UNIVERSIDAD CATLICA DE CUENCA

Comunidad Educativa al servicio del pueblo

UNIDAD ACADMICA DE: INGENIERA, INDUSTRIA Y CONSTRUCCIN

CARRERA: INGENIERA AMBIENTAL / MATRIZ CUENCA

ASIGNATURA MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

DOCENTE BLGA. PAULA CORDERO

ESTUDIANTE SR. ROGER DAVID SISALIMA MENDIETA.

CURSO O CICLO 6TO

LABORATORIO BIOFARMACIA, FECHA 10 DE DICIEMBRE DEL 2017

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BLOQUE TITULO MICROBIOLOGIA DEL AGUA
TEMTICO N III

TEMA DE LA DETERMINACIN DE LA CALIDAD EL AGUA MEDIANTE

PRACTICA EL NUMERO MAS PROBABLE DE BACTERIAS.
 I. INTRODUCCIN

La microbiologa es muy importante en nuestra vida cotidiana dado a que estudia a microorganismos
que son un factor muy importante para la vida en la tierra porque la vida no podra coexistir sin ello
dado que la clula es la unidad anatmica y funcional de los seres vivos, esta nos muestra la
importancia que tienen los microorganismos en nuestras vidas.

Se determino la calidad del agua mediante es estudio y parmetros realizados en el laboratorio,

tomando muestras ubicadas en el rio machangara la calidad del agua hace referencia a las
caractersticas qumicas, fsicas, biolgicas y radiolgicas del agua.

Prueba presuntiva

Se inocula una cantidad especfica de agua en una serie de nueve a doce tubos conteniendo caldo-
lactosa para determinar bacterias fermentadoras de lactosa que produzcan gas. Si despus de la
incubacin se observa fermentacin y gas en cualquiera de los tubos se presume que hay coliformes
presentes en la muestra de agua. Esta prueba se utiliza tambin para determinar el nmero ms
probable (NMP) de coliformes presentes en cada 100 ml de agua.

Prueba confirmatoria

Los tubos positivos (con fermentacin de lactosa y produccin de gas) son resembrados en placas de
agar EMB para confirmar si estos contienen bacilos Gram-negativos. Este medio de cultivo inhibe el
desarrollo de organismos Gram-positivos y ayuda a diferenciar las colonias de los coliformes de
aquellas que no lo son. En el agar EMB la E. coli produce colonias pequeas con centros obscuros y
brillo verde metlico.
Prueba complementaria

La principal preocupacin es determinar si las colonias aisladas de las placas de agar verdaderamente
entran en la definicin de un coliformes. Los medios utilizados para este propsito incluyen un tubo
de agar nutritivo y un tubo de Durham con caldo de lactosa. Si se produce gas en el tubo de Durham,
y una tincin de las colonias tomadas del agar nutritivo revelan que se trata de un bacilo Gram-
negativo, no formador de esporas. Entonces se tiene ya la seguridad de que se trata de un coliformes.

Al llevar a cabo estos tres exmenes con resultados positivos se establece que hay coliformes
presentes en la muestra de agua. E. coli es el mejor indicador de contaminacin fecal.

II. OBJETIVOS

Detectar presencia de bacterias patgenas(E. Coli, coliformes totales y fecales,

aeromonas, etc.) en las muestras del rio machagara
Emplear lo aprendido en el rio irquis para el informe del integrador
Distinguir los organismos de coliformes totales de los microorganismos coliformes
fecales.
Interpretar y comprender resultados.
Comprender la realizacin de las pruebas presuntiva, confirmativa y complementaria,
para establecer si realmente existen coliformes en la muestra de agua.

III. METODOLOGIA

EMB AGAR

1) En el proceso se lleno una matraz Erlenmeyer con 200 ml. de agua destilada.
2) Preparamos segn las indicaciones del agar por lo cual para 1000 ml. de agua se debe
agregar 35,96 gr. del EMB Agar, entonces dados 200 ml de agua destilada para o cual
de empleo 7.19 gr de Agar EMB
3) Se puso los 7,19 gr. de EMB Agar en la matraz Erlenmeyer con 200 ml. de agua
destilada, lo mezclamos hasta que este se disuelva.
4) Se procedio a calentar el Erlenmeyer a la estufa de gas hasta ebullicin (6 min. aprox.)
5) Esperamos que se enfrie para proceder a envolverlo con papel periodo para
posteriormente meterlo en el autoclave durante 24 horas a 35 C
CALDO DE SULFATO DE LAURILO

1) Llenamos con 500 ml. de agua destilada una matraz Erlenmeyer y agregamos 17,8 gramos
de caldo de sulfato de laurilo, previamente pesado en la balanza.
2) Removemos hasta que este se disuelva empleando el agitador
3) Colocamos en la malla metalica para calentarlo en la estufa durante unos de minutos,
para luego colocar en los 27 tubos de ensayo diferentes medidas del mismo.
4) En cada 9 tubos de ensayo con un pipeteador se colocaron medidas diferentes de la
mezcla del caldo de sulfato de lauril con agua destilada
5) (1er. 5ml, 2do. 3ml y 3ero. 7ml)
6) procedemos a envolverlos con papel peridico para colocarlos en el autoclave con la
matraz llena de EMB Agar.
7) Colocamos todo en una olla y ponemos en el autoclave a 35 C durante un perodo de
24 h.

