 Unidad 2.

Métodos y técnicas de cultivo

microbiano.
◦ 2.1 Definición y tipos de medio de cultivo
◦ 2.1.1 Preparación de medios de cultivo
◦ 2.2 Morfología microscópica
◦ 2.2.1 Preparaciones en fresco
◦ 2.2.2 Tinciones
◦ 2.3 Aislamiento y características para la
identificación de microorganismos.
Antecedentes
COMPOSICIÓN CELULAR MICROBIANA

 Las células contienen gran cantidad de

pequeñas moléculas, pero constan
principalmente de macromoléculas, las más
importantes son las proteínas y los ácidos
nucleicos.
 Los microorganismos requieren de Nutrientes
para poder realizar su metabolismo, estos se
clasifican según la cantidad necesaria para
realizar el metabolismo
Nutrientes

• Macronutrientes Metabolismo
C, H, O, N, P, S, K, etc.
• Micronutrientes
Metales
• Factores de crecimiento
Microorganismo
Vitaminas
(hongos, bacterias, levaduras)
Definición y tipos de medio de cultivo

 Medio de cultivo: Soluciones nutritivas que se

usan en el laboratorio para el cultivo de los
microorganismos. (Biología de los
microorganimos, Brok)
 Conjunto de componentes que crea las

condiciones necesarias para el desarrollo de los

microorganismos
 Sistema de cultivo de microorganismo

CULTIVO MEDIO DE CULTIVO

• Temperatur
a • Macronutrientes
• pH • Micronutrientes
Factores componentes
• Humedad • Factores de
• Oxígeno crecimiento
• Presión
• Etc.
  En microbiología se ocupan dos tipos de
medios de cultivos
Quimicamente definidos
cómo se Se añaden cantidades precisas de
preparan? compuestos orgánicos o inorgánicos
a un volumen de agua purificada
Composición química exacta
Complejos
se utilizan lisados de caseína
(proteína de leche), de carne, de
soya, de levadura o cualquier otra
sustancia altamente nutritiva
(químicamente indefinido)
No se conoce la composición química
 Clasificación de los medios de cultivo

Origen
Origen Consistencia Composición

Medio Características Aplicaciones

Naturales preparados a partir de Ejemplos, trozo de papa, agar con
materiales de origen jugo de manzana y/o jugo de
natural, no se conoce su vegetales
composición química.

Sintéticos Se preparan a partir de Se utiliza para obtener resultados

una composición reproducibles.
química conocida
Semisintéticos Sintéticos a los que se
les añade factores de
crecimiento, extractos
orgánicos complejos
(extracto de levadura).
Clasificación de los medios de cultivo

Origen Consistencia
Consistencia Composición

Medio Características Aplicaciones

Líquidos Son caldos nutritivos Para diluir concentraciones de
poblaciones, enriquecer cultivos, etc.
Sólidos se utiliza 15 g de agar / Sirve para aislar y diferenciar
1L de solución. bacterias
Semisólidos se utiliza 7.5 g de agar / Sirve para determinar motilidad
1L de solución. (desplazamiento) de las especies de
estudio.
Clasificación de los medios de cultivo
Origen Composición
Consistencia Composición
Medio Características
Comunes Es el medio más
frecuentemente utilizado
para mantener colonias
microbianas.
Enriquecidos Compuesto de medio base
+ suplemento(s) nutritivo(s)
(sangre, suero, etc.)
Selectivo Favorece el crecimiento de
un grupo de
microorganismos e inhibe el
crecimiento de otros
mediante la modificación de
ciertos factores.
De Son medios líquidos que
enriquecimiento favorecen el crecimiento de
un tipo de microorganismo
en particular
De transporte Medio líquido o semisólido,
que permite mantener una
muestra hasta su análisis
Aplicaciones
Crecimiento de la mayor parte de
microorganismos existentes.
Ejemplo: Agar-Agar; Papa
dextrosa Agar (PDA)
Para microorganismos que
tienen grandes exigencias
nutricionales
Útiles en muestras mixtas.
Medios de cultivo Selectivos: Mc
Conkey, Thayer-Martín con VCN
Permite aumentar el numero del
tipo de microorganismo
Mantenimiento de muestras
clínicas
2.1.1 Preparación de medios de
cultivo
 Las características más importantes de los
microorganismos a ser considerados al
momento de preparar un medio de cultivo
son:
◦ Tipo de nutrición (trófico): autótrofos, heterótrofos,
quimiótrofos, fotótrofos.
◦ Tipo de respiración: aerobios, anaerobios,
anaerobios facultativos o microaerófilos.
◦ Temperatura: psicrófilos, mesófilos, termófilos.
◦ pH: acidófilos, neutrófilos, basófilos.
◦ Etc…
 Qué es la
esterilización ?
Un proceso muy importante en la elaboración de los
medios de cultivo para el aislamiento de los
microorganismos es la esterilización, el cual nos
permitirá eliminar la mayor parte de los
microorganismos permitiéndonos estudiar los de interés.
Esterilización de material
 Proceso de esterilización

La esterilización es un mecanismo
por el que se consigue la muerte o
eliminación de todos los
microorganismos vivos de una
muestra, medio, superficie o material
de trabajo (LEAHY et al., 1999).
Entre los microorganismos vivos se
incluyen bacterias, hongos, protistas,
virus y sus formas de resistencia.
Un objeto esterilizado está, por lo
tanto, totalmente libre de
microorganismos incluyendo sus
formas de resistencia. No hay que
confundir la esterilización con la
desinfección en la que no se
eliminan todos los
microorganismos.
Métodos más comunes de esterilización
Autoclave (calor húmedo)

El calor húmedo por medio de

utilización de vapor de agua es el
agente esterilizante más
frecuentemente utilizado. Este
mecanismo destruye eficazmente los
microorganismos por
desnaturalización de proteínas y
enzimas, y desestabilización de
membranas
Condiciones de esterilización en Autoclave

En laboratorio para fines de esterilización de

medios de cultivo y materiales para aislamiento
de microorganismos Se utilizará el Autoclave a
121°C, 15 psi durante 15 a 20 min.
 Repaso… Preparación de medios de
cultivo
 Como se revisó anteriormente se debe
considerar
1. Demanda de nutrientes del microorganismo
de interés
2. Considerar los factores óptimos de
desarrollo
3. Buena preparación de los materiales:
Esterilización y
4. Trabajar bajo condiciones asépticas
Tarea
 Investigar:
◦ Cuál es el medio de cultivo más común para
bacterias?
◦ Cuál es el medio de cultivo más común para
hongos?
◦ Qué es un medio de cultivo selectivo?
◦ Qué medio de cultivo es el ideal para el aislamiento
de las bacterias del género Azotobacter?