría en cuadrante, como se mencionó
anteriormente.
cultivo en busca de colonias características de Neisseria gonorrhoeae. Las colonias de Neisseria
gonorrhoeae tienen las siguientes características morfológicas:
- Tamaño: Las colonias suelen ser pequeñas, con un diámetro de aproximadamente 1-2 mm.
- Forma: Son colonias circulares con bordes definidos y regulares.
- Color: Las colonias son de color grisáceo a blanco o incluso ligeramente amarillento.
- Textura: Las colonias pueden ser lisas y translúcidas, o pueden tener una textura más pegajosa y opaca.
- Consistencia: Las colonias de Neisseria gonorrhoeae son generalmente suaves y no forman
levantamientos notables en el agar.
Es importante tener en cuenta que las características morfológicas pueden variar ligeramente dependiendo
de las condiciones de cultivo y de las cepas de Neisseria gonorrhoeae utilizadas.
- P á g i n a 15 | 27-
Tinción de Gram de las colonias
Se pueden utilizar diferentes tipos de estrias, como el estriado en zigzag o el estriado en cuadrante.
cultivo en busca de colonias características de Neisseria gonorrhoeae. Para realizar la tinción de Gram de
las colonias, se seguirán los siguientes pasos:
a) Preparación del frotis: Con una asa de siembra estéril, se tomará una pequeña cantidad de la colonia
y se extenderá suavemente sobre un portaobjetos limpio y seco. Se permitirá que el frotis se seque al aire.
b) Fijación del frotis: Se fijará el frotis pasando suavemente el portaobjetos por encima de la llama de un
mechero o utilizando un fijador de calor. La fijación ayuda a adherir las bacterias al portaobjetos y a
preservar su morfología.
c) Tinción de Gram: Se aplicará el tinte de cristal violeta sobre el frotis durante aproximadamente un
minuto. Después, se enjuagará suavemente con agua corriente para eliminar el exceso de tinte.
d) Aplicación del lugol: Se aplicará la solución de lugol (yodo) sobre el frotis durante aproximadamente
un minuto. Luego, se enjuagará suavemente con agua corriente.
e) Decoloración: Se aplicará el decolorante (generalmente alcohol o acetona) sobre el frotis durante unos
segundos, y se enjuagará de inmediato con agua corriente.
f) Contratinción: Se aplicará la contratinción (generalmente safranina) sobre el frotis durante

aproximadamente un minuto. Luego, se enjuagará suavemente con agua corriente.
6. Observación microscópica: Una vez realizada la tinción de Gram, se observará el frotis al microscopio
utilizando el objetivo de inmersión (100x). Se buscarán características morfológicas específicas de Neisseria
gonorrhoeae, como la presencia de diplococos gramnegativos intracelulares.
- P á g i n a 16 | 27-
Pruebas de identificación
cultivo en busca de colonias características de Neisseria gonorrhoeae. Se realizará una evaluación
macroscópica de las colonias para identificar características como el tamaño, la forma, el color y la textura.
6. Pruebas bioquímicas: Se realizarán pruebas bioquímicas para la identificación de Neisseria gonorrhoeae.

Algunas pruebas comunes incluyen:
- Prueba de oxidasa: Se aplicará un reactivo de oxidasa sobre una muestra bacteriana y se observará la
aparición de un cambio de color característico, indicativo de la presencia de la enzima oxidasa.
- Prueba de fermentación de la glucosa: Se utilizará un medio de cultivo con glucosa y se observará si hay
producción de ácido y/o gas a partir de la fermentación de la glucosa.
- Prueba de producción de indol: Se utilizará el medio de cultivo de triptofano y se observará si hay

producción de indol, que se puede detectar mediante la adición de reactivo de Kovac.
- Prueba de hidrólisis de la urea: Se utilizará un medio de cultivo con urea y se observará si hay producción
de amoníaco a partir de la hidrólisis de la urea, lo cual se puede detectar mediante un indicador de pH.
- Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos: Se realizará una prueba de sensibilidad antimicrobiana

utilizando discos impregnados con diferentes antibióticos para determinar la susceptibilidad de la bacteria
a los diferentes agentes antimicrobianos.
Antibiograma
- P á g i n a 17 | 27-
5. Preparación de suspensión bacteriana: A partir de las colonias aisladas en el agar selectivo, se preparará
una suspensión bacteriana estandarizada, con una concentración de bacterias adecuada para realizar la
prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.
6. Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos (antibiograma): Se realizará una prueba de sensibilidad

