CASO 3 – MEDIOS DE CULTIVOS Y ESTERILIZACION

Blgo. José González Cabeza

A continuación, se presenta un vocabulario, el cual deberá ser abordada por el Grupo de Práctica
(03 mesas). Para ello; se realizarán sorteos al azar (docente y alumnos) para cada una de las
interrogantes planteadas.

Cuestionario:
1. ¿Qué es un medio de cultivo, y como clasifica los diversos componentes químicos que los
constituye?

RPTA: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes para el microorganismo, que cuenta

con factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos. Clasificación:
 Agar
 Extractos
 Peptonas
 Fluidos corporales
 Sistemas amortiguadores
 Indicadores de pH
 Agentes selectivos

2. ¿Proponga sistemas de clasificación de los medios de cultivo?.

RPTA: Los medios de cultivo pueden clasificarse según diferentes criterios, pero los más
importantes son aquellos que se basan en:
• Su consistencia: Medios líquidos, sólidos y semisólidos
• Su utilización: Medios comunes, de enriquecimiento, selectivos, inhibidores,
diferenciales, de identificación, de multiplicación, de conservación y de transporte
• Su composición: Medios complejos, sintéticos, semisintéticos
• Su origen: Naturales, sintéticos y semisintéticos

3. Revise y discuta con su docente de mesa, los siguientes términos:

Agar-agar Peptona Triptona Microrg. exigente
Ubicuo Extracto de levadura Extracto de carne Incubación
Siembra Inóculo Colonia Cultivo Puro
Cultivo axénico Cepa bacteriana Aislamiento Primario Subcultivo

 Agar- agar: Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el
agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas
algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente
 Peptona: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales,
que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja
caseína, carne, etc.). Son muy ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes
en determinadas vitaminas y sales minerales
 Triptona: Sale de la fuente proteica de caseína, es usada como una fuente de nitrógeno en
medios de cultivo para la detección de hongos y bacterias.
 Microrg. Exigente: Requieren factores de crecimiento como aminoácidos, vitaminas,
purinas y otras sustancias que no son capaces de sintetizar.
 Ubicuo: Microorganismos que pueden estar en cualquier lugar, en el agua, suelo o
aire.
  Extracto de levadura: Es un extracto soluble en agua de un autolisado de células de
levaduras seleccionadas. Este producto es rico en vitaminas especialmente del
complejo B, aminoácidos y otros factores de crecimiento.
 Extracto de carne: Es un lisado de carne altamente nutritivo, se recomienda su uso
en medios de cultivo para el examen bacteriológico de agua, leche y otros
materiales
 Incubación: Se refiere a la acción de colocar en una incubadora, muestras de
cultivo para hacerlo crecer y se reproduzcan en las condiciones de temperatura,
agua y oxigeno necesario. Siembra: También llamada inoculación, es el proceso de
introducir artificialmente una porción de muestra en un medio adecuado con el fin
de iniciar un cultivo microbiano para su desarrollo y multiplicación.
 Inóculo: El término se usa para referirse a los organismos simbióticos o patógenos
transferidos por cultivo.
 Colonia: Agrupación de un conjunto de microorganismos de un mismo tipo.
 Cultivo Puro: Son todos los microorganismos provienen de una sola célula.
 Cultivo axénico: Está formado por una única especie, cepa o variedad de organismo, y
por lo tanto está desprovisto de otros organismos contaminantes.
 Cepa bacteriana: Se refiere al conjunto de células homogéneas o, clones, que
derivan de la reproducción de una célula inicial única, seleccionada y aislada.
También se suele referir a las cepas bacterianas como colonias de éstas.
 Aislamiento Primario: Es la separación de un determinado microorganismo del resto que le
acompaña con el fin de inducir su crecimiento para su identificación.
 Subcultivo: Transplante de células de un envase de cultivo a otro u otros.

