Universidad del Valle de México

Practica numero 4: Preparación de medios de cultivo

Briones Salazar Ana Victoria, José Alberto Maldonado Barajas, Luis Ángel Padilla
Pacheco

Asignatura: Microbiología

Licenciatura QFBT

Periodo 2021-2

Fecha de entrega: 16 / 09/ 2021

Docente: Dra. Abril Ivett Priscilla Gómez Guzmán

RESUMEN

Se desarrolló la preparación de medios de cultivo el cual consiste en un gel que contiene los
nutrientes necesarios para que la bacteria, virus u hongo se alimenten, se incuban a una cierta
temperatura óptima para que se multipliquen hasta que formen una colonia que sea visible
para el ojo humano, de esta manera se podrá identificar de una manera más fácil de qué
microorganismo se trata y poder realizar experimentos, sin embargo para poder llevar acabo
esto se necesitarán medidas de asepsia y esterilización ya que cualquier microorganismo que
esté en contacto con el medio de cultivo será capaz de multiplicarse compitiendo con otros
microorganismos por el medio de cultivo, además de ser necesario un área totalmente limpia
y llevar a cabo diferentes procedimientos incluyendo el uso del autoclave.

Palabras clave: medios de cultivo, agar, placa de petri, esterilizadas, Medios de cultivo
sólido, medios de cultivo líquido, clasificacion de medios de cultivo
 INTRODUCCIÓN

Medios de cultivo

En base con Prats, G. (2006b).

Microbiología Clínica (Vol. 1). Ed.
Médica Panamericana.
"Los medios de cultivos deben contener
los elementos nutritivos necesarios para
permitir la multiplicación de las bacterias.
Inicialmente, pueden clasificarse en dos Fig.1. Medios de cultivos líquidos

grupos: medios líquidos y sólidos." Medios sólidos

A un medio de cultivo líquido puede

Medios líquidos añadirse una sustancia gelificante, como el

Un medio líquido es una infusión que se agar en polvo, que se disuelve por

prepara poniendo carne picada en una olla ebullición. Al enfriarse convierte el medio

con agua, que se lleva a ebullición para líquido en sólido, con una consistencia

solubilizar y extraer de la carne las como la de la jalea de membrillo. Por

proteínas, los factores esenciales y los calentamiento funde de nuevo y se puede

oligoelementos. Este caldo se filtra para verter en diversos recipientes, en los que al

obtener un medio límpido, se añade enfriarse se adquiere nuevamente la

cloruro sódico y se esteriliza en autoclave. consistencia sólida.

También puede prepararse, más Los medios de cultivos se reparten en

cómodamente, disolviendo en el agua unos tubos, placas de Petri, botellas o matraces,

gramos de un buen extracto de carne según las necesidades. Las placas de Petri

comercializado en lugar de usar carne son recipientes cilíndricos de plástico o

picada. Además, suelen añadirse otros vidrio transparente con una tapa, en las

nutrientes, como peptonas y glucosa, así que se vierten los medios sólidos

como cloruro sódico y un tampón de pH. ofreciendo una gran superficie para la

Prats, G. (2006b). Microbiología Clínica siembra. Prats, G. (2006b). Microbiología