antimicrobiana utilizando discos impregnados con diferentes antibióticos. Se colocarán los discos en la
placa de agar selectivo sembrada con Neisseria gonorrhoeae y se incubará nuevamente.
7. Interpretación de los resultados: Después de la incubación, se evaluará el crecimiento bacteriano

alrededor de cada disco de antibiótico. Se medirá el diámetro de inhibición del crecimiento y se comparará
con los puntos de corte establecidos para cada antibiótico, según los estándares y las recomendaciones.
N. meningitidis
En qué agar creció
1. Preparación de medios de cultivo: En esta actividad, se prepararán los medios de cultivo adecuados para
el aislamiento y el crecimiento de Neisseria meningitidis. Los medios comunes utilizados incluyen el agar
chocolate y el agar sangre.
3. Siembra en agar: Utilizando un asa de siembra estéril o un hisopo, se realizará un estriado en superficie
en los agares preparados. El objetivo es obtener una distribución uniforme de las bacterias en la placa. Se
pueden utilizar diferentes tipos de estrias, como el estriado en zigzag o el estriado en cuadrante.
4. Incubación: Después de la siembra en los agares, se colocarán las placas en una incubadora a una
temperatura y condiciones adecuadas para el crecimiento de Neisseria meningitidis. La incubación se
cultivo en busca de colonias características de Neisseria meningitidis. Se realizará una evaluación
macroscópica de las colonias para identificar características como el tamaño, la forma, el color y la textura.
- P á g i n a 18 | 27-
Características morfológicas de las colonias
1. Observación macroscópica de las colonias: Después de la incubación de las placas de cultivo de Neisseria
meningitidis, se procederá a la observación macroscópica de las colonias. Se buscarán características como
el tamaño, la forma, el color y la textura de las colonias.
2. Registro de las características observadas: Se registrarán las características macroscópicas de las

colonias en un formulario o en el sistema de registro correspondiente. Esto permitirá llevar un registro
detallado de las observaciones y facilitará la identificación posterior de la especie bacteriana.
3. Observación microscópica de las colonias: Para realizar una observación microscópica más detallada, se
tomará una muestra de una colonia seleccionada utilizando un asa de siembra estéril. Se realizará un frotis
bacteriano en un portaobjetos.
4. Tinción de Gram: Una vez preparado el frotis bacteriano, se realizará la tinción de Gram para visualizar
la morfología y la disposición de las bacterias. Esto se realizará siguiendo los pasos estándar de la tinción
de Gram, que incluyen la fijación del frotis, la aplicación del cristal violeta, el lavado con lugol, la
decoloración con alcohol o acetona, y la contracoloración con safranina.
5. Observación microscópica de la tinción de Gram: Después de la tinción de Gram, se procederá a la

