G2 Lab05

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA
Laboratorio 05: Conteo de microorganismos
Microbiología Industrial
Grupo: 02
Integrantes:
Alvarez Carhuatanta Bianca Nicole
Arteaga Villena Ilian Máryori
Castillo Nureña Katherine Aime
Díaz Alva Jhyan Franco
Saénz Becerra Sara Milagros
Mío Sebastián Yenefer Estefani
Valladolid Girón Yanided Milagros Génesis
Ing. Díaz Rodríguez Manuel Omar
Trujillo - Perú
2022
Índice
I. Objetivos ............................................................................................................................. 3
II. Introducción .................................................................................................................... 3
III. Fundamento..................................................................................................................... 4
3.1. Métodos de conteo .......................................................................................................... 4
3.1.1. Número más probable (NMP) .................................................................................. 4
3.1.2. Goteo por sellado en placa masivo (GSPM) ............................................................ 6
3.1.3. Cuantificación de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml ....................... 7
3.1.4. Métodos indirectos ................................................................................................... 7
3.2. Manual de conteo ............................................................................................................ 8
3.3. Técnicas de recuento microbiano .................................................................................... 9
3.3.1. Técnica de vaciado en placa ..................................................................................... 9
3.3.2 Técnica de extensión en superficie o siembra en superficie .................................... 10
3.4. Materia prima, reactivos y materiales ........................................................................... 11
3.4.1. Materia prima ......................................................................................................... 11
3.4.2. Reactivos ................................................................................................................ 11
3.4.3. Materiales ............................................................................................................... 11
3.5. Procedimiento experimental .......................................................................................... 15
3.5.1. Recuento celular en cámara de Neubauer .......................................................... 15
3.5.2. Diluciones Seriadas para aislar microorganismos del suelo. ............................. 18
IV. Discusión....................................................................................................................... 23
V. Conclusiones ..................................................................................................................... 23
VI. Recomendaciones ......................................................................................................... 24
VII. Referencias bibliográficas ............................................................................................. 24
Anexos ..................................................................................................................................... 25
I. Objetivos
A. General:
■ Explicar el fundamento de las técnicas más utilizadas en el conteo de
microorganismos.
B. Específicos:
■ Describir técnicas de recuento microbiano
■ Conocer los dispositivos usados en el conteo microbiano
■ Explicar el procedimiento de un recuento haciendo uso de la cámara de
Neubauer.
II. Introducción
El conteo de microorganismos señala la magnitud de la población total bacteriana. En
ese sentido se puede determinar por diversas técnicas que se basan en algunos de los
siguientes tipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o mediante un
contador electrónico de partículas o indirectamente con la cuenta de colonias), masa celular
(en forma directa pesando el contenido celular del nitrógeno o indirectamente por
turbidimetría, proporcional al número de células) y actividad celular (indirectamente
relacionado al grado de actividad bioquímica al tamaño de la población bacteriana. La técnica
comúnmente utilizada es la cuenta en placa. Esta técnica no pretende detectar a todos los
microorganismos presentes, pero el medio de cultivo, las condiciones de temperatura y la
presencia de oxígeno, permiten seleccionar grupos de bacterias cuya presencia es importante
en la cavidad bucal; por ejemplo, las bacterias aerobias, anaerobias, entre las muchas que
existen; son un indicador general de la población que pueden estar presente en una muestra y,
por lo tanto, de la higiene con que ha sido manejado el producto.