(Vol. 1). Ed. Médica Panamericana. Clínica (Vol. 1). Ed. Médica
Panamericana.
 CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVO EN BASE A SU UTILIDAD
Medios Simples
De acuerdo con EduLabC. (2020, 17
diciembre) “Poseen los requisitos
nutricionales para permitir el desarrollo
bacteriano general, ejemplos: agar
Fig.2. Medios de cultivos sólidos
nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.”
Medios naturales o complejos
Están constituidos por sustancias
complejas de origen animal o vegetal y
usualmente se complementan con el
añadido de minerales y otras sustancias.
No se conocen todos los componentes del Fig.3. Placa de petri con un medio de
medio de cultivo, ni las cantidades exactas cultivo simple
en que están presentes. Ej. Extracto de
carne, extracto de levaduras.Pedrique De Medios enriquecidos
Aulacio, M., & Gutiérrez De Gamboa, S. Son medios simples o comunes, a los que
(2008) se le añaden ciertos elementos como
sangre, suero, líquido ascítico, huevo,
Medios sintéticos o químicamente glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el
definidos aporte de factores de crecimiento o
Según con información de Pedrique De sustancias que neutralizan agentes
Aulacio, M., & Gutiérrez De Gamboa, S. inhibidores del crecimiento en bacterias
(2008)“Se preparan a partir de ingredientes exigentes nutricionalmente, entre algunos
químicamente puros y por lo tanto se ejemplos: agar sangre, medio de
pueden conocer exactamente su Löwenstein-Jensen, enriquecido con huevo
composición cualitativa y cuantitativa. Por para facilitar el crecimiento de
su costo solo se emplean en Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa
procedimientos naturales.” (DLA), enriquecido con lactosa y
desoxicolato. EduLabC. (2020, 17
diciembre).
Fig.4. Placa de petri y tubos de ensayos
con medios enriquecidos.
Medios selectivos
Se consiguen añadiendo al agar nutritivo
compuestos químicos nocivos para algunas
bacterias cuyo crecimiento no es de interés
o también mediante una alteración de las
condiciones físicas del medio, según con
EduLabC. (2020, 17 diciembre) entre
algunos ejemplos tenemos:
● El agar Mac Conkey que contiene
cristal violeta.
● Thayer-Martin medio selectivo
para Neissar, ya que este posee
antibióticos como la vancomicina
colistina y nistatina.
● Caldo lactosado bilis verde
brillante en donde la bilis inhibe el
crecimiento de bacterias gram
positivas.
● Löwenstein-Jensen con verde de
malaquita es selectivo
Mycobacterium.
Fig.5. Placas de petri con medio de
cultivos selectivos.
Medios diferenciales
A estos medios se le adicionan sustancias
para que sólo crezcan ciertas bacterias y
estas, al actuar sobre alguna de las
sustancias adicionadas, permiten observar
macroscópicamente ciertas propiedades de
crecimiento que ayudan a diferenciar sus
colonias de otras especies diferentes,
según con EduLabC. entre algunos
ejemplos encontramos:
● Agar eosina azul de metileno
(EMB), diferencia E. coli (color
verde metálico brillante) de
colonias de Enterobacter aerogenes
(color rosado, consistencia mucosa
y crecimiento abundante).
● Agar sangre, diferencia variedades
para de Streptococcus pyogenes en
Streptococcus betahemolíticos de
Streptococcus alfa hemolítico y
gama hemolítica.
● Agar Salmonella-Shigella tiene
lactosa y un indicador de pH que
 permite diferenciar las colonias de
bacterias fermentadoras de este
disacárido.

Fig.7. Tubos de ensayo con medios de

Fig.6. Placa de petri con un medio de cultivos enriquecidos.

cultivo diferencial. Esterilización

La esterilización es un procedimiento al

Medios de enriquecimiento que se tiene que someter materiales para

De acuerdo con información de EduLabC: descontaminar y erradicar cualquier

“Son medios líquidos que favorecen o microorganismo, de acuerdo con

permiten la multiplicación de las bacterias Rosenthal Pfaller , (2013): “Es la

cuando la muestra obtenida es muy pobre” destrucción total de todos los

, por ejemplo: microorganismos, incluyendo las formas

● El caldo tioglicolato, favorece el más resistentes, como las esporas

crecimiento de las bacterias bacterianas, las micobacterias, los virus sin

anaeróbicas. envoltura (no lipídicos) y los hongos

● El caldo tetrationato favorece el (P.11)”

crecimiento de bacterias En Microbiología la esterilización se define

como “el proceso mediante el cual se eliminan
microaerófilas.
todos los microorganismos (incluyendo formas
● Los caldos bilis y de
de resistencia) de un objeto, medio o
Muller-Kauffman, favorecen el
superficie” y su aplicación garantiza la
crecimiento del género Salmonella.
ausencia de microorganismos en el material y
● Caldo o agua peptonada se utiliza medios de cultivo a ser empleados.
para el crecimiento de Vibrio PRÁCTICA Esterilización y Preparación
Cholerade. de Medios de Cultivo (1a sesión). (2018)
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ● Aprender a clasificar el material
para la preparación de los medios
Los medios de cultivo son útiles para
de cultivo.
analizar las muestras o hacer crecer un
● Conocer los medios de cultivo
hongo la cuestión es en cual se preparan y
sólidos y líquidos.
por que. Se desconoce de una forma exacta
la forma de elección del medio de cultivo HIPÓTESIS
por el cual se deben poner ciertos
Si los microorganismos se reproducen en
microorganismos para que tengan un
ambientes controlados como los hongos u
mejor desarrollo.
otras cepas, al momento de tener medios
JUSTIFICACIÓN de cultivo donde se controla todo
artificialmente se fomenta a una mayor
Al conocer los medios de cultivo nos
producción de estos microorganismos, ya
podemos dar cuenta cómo se desarrollan
sea en medios de cultivo sólido o líquidos
los microorganismos ya se de forma de
dependiendo el microorganismo el
cultivo sintético o no sintético además de
objetivo final es el de tener la producción
que esto nos permite hacer estudios más a
para ser analizados.
profundidad de cómo se reproducen los
microorganismos y saber cómo MÉTODO
exterminarlos con diferentes pruebas.
Se debe medir la cantidad exacta del
OBJETIVOS medio deshidratado o las porciones
correctas de cada uno de los ingredientes o
Generales
materiales a usar, se debe cerrar el frasco
Identificar el uso de los medios de cultivo de medio de cultivo para disolver la
sintético y no sintético. porción pesada de acuerdo con las
indicaciones del fabricante, si es necesario
Específicos calentar se debe tener cuidado de no
sobrecalentar. se debe ajustar el pH final
● Conocer el desarrollo de los
de cada lote de medio preparado, como
microorganismos en los diferentes
recomendación que sea a temperatura
medios de cultivo.
ambiente, para esto se toma una alícuota
● Tener en cuenta que todo debe estar
de 50 ml, medir el pH y de ser necesario
esterilizado ya que esto podría
ajustarlo al pH al indicado, se tiene que
afectar todo.
distribuir el medio de cultivo de acuerdo a
como se ordene, en seguida se debe
esterilizar en la autoclave y dejar que
enfríe un poco, vaciar el agar en cajas de
petri en ambiente esteril, esperar a que se
enfríe tapar y meterla a refrigeración.