observación microscópica del frotis teñido. Se buscarán características morfológicas específicas de
Neisseria meningitidis, como la forma de coco (diplococos gramnegativos) y la disposición en pares.
Tinción de Gram de las colonias
1. Preparación del frotis: Para realizar la tinción de Gram, se seleccionará una colonia de Neisseria
meningitidis en el agar de cultivo y se preparará un frotis bacteriano en un portaobjetos limpio y estéril.
2. Fijación del frotis: El frotis se fijará calentando suavemente el portaobjetos sobre una llama o utilizando
una fuente de calor como un mechero Bunsen. Esto ayuda a fijar las bacterias al portaobjetos y evita que
se desprendan durante los pasos siguientes.
3. Tinción con cristal violeta: Se cubrirá el frotis bacteriano con cristal violeta, un colorante básico. Se dejará
actuar durante aproximadamente 1 minuto. El cristal violeta se une a la estructura de peptidoglicano de las
bacterias, tiñendo todas las células de color violeta.
4. Lavado con lugol: Se realizará un lavado con solución de lugol, también conocida como solución de yodo.
Esto ayuda a formar un complejo entre el cristal violeta y el lugol, aumentando la retención del colorante
en las bacterias. Se dejará actuar durante aproximadamente 1 minuto.
5. Decoloración con alcohol o acetona: Se aplicará alcohol o acetona para eliminar el colorante de las
bacterias gramnegativas. El portaobjetos se inclinará y se añadirá el alcohol o acetona suavemente en un
flujo continuo hasta que el agua de lavado salga clara. Es importante tener cuidado en este paso para no
sobredecolorar las bacterias gramnegativas.
6. Contracoloración con safranina: Se cubrirá el frotis con safranina, un colorante de contraste que tiñe las
bacterias gramnegativas de color rojo o rosa. La safranina se dejará actuar durante aproximadamente 1
minuto.
- P á g i n a 19 | 27-
7. Enjuague final y secado: Después de la contracoloración, se enjuagará el portaobjetos con agua destilada
para eliminar el exceso de tinte. Luego, se dejará secar al aire o se puede usar un secador de cabello a baja
temperatura para acelerar el proceso de secado.
8. Observación microscópica: Una vez seco, el frotis se colocará en el microscopio para su observación. Se
utilizará una lente de inmersión de aceite de alta potencia para obtener una visualización clara de las
bacterias. Se buscarán características específicas de Neisseria meningitidis, como la forma de coco
(diplococos gramnegativos) y la disposición en pares.
Pruebas de identificación
1. Prueba de oxidasa: La prueba de oxidasa se realiza para determinar la presencia de la enzima citocromo
oxidasa en las bacterias. Se tomará una colonia sospechosa de Neisseria meningitidis y se aplicará una gota
de reactivo de oxidasa sobre la colonia. Si la bacteria es oxidasa positiva, se producirá un cambio de color
azul oscuro o púrpura en la zona de aplicación del reactivo.
2. Prueba de catalasa: La prueba de catalasa se realiza para determinar la presencia de la enzima catalasa
en las bacterias. Se tomará una colonia sospechosa de Neisseria meningitidis y se aplicará una pequeña
cantidad de peróxido de hidrógeno (H2O2) sobre la colonia. Si la bacteria es catalasa positiva, se producirá
una efervescencia o liberación de burbujas de oxígeno.
3. Prueba de fermentación de carbohidratos: Se utilizarán diferentes medios de cultivo con carbohidratos,

como el agar glucosa y el agar maltosa, para determinar la capacidad de Neisseria meningitidis para
fermentar estos sustratos. Se realizará una siembra en superficie de las colonias en los agares
correspondientes y se incubarán durante un período de tiempo específico. Si hay fermentación, se
producirá un cambio en el color del medio debido a la producción de ácidos.
4. Prueba de hidrólisis de arginina: La prueba de hidrólisis de arginina se utiliza para determinar la

capacidad de Neisseria meningitidis para hidrolizar el aminoácido arginina. Se realizará una siembra en un
medio de cultivo específico, como el agar arginina, y se incubará durante un período de tiempo específico.
Si la bacteria es capaz de hidrolizar la arginina, se producirá un cambio en el color del medio debido a la
liberación de productos de degradación.
5. Prueba de sensibilidad a la vancomicina: La prueba de sensibilidad a la vancomicina se utiliza para

distinguir entre Neisseria meningitidis y Neisseria lactamica. Se realizará una siembra en un agar selectivo,
como el agar vancomicina, que contiene este antibiótico. Si la bacteria es sensible a la vancomicina, se
observará un crecimiento adecuado de Neisseria meningitidis.
Antibiograma
1. Preparación del inóculo: Se tomará una colonia de Neisseria meningitidis de un cultivo puro en agar y se
suspenderá en un medio de cultivo líquido estéril para obtener una concentración adecuada de bacterias.
Esta suspensión se utilizará para sembrar los discos de antibióticos en los agares de sensibilidad.
2. Preparación de los discos de antibióticos: Se tomarán discos de papel de filtro impregnados con
diferentes antibióticos, los cuales se seleccionarán según el protocolo de antibiograma estándar. Estos
discos se colocarán en el agar de sensibilidad para evaluar la susceptibilidad de las bacterias a los diferentes
antibióticos.
- P á g i n a 20 | 27-
3. Siembra en agar de sensibilidad: Se realizará una siembra en superficie de la suspensión bacteriana en