La cuantificación de microorganismos es fundamental en los estudios de ecología
microbiana y microbiología clínica para entender cómo estos seres diminutos interaccionan
con sus hospederos y en los ambientes donde se desarrollan (Morales García,2016).
III. Fundamento
3.1. Métodos de conteo
3.1.1. Número más probable (NMP)
Se trata de un método de enumeración basado en la estadística. Debe
determinarse un número característico que permite obtener el NMP. En algunos casos
se desea cuantificar la presencia de algún microorganismo específico difícil de aislar o
con un crecimiento que no permite distinguir colonias delimitadas, por ejemplo,
cuando producen gran cantidad de polisacáridos. Una alternativa es seguir alguna
actividad metabólica característica del microorganismo en cuestión. En este sentido,
algunas bacterias fijadoras de nitrógeno se han cuantificado por este método usando
tubos de medio semigelificado libre de nitrógeno (Cavalcante & Döbereiner, 1988).
Bajo estas condiciones las bacterias fijadoras de nitrógeno crecen usando nitrógeno de
la atmósfera como fuente de este componente y si se usan medios de cultivo con una
selección adicional, es altamente probable que solo crezca la bacteria deseada. Por
ejemplo, Gluconacetobacter diazotrophicus es una bacteria endófita de la caña de
azúcar que se ha cuantificado a partir de tallos de esta planta mediante el método
NMP; usando el medio LGI sin nitrógeno combinado, que contiene 30% de sacarosa y
es altamente selectivo para esta bacteria (Cavalcante & Döbereiner, 1988).
Figura 1.
Ejemplos de microorganismos cuyas colonias son difíciles de diferenciar en placa.

El método NMP como en otros métodos de recuento, se realizan diluciones 1:10
hasta la dilución 1:10000000 (Figura 2). A partir de cada dilución se toman 100 µl por
triplicado o por réplicas de 5 y se siembran en el medio de cultivo donde esperamos
ver el crecimiento característico del microorganismo deseado. Para propósitos de
explicación, aquí nos enfocaremos en el método cuando se usan tres réplicas. Así,
cada una de las diluciones es sembrada en réplicas de 3 y todos los medios se colocan
a incubación en función de las condiciones que requiere el microorganismo. En el
ejemplo de la Figura 2, después del crecimiento se espera que el medio de los tubos se
torne de color amarillo, que es el indicativo de que hay actividad del microorganismo
que se está cuantificando. Entonces se procede a contar el número de tubos positivos
de cada dilución. El método dice que tenemos que considerar la última dilución con la
presencia de tres tubos positivos, que es a partir de donde se realizan los cálculos.
Figura 2.
Método del número más probable para el recuento de microorganismos

3.1.2. Goteo por sellado en placa masivo (GSPM)
Para la cuantificación masiva de muestras se pueden elegir dos métodos, el
llamado 6X6 (Chen et al., 2003) o bien el método GSPM (Corral-Lugo et al., 2012).
Ambos métodos se basan en realizar diluciones seriadas 1:10 con la ayuda de una
pipeta multicanal sobre placas multipozos y además en colocar micro-gotas de cada
dilución en el medio de selección. La diferencia entre ambos métodos radica en que
para el método 6X6 las gotas de cada dilución son dispensadas con la pipeta
multicanal y en el método GSPM las gotas se colocan con ayuda de un replicador
metálico dispensando alrededor de 2 µl (Fig. 3).
Figura 3.
Dispensación de la muestra en el método de Goteo por Sellado en Placa Masivo
El método GSPM es ideal para la cuantificación de bacterias u hongos cuando
existe un amplio número de muestras, una sola persona puede procesar alrededor de
50 muestras en 30 minutos, lo que facilita el trabajo y se evita que el número de
microorganismos oscile entre el recuento de la primera muestra y la última, por el
excesivo tiempo de procesamiento; como ocurriría con otros métodos antes
mencionados. Además, si se realizan tres réplicas de cada muestra, el método GSPM
se puede acoplar al método de NMP para realizar cálculos a partir de datos de
crecimiento positivo o negativo. Ejemplos de placas con bacterias cuantificadas por el
método GSPM se muestran en la figura 4.