RESULTADOS

Fig.10. Recipiente de agar nutritivo

Fig.8. Recipiente de base de agar

Fig.11. Polvo de agar con nutrientes

Fig.9. Base de agar base sangre

Fig.12. Matraces de agar sangre y agar
nutritivo

Fig.15. Matraces de agar sangre después

de calentar diluido en un líquido.

Fig.13. Matraz con agar sangre expuesto

al calor

Fig.16. Material listo ya con el matraz con

la cantidad necesaria para el cultivo en la
zona esteril,

Fig.14. Dos cápsulas de agitadores

magnéticos en un recipiente
 ANÁLISIS DE RESULTADOS

Los medios de cultivo se pueden clasificar

según su consistencia, origen, composición
y su utilización. Actualmente para
sobrellevar un medio de cultivo consta
sencillamente en pesar la cantidad deseada
del mismo y disolver en agua destilada.
Las sustancias deben esterilizarse por el
método de filtración y se añaden a su vez
los demás componentes previamente a su
esterilización en el autoclave y enfriados a
temperatura ambiente o a 40-50ºC si se
trata de medios con agar.

Hablando de la esterilización de medios

líquidos se deben repartir en los
recipientes indicados, tales como tubos,
Fig.17. Medio de cultivo listo para verter
matraces, etc. Cuando el medio es sólido y
la sustancia preparada anteriormente.
se deben repartir igualmente en tubos o
matraces primeramente deben ser
previamente fundidos en baño María u
horno microondas, acto seguido es
necesario distribuirlos en tubos o matraces
(en este caso no se utilizan placas petri),
tapar los tubos y esterilizarlos en el
autoclave.

Finalmente al terminar la esterilización se

debe dejar enfriar a temperatura ambiente
(cuando se trata de medios líquidos), de lo
contrario a los medios sólidos se deben
inclinar los tubos que al solidificarse se
Fig.18. Vaciado en cajas de petri esteril
adopte la forma del agar. Es necesaria la
para ser etiquetado y refrigerado.
esterilización de materiales dentro del
laboratorio porque gracias a la Se lograron obtener las muestras
esterilización se pueden eliminar todas las necesarias para que fueran analizadas
formas de vida microscópicas. como objetivo principal de la práctica.

CONCLUSIONES REFERENCIAS

Para concluir, confirmamos que cuando A. (2020a, diciembre 17). Medios de

algún microorganismo se desarrolla en un cultivo. EduLabC.
ambiente controlado (con ayuda de https://edulabc.com.mx/medios-de-cultivo/
nutrientes artificialmente necesarios) los Pedrique De Aulacio, M., & Gutiérrez De
mismos pueden llegar a producirse más Gamboa, S. (2008). CULTIVO DE LOS
rápida y correctamente, esto pasa MICROORGANISMOS.
igualmente con medios ya sean líquidos o http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/f
sólidos, sin embargo, es importante acultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema_
siempre mantener un ambiente esteril, ya 5_Cultivo.pdf
que cualquier microorganismo puede PRÁCTICA Esterilización y Preparación
reproducirse en el medio del cultivo, por a
de Medios de Cultivo (1 sesión). (2018).
eso es importante llevar correctamente a
Library.
cabo los procedimientos de esterilización
https://1library.co/document/qm59r18z-pr
de tanto los materiales e incluso el agar
%C3%A1ctica-esterilizaci%C3%B3n-prep
que se va a utilizar ya que de llevarse al
araci%C3%B3n-medios-cultivo-%C2%A
autoclave, pueden sobrevivir algunas
A-sesi%C3%B3n.html
bacterias, ya que estas pueden sobrevivir
más allá de la temperatura de ebullición,
Rosenthal Pfaller, M. (2013).
incluso al momento de verter el agar es
Microbiología médica (7. edición ed.).
importante siempre flamear la boca del
Elsevier Aaunders.
matraz como medida de seguridad porque
cualquier corriente de aire puede contener
microorganismos que posiblemente
contaminen el medio de cultivo.