4. Establezca diferencias y cite ejemplos entre medios de cultivos:

Nutritivos Enriquecidos Enriquecimiento Selectivos Diferenciales
Sintéticos o Complejos o Mixtos De transporte Conservación
Definidos Indefinidos

 Medios nutritivos: El agar nutritivo, es un medio de cultivo usado normalmente

como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido
incluso a relativamente altas temperaturas.
 Medios de enriquecimiento: Son aquellos que favorecen el crecimiento de u
determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento
de los demás. Ej. Caldo tetrationato utilizado para el enriquecimiento de las
especies del género Salmonella provenientes de muestras de heces, orina, agua o
alimentos,
 Medios selectivos: Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás. Ej. Agar
desoxicolato citrato utilizado para el aislamiento de patógenos entéricos.
 Medios diferenciales: Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un
determinado tipo de microorganismos posee, ejemplo: Agar base rojo fenol utilizado para
detectar fermentación de carbohidratos, McConkey diferencia lactosa (+) de la lactosa (-).
 Medios sintéticos o químicamente definidos: Son medios compuestos por productos
químicos conocidos y se utilizan para realizar estudios metabólicos, por ejemplo: agar
blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno
 Medios complejos o indefinidos: Estos medios llevan ingredientes como extracto de
levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. que contienen nutrientes en
abundancia, pero sin saber con exactitud la composición cualitativa ni cuantitativa de estos
nutrientes.
 Medios mixtos: Es cuando contiene más de una especie de microorganismos. Ej. Yogurt
 Medios de transporte: Es un medio de cultivo que es capaz de mantener viva una muestra o
cepa de microorganismos por un periodo prolongado, manteniendo a los microorganismos
 vivos y sobre todo sin alterar su concentración. Ej. Caldo de Tioglicolato para anaerobios
estrictos.
 Medios de conservación: Evita el crecimiento de microorganismos. Ej. Congelación

5. Que precauciones deberá tener en cuenta antes de preparar un medio de cultivo.

RPTA:
• Un mínimo de humedad en medio y atmosfera, necesario para el desarrollo, así como un pH
neutro.
• Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiológica y fisicoquímica
adecuada
• Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de
formas de vida que puedan alterar, enmascara o impedir el crecimiento.
• Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada.

6. Elabore una escala de grupos biológicos, desde los más resistentes a desinfectantes hasta los
más sensibles.

RPTA:
Podemos clasificar el uso de desinfectas desde los más sensibles hasta los más resistentes
según el nivel de potencia que tengan estos, de bajo nivel, nivel intermedio y nivel alto.

a) Bajo nivel: No destruyen los hongos, ni virus desnudos de pequeño tamaño. Aquí tenemos
los derivados del:
-Amonio cuaternario (Cloruro de benzalconio), cuya acción radica en la alteración
de la membrana celular.
-Compuestos mercuriales: Merthiolate, Mercurocromo: Inhiben la actividad
enzimática
b) Nivel intermedio: No eliminan esporas bacterianas, pero si bacterias vegetativas, hongos y
virus, pero no los virus desnudos de pequeño tamaño (Alcoholes, fenoles)
-Alcoholes: Etanol, Isopropanol: Desnaturalizan proteínas y alteran la membrana
celular. Escasa Toxicidad. Su uso es para desinfectar objetos semicríticos y no críticos.
-Biguanidas: Clorhexidina: Alteraciones en la membrana. Escasa Toxicidad. Usado
como antiséptico cutáneo y de la cavidad oral.
-Yodo y Yodóforos (Povidona yodada): Su mecanismo de acción es parecido a los
derivados del cloro, pero en menor efectividad, logran menos oxidación y
halogenación.
c) Alto nivel: Inactivan todas las bacterias vegetativas, incluyendo a mico bacterias, hongos,
virus, pero no necesariamente esporas bacterianas (Aldehídos, derivados del Cl-)
-Aldehídos (Glutaraldehído, Formaldehido): Son agentes alquilantes de alto nivel y
esterilizantes. Son muy tóxicos y potencialmente carcinógenos. El uso es para
esterilización de materiales no resistentes al calor (Glutaraldehído) y desinfección de
cabinas de seguridad biológica (Formaldehido)
-Derivados del Cloro: Hipoclorito sódico en Sol. Acuosa: Su acción se basa en la
oxidación de material biológico, es muy toxico y corrosivo, su uso es en tratamientos
de aguas y desinfección de superficies ambientales en general.
-Ácido peracético: Su mecanismo de acción radica en la oxidación y alteración de la
permeabilidad de la membrana. Tiene un alto nivel de toxicidad y corrosivo de
metales. Su uso es para esterilización de endoscopios y desinfección de instrumental.
-Peróxido de hidrógeno: Produce oxidación y su potencia es variable en función a la
concentración a temperatura ambiente. En soluciones concentradas es toxico y
corrosivo.
7. Según su nivel de acción de los desinfectantes, completar el siguiente cuadro:
NIVEL ACTIVO FRENTE A: COMPUESTOS
1. BAJO Algunos virus, hongos y bacterias Amonio cuaternarios y mercuriales