Figura 4.
Ejemplo de cuantificación de bacterias mediante el método GSPM
3.1.3. Cuantificación de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml
Un método sencillo para la enumeración de bacterias y hongos se basa en la
cuantificación de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml o g de muestra.
Cuando realizamos diferentes diluciones decimales y sembramos más de una
placa por dilución, a la hora de interpretar los resultados tenemos diferentes
posibilidades. En nuestro caso utilizaremos el método más sencillo: seleccionaremos
una única dilución, aquella que produce entre 30 y 300 colonias por placa y
calcularemos la media de colonias obtenidas para la dilución seleccionada.
𝐴 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑒𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎𝑠(𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎)
𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙 = × 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝐵 𝑚𝑙 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠
𝐴 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑒𝑛𝑢𝑚𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎𝑠(𝑚𝑒𝑑𝑖𝑎) 1
𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙 = ×
𝐵 𝑚𝑙 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛
3.1.4. Métodos indirectos
Métodos espectrofotométricos:
● Turbidimetría
Es la medición de la luz transmitida a través de una suspensión, tiene la ventaja
de permitir la valorización cuantitativa, sin separar el producto de la solución. Las
mediciones, pueden efectuarse con cualquier espectrofotómetro.
● Nefelometría:
Mide la luz dispersada en dirección distinta a la luz emitida (generalmente con
ángulos que oscilan entre 15 y 90º). Utiliza como instrumento el nefelómetro (en el
que el detector se ubica con un ángulo que oscila entre 15 y 90º ej. a 90º). Se suele
utilizar para concentraciones más diluidas. Permite mayor sensibilidad con
concentraciones menores de partículas suspendidas. Constituye un método más exacto
para la medida de la opacidad.
Figura 5.
Ejemplo de métodos espectrofotométricos
3.2. Manual de conteo
Una cámara de conteo celular es un dispositivo en el que se coloca una muestra de la
suspensión a medir. El dispositivo presenta unas señales que determinan un volumen
conocido (x microlitros). Al contar bajo el microscopio el número de partículas presentes en
ese volumen se puede determinar la densidad de partículas en la suspensión de origen.

La cámara de Neubauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo
claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en
el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula como la que se
ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas
consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milímetro
cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie,
de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1
milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1
milímetro cúbico, es decir 0.1 microlitro.
Figura 6.
Una cámara de conteo de microorganismos.
3.3. Técnicas de recuento microbiano
3.3.1. Técnica de vaciado en placa
Dentro del grupo de recuentos microbianos a base de cultivos con formación
de colonias, la técnica de vaciado en placa es la más utilizada. La muestra en
cantidades conocidas se coloca en cajas Petri estériles y se adiciona el medio de

cultivo fundido a una temperatura de 45ºC y se mezcla con la muestra. Después de la
incubación se cuentan las colonias desarrolladas, las que multiplicadas por el inverso
de la dilución que corresponda permite estimar el número de microorganismos viables
por gramo o mililitro de muestra en las condiciones de prueba, el recuento obtenido se
referir a un determinado grupo de microorganismos.
La variedad de tipos y especies diferenciales por sus necesidades nutricionales,
temperatura requerida para su crecimiento, oxígeno disponible, etc., hacen que el
número de colonias contadas constituyan una estimación de la cifra realmente
presente y la misma refleja si el manejo sanitario del producto ha sido adecuado. Para
obtener resultados reproducibles y por lo tanto significativos, es de suma importancia
seguir fielmente y controlar cuidadosamente las condiciones. La técnica consiste en
contar las colonias, que se desarrollan en el medio de elección después de cierto
tiempo y temperatura de incubación, presuponiendo que cada colonia proviene de un
microorganismo de la muestra bajo estudio.
Figura 7.
Técnica de vaciado en placa
3.3.2 Técnica de extensión en superficie o siembra en superficie
La inoculación o siembra es la transferencia de los microorganismos de un
cultivo al medio en el cual crecerán para ello se emplean diversas técnicas que deben
realizarse en condiciones asépticas y con material estéril.

Figura 8.
Técnica de extensión en superficie o siembra en superficie
3.4. Materia prima, reactivos y materiales
3.4.1. Materia prima
● Recuento celular en cámara de Neubauer:
Células (carbaryl)
● Diluciones Seriadas para aislar microorganismos del suelo:
Muestra de suelo (10g).
3.4.2. Reactivos
● Agua estéril.
3.4.3. Materiales
● Recuento celular en cámara de Neubauer:
Contador de células manual
Figura 9.
Cámara de Neubauer.
Cubreobjetos
Figura 10.
Cubreobjetos.
Microscopio
Figura 11.
Microscopio
Contador de células
Figura 12.
Contador de células automático.

Suspensión de algas
Figura 13.
Suspensión de algas
Pipeta automática y puntas
Figura 14.
Puntas de pipeta automática y pipeta automática de volumen variable.