el agar de sensibilidad utilizando el método de estría en cuadrante. Se utilizará una asa de siembra estéril
para distribuir uniformemente las bacterias en el agar.
4. Colocación de los discos de antibióticos: Se colocarán los discos de antibióticos en el agar de sensibilidad
utilizando una pinza estéril. Se asegurará que los discos estén bien adheridos al agar y se dejarán incubar
durante un período de tiempo específico para permitir que los antibióticos difundan en el agar.
5. Incubación: Después de la siembra de las bacterias y la colocación de los discos de antibióticos, se

incubarán las placas de agar de sensibilidad a una temperatura y tiempo específicos, según las
recomendaciones del laboratorio y los estándares de antibiograma. Esto permitirá que las bacterias crezcan
y se desarrolle la formación de halos de inhibición alrededor de los discos de antibióticos.
6. Lectura e interpretación de los resultados: Después de la incubación, se observarán las placas de agar
de sensibilidad y se medirán los halos de inhibición alrededor de los discos de antibióticos. Se registrarán
los diámetros de los halos y se compararán con los puntos de corte establecidos para determinar la
sensibilidad o resistencia de Neisseria meningitidis a los antibióticos probados.
utilizar imágenes, fotos dibujos lo que le quede accesible, toda prueba debe describir el procedimiento)
Lectura de resultados
1. Observación de colonias en agar selectivo: Se observarán las colonias de Neisseria gonorrhoeae en el

agar selectivo utilizado para su cultivo, como el agar Thayer-Martin o el agar chocolate. Se examinará el
aspecto macroscópico de las colonias, incluyendo el tamaño, la forma, el color y la textura. Las colonias de
Neisseria gonorrhoeae suelen ser pequeñas, translúcidas, lisas y grises.
2. Realización de pruebas bioquímicas: Se llevarán a cabo pruebas bioquímicas para la confirmación de

Neisseria gonorrhoeae. Estas pruebas pueden incluir la prueba de oxidasa, la prueba de catalasa y la prueba
de fermentación de carbohidratos. Se seguirán los procedimientos y las interpretaciones estándar para
cada prueba.
3. Tinción de Gram: Se realizará una tinción de Gram de las colonias de Neisseria gonorrhoeae para
observar la morfología de las bacterias. Se preparará un frotis bacteriano a partir de una colonia pura en un
portaobjetos. Luego, se realizará la tinción de Gram utilizando los reactivos de cristal violeta, lugol, alcohol
descolorante y safranina. Se observará el frotis al microscopio para determinar la forma y la disposición de
las bacterias.
4. Observación al microscopio de campo oscuro: Se realizará una observación al microscopio de campo

oscuro de las colonias de Neisseria gonorrhoeae. Este método permite observar las bacterias en
movimiento y puede ser útil para identificar la presencia de características distintivas, como los diplococos
gramnegativos característicos de Neisseria gonorrhoeae.
5. Interpretación de los resultados: Una vez completadas las pruebas y las observaciones, se interpretarán
los resultados para determinar si las colonias corresponden a Neisseria gonorrhoeae. Se compararán los
resultados obtenidos con los criterios establecidos en los manuales de laboratorio y se seguirán las pautas
de interpretación correspondientes.
- P á g i n a 21 | 27-
Reporte de resultados
1. Revisión de los resultados de las pruebas realizadas: Se revisarán los resultados obtenidos de las pruebas
de identificación, como las pruebas bioquímicas y la tinción de Gram. Se verificará si los resultados son
consistentes con las características esperadas de Neisseria gonorrhoeae.
2. Interpretación de los resultados: Se interpretarán los resultados obtenidos y se determinará si las

pruebas indican la presencia de Neisseria gonorrhoeae. Se compararán los resultados con los criterios
establecidos en los manuales de laboratorio y las pautas de interpretación.
3. Generación del informe de resultados: Se elaborará un informe que incluya los resultados obtenidos de
las pruebas realizadas. El informe debe ser claro, completo y preciso, y debe contener la identificación de
la muestra, las pruebas realizadas, los resultados obtenidos y cualquier interpretación relevante.
4. Comunicación de los resultados: Se comunicarán los resultados al médico o al personal clínico