2.INTERMEDIO Gérmenes tipo: M. Alcoholes, fenoles

tuberculosis, hongos y virus no
lipídicos
3.ALTO Todas las bacterias vegetativas, Derivados de amonio
hongos, virus

8. Según los mecanismos de acción de desinfectantes, complete el siguiente cuadro:

BLANCO AGENTE MECANISMO
Pared Celular Glutaraldehído EDTA, otros Unión cruzada a proteínas
permeabilizantes Bacteria gramnegativa: remoción
de
Mg++,
liberación de algunos LPS

Membrana citoplasmática Clorhexidina Las bajas concentraciones

afectan la integridad de la
membrana, las altas
concentraciones causan
congelamiento del citoplasma.
Diaminas
Inducción a la pérdida de
aminoácidos.

Macromoleculas Formaldehido Unión cruzada de proteínas,

ARN y ADN.

Unión cruzada de proteínas de la

Glutaraldehído envoltura celular y en otros sitios
celulares.

DNA Acridinas Intercalación de una molécula de

acridina entre dos capas de pares
de bases en el ADN

Grupos Tiol Compuestos con plata Enzimas que se unen a la

membrana interacción con grupos
tiol

Oxidantes Halógenos Peroxígenos Oxidación de los grupos tioles a

disulfitos, sulfóxidos o
disulfóxidos

Peróxido de hidrógeno: Actividad

debida a la formación de radicales
libres OH-, que oxida a los grupos
tioles en enzimas y proteínas;
ácido paracético: Inhibición de los
grupos tioles en proteínas y
enzimas.
 9. Efectúe una propuesta de clasificación de los sistemas de esterilización

Los métodos de esterilización se pueden clasificar en:

físicos y químicos Físicos:
Calor húmedo: Vapor saturado es el más eficaz, desnaturalización.
Calor seco: Elimina microorganismos por coagulación.
Radiación ionizante: Se genera a partir de una fuente radioactiva cobalto 60

Químicos:
Gases: Óxido etileno, peróxido de hidrógeno, formaldehído, ácido peracético Líquido: Glutaraldehído
10. Referente a los sistemas de esterilización, complete el siguiente cuadro:
METODO FUNDAMENTO LIMITACIONES EJ. DE APLICACIONES
Calor húmedo Destruye los No permite Esterilización en autoclave,
microorganismos por la esterilización ebullición y pasteurización.
coagulación de sus de materiales sensibles
proteínas celulares. al calor y materiales
no miscibles con el
agua como es el caso
de
polvos, aceites y grasas.

Calor Seco Produce la destrucción de Se deben aplicar Horno, flambear e

los microorganismos por temperaturas más altas incineración.
oxidación de sus durante mayor tiempo.
componentes celulares No hay información
respecto a su efectividad
contra priones

Radiación Obtiene el agente Alto coste e instalación Cabina ultravioleta

esterilizante mediante el
uso de energía eléctrica,
por lo que no necesita
utilizar productos
químicos, ni altas
temperaturas para tal fin.
compleja por lo que es
aplicable a gran escala y no
esta disponible en todos
lados, requiere un
prolongado tiempo de
exposición.

Oxido de etileno Gas inflamable y Requiere periodos Cámara de óxido de etileno

potencialmente
explosivo, muy
penetrante que inactiva
microorganismos
sustituyendo átomos de
hidrógeno lábiles
por otros grupos
como
hidroxilos, carboxilos, etc.
prolongados de proceso y
aireación.
No es un método efectivo
contra priones.
Tóxico para el personal,
pacientes y ambiente.

Filtración Los microorganismos son Sólo puede ser utilizada Membranas de ésteres de
simplemente retenidos por con fluidos, sean líquidos celulosa
un material filtrante. Tiene o gaseosos.
alta capacidad de retención Ineficaz con algunos
de partículas sobre su microorganismos, como
superficie y a través de los virus o las
toda su estructura y que micoplasmas.
permiten filtrar grandes
volúmenes.