● Diluciones Seriadas para aislar microorganismos de suelo:
Matraz Erlenmeyer
Figura 15.
Matraz Erlenmeyer de laboratorio químico.
Caja Petri
Figura 16.
Caja Petri de vidrio.
Estufa
Figura 17.
Estufa de laboratorio
Tubo de ensayo
Figura 18.
Tubos de ensayo.
3.5. Procedimiento experimental
3.5.1. Recuento celular en cámara de Neubauer
1. Primero se debe asegurar que la muestra sea representativa, antes de cargar la
muestra en la cámara de Neubauer, asimismo bordear el tubo para que la
muestra quede debidamente homogénea y coger 20 uL con una micropipeta.
Figura 19
Toma de muestra y la posterior introducción en el cubreobjetos.
Nota: Universidad Miguel Hernández de Elche, 2014, Principios del recuento
celular en cámara de Neubauer. [Archivo de video]. YouTube
2. Se lleva cuidadosamente la muestra al microscopio para realizar el recuento de
las células.
Figura 20
Recuento de células en el microscopio.
3. Se amplía una cuadrícula en la cámara de Neubauer.
Figura 21
Cuadrícula de conteo de la cámara de Neubauer.
4. Se toman en cuenta los criterios para poder hacer el conteo (orden y células a
contar).
Figura 22
a) Células a contar. b) Orden de conteo (zigzag)

5. Visualización al microscopio donde se identifican dos tipos de células: redondas
con borde regular y brillantes.
Figura 23
Zona L1 y una de las 16 cuadrículas que la componen.
6. Finalmente, se calcula la concentración de las células.
Figura 24
Supuesto práctico en la cuadrícula L1 y L4.

3.5.2. Diluciones Seriadas para aislar microorganismos del suelo.
1. Se pesan 10g de suelo e introducir la muestra en un matraz con 90 ml de agua
estéril y un imán de agitación, siempre cerca del mechero.
Figura 25
Adición del suelo al matraz.
Nota: Universidad de Salamanca, 2016, Técnicas básicas de Microbiología:
Cómo hacer diluciones seriadas. [Archivo de video]. YouTube.
2. Se agita el contenido del matraz durante media hora aproximadamente para que
los microorganismos queden suspendidos en el agua.

Figura 26
Agitación del matraz.
3. Se toma 1ml de la suspensión y se añade en un tubo con 9ml de agua estéril.
Figura 27
Aplicación de la suspensión al tubo de ensayo.

4. Se repite la operación para todos los tubos.
5. Se realiza una siembra de cada dilución en una placa Petri con medio de cultivo.
Para ello se debe tomar 100 microlitros de la muestra y se añade sobre la
superficie de la placa.
Figura 28
Aplicación de la dilución en la placa Petri.
6. Se extiende la solución en la placa, con asa de Digralsky flameada en la llama del
mechero.
Figura 29
Expansión de la solución con ayuda de un asa de digralsky.

7. Se repite el proceso para cada tubo en las respectivas placas Petri.
8. Se procede a rotular cada placa con la dilución de partida.
Figura 30
Rotulación de las placas.

9. Se introducen las placas en una estufa, y esperar a que haya crecimiento
bacteriano.
Figura 31
Colocamiento de placas en estufa.
10. Tras 5 días de incubación se puede observar el crecimiento de las colonias en las
placas de cultivo.
Figura 32
Crecimiento de colonias al cabo de 5 días.

IV. Discusión
■ En lo que respecta a la cámara de Neubauer para poder mantener un control eficiente
se deben mantener dos criterios de fácil manejo, además de poder complementarlos
con otros que puedan ser más específicos para cada especie.
■ Para el recuento del número de microorganismos por gramo de suelo en diluciones
seriadas, se observó que el número de colonias disminuye al aumentar el factor de
dilución.
■ Se debe buscar una placa en donde el número de colonias sea estadísticamente
significativo es decir esté entre 30 y 300 colonias, lo que se mide por medio de un
contador de células.
■ Para calcular el número de unidades formadoras de colonia por gramo de suelo se
tiene que multiplicar por el factor de dilución en este caso 105 además de multiplicar
por 10 porque a la placa se añadió 100 microlitros del total de 1 ml de solución inicial
del que se partió para hacer las diluciones. Finalmente se vuelve a multiplicar por 10
ya que el suelo estaba diluido 10 veces, es decir se puso 10 gramos de suelo en un
total de 100 mililitros de agua.
V. Conclusiones
■ Se explicó el fundamento de las técnicas más utilizadas en el conteo de
microorganismos, teniendo en cuenta que estas técnicas facilitan el manejo de
situaciones complejas con el fin de lograr tener resultados óptimos y exactos.
■ Se describió las técnicas de recuento microbiano
■ Se dió a conocer los dispositivos usados en el conteo microbiano, tales como el
contador manual y el contador automático.
■ Se logró explicar el procedimiento de un recuento haciendo uso de la cámara de
Neubauer,que sirve para obtener el estimado recuento celular a través de microscopio,