responsable del paciente. Es importante proporcionar los resultados de manera oportuna y asegurarse de
que sean fácilmente comprensibles para los profesionales de la salud.
5. Archivo y documentación: Se archivarán los resultados de manera adecuada según las regulaciones y
políticas del laboratorio. Es importante mantener un registro preciso de los resultados y cualquier
información relevante asociada con la muestra.
N. meningitidis
Lectura de resultados
1. Observación de colonias en agar selectivo: Se observarán las colonias de Neisseria meningitidis en el

agar selectivo utilizado para su cultivo, como el agar Thayer-Martin o el agar chocolate. Se examinará el
aspecto macroscópico de las colonias, incluyendo el tamaño, la forma, el color y la textura. Las colonias de
Neisseria meningitidis suelen ser pequeñas, translúcidas, lisas y de color gris o beige.
2. Realización de pruebas bioquímicas: Se llevarán a cabo pruebas bioquímicas para la confirmación de

Neisseria meningitidis. Estas pruebas pueden incluir la prueba de oxidasa, la prueba de catalasa y la prueba
de fermentación de carbohidratos. Se seguirán los procedimientos y las interpretaciones estándar para
cada prueba.
3. Tinción de Gram: Se realizará una tinción de Gram de las colonias de Neisseria meningitidis para observar
la morfología de las bacterias. Se preparará un frotis bacteriano a partir de una colonia pura en un
portaobjetos. Luego, se realizará la tinción de Gram utilizando los reactivos de cristal violeta, lugol, alcohol
descolorante y safranina. Se observará el frotis al microscopio para determinar la forma y la disposición de
las bacterias.
4. Observación al microscopio de campo oscuro: Se realizará una observación al microscopio de campo

oscuro de las colonias de Neisseria meningitidis. Este método permite observar las bacterias en movimiento
y puede ser útil para identificar la presencia de características distintivas, como los diplococos
gramnegativos característicos de Neisseria meningitidis.
5. Interpretación de los resultados: Una vez completadas las pruebas y las observaciones, se interpretarán
los resultados para determinar si las colonias corresponden a Neisseria meningitidis. Se compararán los
resultados obtenidos con los criterios establecidos en los manuales de laboratorio y se seguirán las pautas
de interpretación correspondientes.
- P á g i n a 22 | 27-
Reporte de resultados
1. Revisión de los resultados de las pruebas realizadas: Se revisarán los resultados obtenidos de las pruebas
de identificación, como las pruebas bioquímicas y la tinción de Gram. Se verificará si los resultados son
consistentes con las características esperadas de Neisseria meningitidis.
2. Interpretación de los resultados: Se interpretarán los resultados obtenidos y se determinará si las

pruebas indican la presencia de Neisseria meningitidis. Se compararán los resultados con los criterios
establecidos en los manuales de laboratorio y las pautas de interpretación.
3. Generación del informe de resultados: Se elaborará un informe que incluya los resultados obtenidos de
las pruebas realizadas. El informe debe ser claro, completo y preciso, y debe contener la identificación de
la muestra, las pruebas realizadas, los resultados obtenidos y cualquier interpretación relevante.
4. Comunicación de los resultados: Se comunicarán los resultados al médico o al personal clínico

responsable del paciente. Es importante proporcionar los resultados de manera oportuna y asegurarse de
que sean fácilmente comprensibles para los profesionales de la salud.
4. Archivo y documentación: Se archivarán los resultados de manera adecuada según las

regulaciones y políticas del laboratorio. Es importante mantener un registro preciso de los
resultados y cualquier información relevante asociada con la muestra.
Ubicación según características bioquímicas y resolución anatómica

