UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA N° 01

TÉCNICAS PARA DETECTAR Y MEDIR EL CRECIMIENTO MICROBIANO

DOCENTE DE TEORÍA : Dr. AURELIO CARRASCO VENEGAS

DOCENTE DE PRÁCTICA : Mg. ALEXANDRA A. URRUTIA ZEGARRA
ASIGNATURA : FISIOLOGÍA Y GENÉTICA MICROBIANA
INTEGRANTES : DE LA CRUZ CHIMAYCO, Ruth
: MUÑOZ MEZA, Liz Viviana
: PALOMINO BENDEZU, Roger
: TINCO NUÑEZ, Alex Ricardo

GRUPO DE PRÁCTICA : LUNES 5-8 PM

AYACUCHO – PERÚ

2022
 PRÁCTICA N°01

TÉCNICAS PARA DETECTAR Y MEDIR EL CRECIMIENTO MICROBIANO

I. OBJETIVOS.
- Conocer e l fundamento de las diferentes técnicas para detectar y medir el
crecimiento microbiano.
- Desarrollar las actividades y destrezas del alumno, en el manejo de las diferentes
técnicas para detectar y medir el crecimiento microbiano.
II. INTRODUCCIÓN
Cuando hacemos referencia al crecimiento microbiano en realidad, hablamos del
número de células, no del tamaño de éstas. Los microbios que están en la etapa de
"crecimiento" aumentan en cantidad y se agrupan en colonias (que será posible
observarlas sin el microscopio) de cientos de miles de células, o poblaciones de miles de
millones de células (1). La célula microbiana tiene un período de vida finito y la especie
sólo se mantiene como resultado del crecimiento continuo de la población (2).

El crecimiento celular bacteriano depende de un gran número de reacciones químicas

de una amplia variedad de tipos. Algunas de estas reacciones son transformaciones
energéticas. Otras implican biosíntesis de pequeñas moléculas, las unidades básicas de
las macromoléculas, así como los diversos cofactores y coenzimas necesarios para las
reacciones enzimáticas. Sin embargo, las principales reacciones de síntesis celular son
reacciones de polimerización, por las que se forman los polímeros (macromoléculas) a
partir de los monómeros (2).

2.1. Medición del crecimiento microbiano

La medición del crecimiento microbiano, se realiza estimando los cambios en el número
de células, en la cantidad de algún componente de las mismas, como proteínas, ácidos
nucleicos o el peso seco de las células (2).
Los Métodos para el seguimiento de la evolución de un cultivo microbiano pueden
clasificarse en directos e indirectos, los primeros se basan en la medida de la evolución
del número de células vivas (técnicas de plaqueo) o del número de partículas; lo
segundos, en la medida de algún parámetro del cultivo que nos permite deducir
información sobre la evolución del número de microorganimos (3).

2.1.1.Métodos directos.

• Recuento microscópico directo

En este método un volumen medido de una suspensión bacteriana se coloca dentro

de un área definida en un portaobjeto (1).
Con muestras líquidas se emplean cámaras de recuento especiales, que en esencia
son portas excavados y modificados sobre cuya superficie de vidrio está marcada
una rejilla con pequeños cuadrados de área conocida.(2)
Cada cuadrado de la parrilla contiene un volumen conocido, muy pequeño pero
determinado con precisión. Bajo el microscopio se puede contar el número de
células por cada unidad de área de la parrilla.(2)

Fig. 1……………………………………….
Fuente: https://www.slideshare.net/JuliaDuran/clase-micro2-3-crecimiento-ucinf-2016-
60999731

• Recuento de células viables.

Llamado también recuento en placa o recuento de colonias. En este procedimiento
se supone que cada célula viable puede crecer y dividirse hasta formar una colonia.
Así, el número de colonias y el número de células son proporcionales (2).

Diluciones sucesivas.
Fuente:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4b_MedicionCrecimiento_19837.pdf

• Método de vertido y diseminación en placa

Fig. 3…………………………………..
Fuente: https://www.coursehero.com/file/42408368/U4b-MedicionCrecimiento-19837-
convertidodocx/

• Método del número más probable(NMP)

Fuente: http://triton-cyted.com/wp-content/uploads/2017/04/Presentaci%C3%B3n- Zulma-
P%C3%A9rez.pdf

• Filtración

Las bacterias se pueden contar cuando la cantidad de bacterias es muy baja, como
en lagos o en ríos con corrientes relativamente limpias. En esta técnica se hacen
pasar 100 mL de agua a través de un filtro consistente en una membrana delgada
cuyos poros son demasiado pequeños como para permitir el paso de las bacterias,
que entonces son tamizadas y retenidas en la superficie del filtro (1).
 • Uso de asa calibrada.