PRUEBA PRESUNTIVA

1) Tomar una muestra de agua en el rio machangara.

2) Para tomar la muestra se debe tener un recipiente oscuro y tomar la muestra hasta
50 cm de profundidad de la superficie del rio.
3) Se tomo un litro de agua del rio machangara
4) Dado a que hubo un pequelo inconveniente con los 27 tubos de ensayo por lo cual
se trabajo con 5 tubos de ensayo por grupo redistribuyendo la medida del
contenido del caldo de sulfato de laurilo de la siguiente modo:

# Agua del Rio Machngara Caldo de sulfato de laurilo

1 10 ml. 3 ml.

2 0,5 ml. 2 ml.

3 0,1 ml. 7 ml.

5) Con 15 tubos de ensayo, 5 por grupo se procesio a colocar a cada uno una
campaa de durham dndole 25 vueltas (arriba-abajo) porque los coliformes son
fermentados de lactosa y el caldo de sulfato de laurilo tiene lactosa
6) Si aparecen burbujas sabemos que hay coliformes en el agua
7) Se procede a poner los tubos de ensayo en el autoclave a 25 C durante 24 horas.
8) Despus del tiempo dado se retiraron los 15 tubos de ensayo para determinar
cuales de estas contenan coliformes totales.
 9) Se observ en 2 tubos la fermentacin y gas donde se presume que existen
coliformes presentes en la muestra de agua
10) Para la prueba presuntiva se dejo otras 48 horas ms dichos tubos en el autoclave
11) Dando como resultaldo 11 tubos como positivo en lo que respecta a coliformes.
12) se procedi a determinar el NMP

8) MATERIALES

Esptula
18 cajas Petri
Papel peridico
Cinta
Botella de plstico de un litro
2 Erlenmeyer de 500 ml
Mechero Fisher
Probeta
Embudo
Una olla
3 gradillas para tubos de ensayo
Pera
Pipeta
Agitador
27 tubos de ensayo (9)
5 campanas de Durham
Algodn
Escobilla
2 mallas metlica
Asa de siembra
2 media luna

REACTIVOS

Agua destilada EMB Agar

Agar nutritivo
Caldo de sulfato de laurilo.

EQUIPOS

Autoclave
Estufa de gas
Balanza electrnica
IV. ACTIVIDADES
 V. RESULTADOS

En un lapso de 24 horas:

Tubos de ensayo

0,5 ml. de agua del rio Machngara

2 ml. de caldo de sulfato de lauril.

# Ensayo 1 2 3 4 5
Coliformes
x O O O O
presentes

Tubos de ensayo

10 ml. de agua del rio Machngara

3 ml. de caldo de sulfato de laurilo.

# Ensayo 6 7 8 9 10
Coliformes
O x O O O
presentes

Tubos de ensayo

0,1 ml. de agua del rio Machngara

7 ml. de caldo de sulfato de laurilo.

# Ensayo 11 12 13 14 15
Coliformes
O O O O O
presentes

Tiempo 48 horas:

Tubos de ensayo

0,5 ml. de agua del rio Machngara

2 ml. de caldo de sulfato de laurilo.

 # Ensayo 1 2 3 4 5
Coliformes
x x x x O
presentes

Tubos de ensayo

10 ml. de agua del rio Machngara

3 ml. de caldo de sulfato de laurilo.

# Ensayo 6 7 8 9 10
Coliformes
O x x x O
presentes

Tubos de ensayo

0,1 ml. de agua del rio Machngara

7 ml. de caldo de sulfato de laurilo.

# Ensayos 11 12 13 14 15
Coliformes
O x x x x
presentes

Todos loa GRUPOS cuadro unificado.

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3

1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
- - - - - x - - - - - - - - x
- x x x x x x - - - - x x x x
 VI. CONCLUSIONES

En esta practica se aprendio como determinar la presencia de bacterias patgenos determinando la

calidad del agua microbiolgica del rio machangara, basndonos para ello los resultados de las
pruebas presuntiva, confirmativa y complementaria realizadas informando que el agua que abastece
no rene las condiciones microbiolgicas para considerarse potable, ya que todas presentan un NMP
importante de coliformes totales, fecales y Escherichia coli lo que indica que el agua est contaminada
con materia fecal lo que significa que en sus cercanas o en la parte alta del rio hay presencia de
animales o camales.

VII. RECOMENDACIONES

Cuando se trabaja en el laboratorio, es imprtate siempre seguir las normas de seguridad, poner la
mayor atencin en la explicacin de la prctica y no jugar con los materiales del laboratorio, ya que
muchos de ellos tienen costos elevados y otros pueden resultar dainos para la salud.

Para poder reconocer las diferentes clulas, y tener el conocimiento de la apariencia de cada una ellas
es necesario realizar la observacin en el microscopio, este instrumento ayuda a lograr avances
tecnolgicos, cientficos, mdicos y en muchas otras ramas

Adems tener siempre una buena comunicacion entre todos.

VIII. BIBLIOGRAFIA
recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/alumno/seruni-
pluricelulares/contenidos4.htm
cdc.gov/ecoli/index.html

ELABORADO ALUMNO
DOCENTE: Blga. Paula Cordero Sr. Roger Sisalima M.
Firma
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Fecha: 11/12/2017 Fecha: 11/12/2017