Microorganismo Hábitat (reservorio) Criterios de laboratorio
Prueba PYR + (Hidrólisis de L-
Streptococcus pyogenes Piel, faringe. pirrolidonil-2- naftilamida),
inhibido por Bacitracina
Streptococcus agalactiae Aparato genital femenino. Hidrólisis del hipurato +,
CAMP+
Enterococcus Colon Bilis-esculina + Crecimiento en
6,5% de NaCL PYR +
- P á g i n a 23 | 27-
- P á g i n a 24 | 27-
GRÁFICOS:
RESULTADOS OBTENIDOS/INTERPRETACIÓN:
Aquí debe de argumentar e interpretar los resultados obtenidos día 1, día 2 y día 3.
Día 1:
En el primer día de cultivo, se espera la formación de colonias bacterianas en los agares selectivos adecuados, como el
agar Thayer-Martin o el agar chocolate, que promueven el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae. Las colonias pueden
ser pequeñas, traslúcidas o ligeramente pigmentadas, y se observarán macroscópicamente. Sin embargo, en este punto,
aún no es posible realizar una identificación definitiva de la bacteria.
Día 2:
En el segundo día, se llevarían a cabo pruebas de identificación específicas para confirmar la presencia de Neisseria
gonorrhoeae. Estas pruebas podrían incluir pruebas bioquímicas, como la prueba de oxidasa, la prueba de catalasa y la
prueba de fermentación de carbohidratos. La prueba de oxidasa suele ser positiva en Neisseria gonorrhoeae. Además,
se realizaría una tinción de Gram para observar la morfología de las bacterias. Neisseria gonorrhoeae se presenta como
diplococos Gram negativos característicos.
Día 3:
En el tercer día, se interpretarían los resultados de las pruebas de identificación realizadas en el día anterior. Si las
pruebas bioquímicas y la tinción de Gram son consistentes con Neisseria gonorrhoeae, se puede concluir que la bacteria
está presente en la muestra. Además, se evaluaría la susceptibilidad antibiótica de la bacteria mediante pruebas de
sensibilidad a los antibióticos. Esto permitiría determinar qué antibióticos son efectivos para tratar las infecciones
causadas por Neisseria gonorrhoeae.
N. meningitidis
Día 1:
- P á g i n a 25 | 27-
En el primer día de cultivo, se espera la formación de colonias bacterianas en los agares selectivos adecuados, como el
agar chocolate o el agar Thayer-Martin, que promueven el crecimiento de Neisseria meningitidis. Las colonias pueden
tener un aspecto mucoso y translúcido, y se observarán macroscópicamente. Sin embargo, en este punto, no es posible
realizar una identificación definitiva de la bacteria.
Día 2:
En el segundo día, se llevarían a cabo pruebas de identificación específicas para confirmar la presencia de Neisseria
meningitidis. Estas pruebas podrían incluir pruebas bioquímicas, como la prueba de oxidasa, la prueba de catalasa y la
prueba de fermentación de carbohidratos. La prueba de oxidasa suele ser positiva en Neisseria meningitidis. Además,
se realizaría una tinción de Gram para observar la morfología de las bacterias. Neisseria meningitidis se presenta como
diplococos Gram negativos característicos.
Día 3:
En el tercer día, se interpretarían los resultados de las pruebas de identificación realizadas en el día anterior. Si las
pruebas bioquímicas y la tinción de Gram son consistentes con Neisseria meningitidis, se puede concluir que la bacteria
está presente en la muestra. Además, se evaluaría la susceptibilidad antibiótica de la bacteria mediante pruebas de
sensibilidad a los antibióticos. Esto permitiría determinar qué antibióticos son efectivos para tratar las infecciones
causadas por Neisseria meningitidis.
CAUSAS DE ERROR:
Describa las causas de error de los procedimientos realizados
1. Contaminación de la muestra: La presencia de contaminantes en la muestra puede afectar los resultados de las
pruebas, ya que pueden interferir con el crecimiento y la identificación de las bacterias objetivo
2. Manipulación incorrecta de los cultivos: La manipulación incorrecta de los cultivos bacterianos puede introducir
errores en los resultados. Esto puede incluir una siembra inapropiada en los agares, una técnica de estría incorrecta o
una incubación inadecuada de los cultivos.
3. Interpretación incorrecta de los resultados: La interpretación incorrecta de los resultados de las pruebas puede
llevar a errores en la identificación de las especies de Neisseria.
4. Resistencia a los antibióticos: Las cepas de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis pueden desarrollar
resistencia a los antibióticos utilizados para su tratamiento. Esto puede llevar a resultados de prueba erróneos,
especialmente en pruebas de susceptibilidad antibiótica.
5. Variabilidad en las cepas bacterianas: Las cepas de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis pueden
presentar variabilidad en sus características fenotípicas, lo que puede dificultar la identificación precisa.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
Redactar conclusiones una por cada objetivo
Objetivo: Identificar y caracterizar Neisseria gonorrhoeae.
Conclusiones:
1. Mediante el uso de técnicas de cultivo selectivo, se logró aislar y cultivar Neisseria gonorrhoeae a partir de la muestra
clínica. El crecimiento de colonias en los agares adecuados y las características morfológicas observadas fueron
consistentes con la presencia de esta especie bacteriana.
2. Las pruebas de identificación, incluyendo pruebas bioquímicas y tinción de Gram, confirmaron la presencia de
Neisseria gonorrhoeae en la muestra. Los resultados positivos en pruebas como la prueba de oxidasa, prueba de catalasa
y fermentación de carbohidratos, junto con la observación de diplococos Gram negativos característicos, respaldaron
la identificación precisa de la bacteria.
- P á g i n a 26 | 27-
3. La realización del antibiograma permitió determinar la susceptibilidad antibiótica de Neisseria gonorrhoeae. Se