este es un método sencillo y poco costoso, el cual permite un mejor seguimiento del
cultivo mediante su inspección visual.
VI. Recomendaciones
■ Revisar con antelación el concepto de método y técnica, de forma que se pueda
garantizar un aprendizaje más profundo, para comprender en mayor medida su
aplicación y relevancia.
■ Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben evitar
los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que pueden crear corrientes
que originen contaminaciones o producir accidentes.
■ Bajo ningún concepto debe sacarse la muestra fuera del laboratorio.
■ En las prácticas en que se trabaje con luz ultravioleta debe tenerse en cuenta que la
exposición a este tipo de radiación es peligrosa, ya que tiene poder mutagénico. Por
tanto, nunca se debe mirar directamente el foco emisor. Hay que proteger los ojos y
cualquier zona de la piel expuesta a la radiación (gafas, guantes, máscaras, etc.).
VII. Referencias bibliográficas
Análisis químico instrumental: Nefelometría y Turbidimetría. (2014). Obtenido de:
http://quimicabasica2014.blogspot.com/2014/10/nefelometria-y-turbidimetria.html
Arana, I., Orruño, M., & Barcina, I. (s.f.). Métodos básicos de enumeración de
microorganismos. Obtenido de:
https://ocw.ehu.eus/file.php/48/Tema_2._Metodos_basicos_de_enumeracion_de_micr
oorganismos.pdf
Cavalcante V.A., J. Döbereiner(1988). Una nueva bacteria fijadora de nitrógeno tolerante al
ácido asociada a la caña de azúcar. Plant and Soil, pág. 23–31.

Chen C. Y., G.W. Nace, P.L. Irwin (2003). Un método de placa de gota 6X6 para el recuento
simultáneo de colonias y el recuento de NMP de Campylobacter jejuni, Listeria
monocytogenes y Escherichia coli, Journal of Microbiological Methods, pág. 475–
479.
Corral-Lugo A., Y. E. Morales-García, L. A. Pazos-Rojas, A. Ramírez-Valverde, R. D.
Martínez-Contreras, and J. Muñoz-Rojas (2012). Cuantificación de bacterias
cultivables mediante el método de Goteo en Placa por Sellado (o estampado) Masivo,
Revista Colombiana de Biotecnología, pág. 147–156.
Amann R.I., W. Ludwig, K.-H. Schleifer, Phylogenetic identification and in situ detection of
individual microbial cells without cultivation, Microbiological Reviews 59 (1995),
143-169. Baena-Ruano S., C.
Jiménez-Ot, I.M. Santos-Dueñas, D. Cantero-Moreno, F. Barja, I. García-García, Rapid
method for total, viable and non-viable acetic acid bacteria determination during
acetification process, Process Biochemistry 41 (2006), 1160–1164.
Anexos
Video 1.
Nota: Universidad Miguel Hernández de Elche, 2014, Principios del recuento celular en
cámara de Neubauer. [Archivo de video]. YouTube. Recuperado de:
https://www.youtube.com/watch?v=JCpCOhm8a50
Video 2.
Nota: Universidad de Salamanca, 2016, Técnicas básicas de Microbiología: Cómo hacer
diluciones seriadas. [Archivo de video]. YouTube. Recuperado de:
https://www.youtube.com/watch?v=4f3uiwiioRg
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Laboratorio 05: Conteo de microorganismos