observaron patrones de resistencia y sensibilidad a diferentes antibióticos, lo cual es relevante para el manejo y
tratamiento de las infecciones causadas por esta bacteria.
Objetivo: Identificar y caracterizar Neisseria meningitidis.
Conclusiones:
1. Se logró aislar y cultivar Neisseria meningitidis a partir de la muestra clínica utilizando técnicas de cultivo selectivo
en agares adecuados. El crecimiento de colonias con características morfológicas esperadas fue consistente con la
presencia de esta especie bacteriana.
2. Las pruebas de identificación, incluyendo pruebas bioquímicas y tinción de Gram, confirmaron la presencia de
Neisseria meningitidis en la muestra. Los resultados positivos en pruebas como la prueba de oxidasa, prueba de catalasa
y fermentación de carbohidratos, junto con la observación de diplococos Gram negativos característicos, respaldaron
la identificación precisa de la bacteria.
3. La realización del antibiograma permitió determinar la susceptibilidad antibiótica de Neisseria meningitidis. Se

observaron patrones de resistencia y sensibilidad a diferentes antibióticos, lo cual es relevante para el manejo y
tratamiento de las infecciones causadas por esta bacteria.
Realizar recomendaciones que consideren
1. Implementar programas de detección temprana: Debido a la gravedad de las infecciones causadas por Neisseria
gonorrhoeae y Neisseria meningitidis, es recomendable implementar programas de detección temprana, especialmente
en poblaciones de alto riesgo. Esto puede incluir la realización de pruebas de detección regular en personas sexualmente
activas y en grupos de riesgo para la meningitis.
2. Fomentar el uso adecuado de antibióticos: Dada la creciente resistencia antimicrobiana en Neisseria gonorrhoeae,
es fundamental fomentar el uso adecuado de antibióticos en el tratamiento de la gonorrea. Se deben seguir las pautas
de tratamiento actualizadas y realizar pruebas de susceptibilidad antibiótica para guiar la elección de antibióticos
efectivos. Además, se deben promover estrategias de prevención de la transmisión de infecciones, como el uso de
barreras de protección en las relaciones sexuales y la educación sobre prácticas sexuales seguras.
3. Vacunación contra Neisseria meningitidis: La vacunación es una medida efectiva para prevenir las infecciones
por Neisseria meningitidis. Se recomienda la inmunización con vacunas conjugadas contra los serogrupos más
comunes de meningococo, especialmente en poblaciones de alto riesgo, como adolescentes, viajeros internacionales y
personas que viven en entornos de hacinamiento, como dormitorios universitarios.
4. Vigilancia epidemiológica: Es fundamental establecer sistemas de vigilancia epidemiológica para monitorear la

incidencia y la resistencia antimicrobiana de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis. Esto permite detectar
patrones emergentes de resistencia y tomar medidas preventivas y de control adecuadas.
5. Educación y concienciación: Es esencial educar a la población, profesionales de la salud y personal de laboratorio

sobre la importancia de las infecciones causadas por Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis. Esto incluye la
promoción de la detección temprana, el uso adecuado de antibióticos, la vacunación y las prácticas de higiene
adecuadas.
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- P á g i n a 27 | 27-

Práctica 6 Bacteriología Pii23

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Universidad Estatal del Sur de Manabí

CREADA EL 7 DE FEBRERO DEL AÑO 2001, MEDIANTE REGISTRÓ OFICIAL # 261

UNIVERSIDAD ESTATAL DEL SUR DE MANABI

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO

ALONZO MACIAS KARLA XIOMARA

ANCHUNDIA PILOSO JERITHZA FABIANA

ARTEAGA ZAMBRANO ANA SOFIA

DIAGNÓSTICO EN EL LABORATORIO CLÍNICO DE ESTREPTOCOCOS

TERESA VÉLIZ CASTRO

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 6

DOCENTE: LIC. TERESA VÉLIZ CASTRO. PhD HORA: 09:30 – 10:30

• Diagnóstico en el laboratorio clínico de Diplococos Gramnegativos. Neisserias gonhorroeae,

• Fundamentar el diagnóstico en el laboratorio clínico de Diplococos Gramnegativos. Neisserias

FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA (Bibliografía)

Especies de importancia clínica

Muestras clínicas de donde se aíslan Neisserias

Agares en que se recuperan Neisserias

Pruebas de identificación para Neisserias

Susceptibilidad antibiótica de Neisserias

2. CONCEPTOS EPIDEMIOLOGICOS GENERALES. [Online].; 01. Available from:

3. Fernández-Billón M. sciencedirect. [Online].; 2022 [cited 2023 06 11. Available from:

1 Organization WH. Laboratory Quality Management System: Handbook; 2011.

1 Sharp S. Specimen Management for Clinical Microbiology; 1987.

1 desconocido. [Online].; 2003. Available from:

Aquí deben detallar los materiales que se utilizan en esta práctica

Microscopio óptico Soluciones de tinción de Gram Incubadora Muestra de exudado uretral

Láminas y portaobjetos cristal violeta Microscopio óptico Muestra de exudado cervical

Soluciones de tinción de Lugol Vortex Muestra de exudado faríngeo

Discos de papel filtro

Tinción de Gram en Fresco

1. Preparación de la muestra: La muestra clínica, como el exudado genital, se coloca en un portaobjetos

4. Observación microscópica: El portaobjetos se coloca en un microscopio óptico y se observa utilizando

Siembra (tipo de estriado)

2. Preparación de la suspensión de la muestra: La muestra clínica, como un exudado genital, se recoge y

5. Observación y análisis: Después de la incubación, se observa el crecimiento bacteriano en las placas de

En que agares se siembra

5. Manipulación de la muestra: Después de recolectar la muestra, el profesional de la salud debe colocarla

6. Registro y etiquetado: Se debe completar correctamente el formulario de solicitud de prueba,

Tinción de Gram en Fresco

4. Observación microscópica: El portaobjetos se coloca en el microscopio para observar las bacterias

Siembra (tipo de estriado)

3. Estriado en placa: Para realizar el estriado, se siguen los siguientes pasos:

4. Incubación: Después de la siembra, las placas de agar se incuban en condiciones adecuadas,

En que agares se siembra

1. Temperatura: La incubación se realiza a una temperatura específica que favorece el crecimiento de

3. Tiempo de incubación: El tiempo de incubación necesario para el crecimiento de Neisseria meningitidis

Características morfológicas de las colonias

Tinción de Gram de las colonias

f) Contratinción: Se aplicará la contratinción (generalmente safranina) sobre el frotis durante

6. Pruebas bioquímicas: Se realizarán pruebas bioquímicas para la identificación de Neisseria gonorrhoeae.

- Prueba de producción de indol: Se utilizará el medio de cultivo de triptofano y se observará si hay

- Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos: Se realizará una prueba de sensibilidad antimicrobiana

6. Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos (antibiograma): Se realizará una prueba de sensibilidad

7. Interpretación de los resultados: Después de la incubación, se evaluará el crecimiento bacteriano

Características morfológicas de las colonias

2. Registro de las características observadas: Se registrarán las características macroscópicas de las

5. Observación microscópica de la tinción de Gram: Después de la tinción de Gram, se procederá a la

Tinción de Gram de las colonias

3. Prueba de fermentación de carbohidratos: Se utilizarán diferentes medios de cultivo con carbohidratos,

4. Prueba de hidrólisis de arginina: La prueba de hidrólisis de arginina se utiliza para determinar la

5. Prueba de sensibilidad a la vancomicina: La prueba de sensibilidad a la vancomicina se utiliza para

3. Siembra en agar de sensibilidad: Se realizará una siembra en superficie de la suspensión bacteriana en

5. Incubación: Después de la siembra de las bacterias y la colocación de los discos de antibióticos, se