Ing. Díaz Rodríguez Manuel Omar

II. Introducción .................................................................................................................... 3

3.1. Métodos de conteo .......................................................................................................... 4

3.1.1. Número más probable (NMP) .................................................................................. 4

3.1.2. Goteo por sellado en placa masivo (GSPM) ............................................................ 6

3.1.3. Cuantificación de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml ....................... 7

3.1.4. Métodos indirectos ................................................................................................... 7

3.2. Manual de conteo ............................................................................................................ 8

3.3. Técnicas de recuento microbiano .................................................................................... 9

3.3.1. Técnica de vaciado en placa ..................................................................................... 9

3.3.2 Técnica de extensión en superficie o siembra en superficie .................................... 10

3.4. Materia prima, reactivos y materiales ........................................................................... 11

3.4.1. Materia prima ......................................................................................................... 11

3.4.2. Reactivos ................................................................................................................ 11

3.4.3. Materiales ............................................................................................................... 11

3.5. Procedimiento experimental .......................................................................................... 15

3.5.1. Recuento celular en cámara de Neubauer .......................................................... 15

3.5.2. Diluciones Seriadas para aislar microorganismos del suelo. ............................. 18

VI. Recomendaciones ......................................................................................................... 24

VII. Referencias bibliográficas ............................................................................................. 24

■ Explicar el fundamento de las técnicas más utilizadas en el conteo de

■ Describir técnicas de recuento microbiano

■ Conocer los dispositivos usados en el conteo microbiano

■ Explicar el procedimiento de un recuento haciendo uso de la cámara de

El conteo de microorganismos señala la magnitud de la población total bacteriana. En

siguientes tipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o mediante un

contador electrónico de partículas o indirectamente con la cuenta de colonias), masa celular

turbidimetría, proporcional al número de células) y actividad celular (indirectamente

relacionado al grado de actividad bioquímica al tamaño de la población bacteriana. La técnica

microorganismos presentes, pero el medio de cultivo, las condiciones de temperatura y la

presencia de oxígeno, permiten seleccionar grupos de bacterias cuya presencia es importante

por lo tanto, de la higiene con que ha sido manejado el producto.

con sus hospederos y en los ambientes donde se desarrollan (Morales García,2016).

3.1. Métodos de conteo

3.1.1. Número más probable (NMP)

Se trata de un método de enumeración basado en la estadística. Debe

determinarse un número característico que permite obtener el NMP. En algunos casos

se desea cuantificar la presencia de algún microorganismo específico difícil de aislar o

con un crecimiento que no permite distinguir colonias delimitadas, por ejemplo,

cuando producen gran cantidad de polisacáridos. Una alternativa es seguir alguna

actividad metabólica característica del microorganismo en cuestión. En este sentido,

tubos de medio semigelificado libre de nitrógeno (Cavalcante & Döbereiner, 1988).

ejemplo, Gluconacetobacter diazotrophicus es una bacteria endófita de la caña de

azúcar que se ha cuantificado a partir de tallos de esta planta mediante el método

es altamente selectivo para esta bacteria (Cavalcante & Döbereiner, 1988).

Ejemplos de microorganismos cuyas colonias son difíciles de diferenciar en placa.

triplicado o por réplicas de 5 y se siembran en el medio de cultivo donde esperamos

ver el crecimiento característico del microorganismo deseado. Para propósitos de

a incubación en función de las condiciones que requiere el microorganismo. En el

que se está cuantificando. Entonces se procede a contar el número de tubos positivos

Método del número más probable para el recuento de microorganismos

Para la cuantificación masiva de muestras se pueden elegir dos métodos, el

pipeta multicanal sobre placas multipozos y además en colocar micro-gotas de cada

dilución en el medio de selección. La diferencia entre ambos métodos radica en que

multicanal y en el método GSPM las gotas se colocan con ayuda de un replicador

metálico dispensando alrededor de 2 µl (Fig. 3).

Dispensación de la muestra en el método de Goteo por Sellado en Placa Masivo

El método GSPM es ideal para la cuantificación de bacterias u hongos cuando

50 muestras en 30 minutos, lo que facilita el trabajo y se evita que el número de

microorganismos oscile entre el recuento de la primera muestra y la última, por el