La utilización de agujas o asas calibradas permite tomar volúmenes pequeños, que

son inoculados en la superficie del agar mediante la técnica de siembra masiva. Las
colonias son contadas y se multiplican por el factor de dilución del asa empleada. El
uso más frecuente de esté método es en el urocultivo. Se determinan las UFC/g o mL
de muestra(4).

De: https://www.coursehero.com/file/42408368/U4b-MedicionCrecimiento-19837-convertidodocx/

• Recuento en contador Coulter.

Permite la automatización del recuento de células. Una solución electrolítica fluye a

través de una delgada pipeta arrastrando las células en sus pensión que, al tratarse
de partículas muy poco conductoras, producen un aumento en la resistencia del
líquido al atravesar el microcanal.
Como consecuencia, la corriente eléctrica que atraviesa el canal disminuye por un
breve período. El contador detecta estos cambios en la corriente eléctrica.
Al llevar un registro de los pulsos que ocurren en la corriente eléctrica, se puede
contar el número de partículas presentes en un determinado volumen de fluido.
La amplitud del cambio en la corriente que atraviesa el microcanal se encuentra
directamente relacionado al volumen de la partícula, permitiendo medir también la
distribución del tamaño de las partículas contadas(5).
https://www.researchgate.net/figure/Principio-del-contador-de-particulas-Coulter-counter-
Tomado-de-Shapiro-2011_fig4_318838163
2.1.2. Métodos Indirectos.
• Turbidimetría.
La turbidez producida por el crecimiento microbiano de microorganismos
unicelulares puede ser medida de acuerdo a la capacidad de absorber la luz. La
muestras a determinar son generalmente translúcidas cuando no presentan
crecimiento microbiano (4).

De: https://www.coursehero.com/file/42408368/U4b-MedicionCrecimiento-19837-convertidodocx/
También se puede medir turbidez por comparación con escalas prefabricadas. (Escala
de Mc Farland.
 -Actividad metabólica.
Otra forma indirecta de estimar el número de bacterias es medir la actividad
metahóíica de la población. Este método supone que la cantidad de cierto producto
metabólico, como el ácido o el CO2 es directamente proporcional a la cantidad de
bacterias presentes. Un ejemplo de aplicación práctica de la prueba metabólica es el
ensayo microbiológico en el que se utiliza la producción de ácido para determinar la
cantidad de vitaminas (1)
• Peso seco.
En el caso de las bacterias filamentosas y los mohos los métodos habituales de medición
son menos satisfactorios (2).
En este procedimiento se extraen los hongos del medio de crecimiento, se los filtra para
eliminar el material extraño y se los seca en un desecador para luego pesarlos. En el caso
de las bacterias se sigue el mismo procedimiento básico (2). El peso seco de las células
bacterianas que se encuentran e n una suspensión se obtiene por el secado de un
volumen en un horno a 105°C hasta peso constante (6).

III. PROCEDIMIENTO.
- Los estudiantes elaboran el Procedimiento Operativo Estandarizado de un
método de medición del crecimiento microbiano, tratado en clases (Anexo 1).
- Los estudiantes simulan resultados en base a la revisión bibliográfica
- Presentan tablas y/o figuras según corresponda
- Elaboran la discusión, conclusiones y recomendaciones
- Un estudiante, elegido por el docente, e x p o n e l o s resultados, discusiones,
conclusiones, recomendaciones y referencia bibliográfica.
IV. RESULTADOS
Mesa N°01
 Mesa N°02

Dilución 1/10

Mesa N°03

Prueba de viabilidad

V. DISCUSIÓN.

En la mesa N° 1 se hizo el producto terminado, teniendo 411 células totales y obteniendo

como resultado 20,55 x 106 cel./ml células de recuento. En la mesa N° 2 se realizó la dilución
1/10 teniendo 98 células totales y obteniendo 49 x 106 cel./ml células de recuento, en la
prueba de la viabilidad, se realiza mediante la adición de azul de metileno a la muestra, que
al teñir logrará ingresar a la estructura lo cual indica que las células están muertas; pero en
este caso tuvimos un 100% de viabilidad ya que no hubo células muertas.
VI. CONCLUSIONES.

➔ Durante la práctica se conoció el fundamento de las diferentes técnicas, métodos

directos como el recuento microscópico directo y recuento de células viables.
➔ Se desarrollaron las actividades y destrezas de cada uno de los estudiantes, en el
manejo de las diferentes técnicas para detectar y medir el crecimiento microbiano.

VII. ELABORACIÓN DEL POE

N°de procedimiento
MATERIALES PARA DETECTAR Y 001
MEDIR EL CRECIMIENTO
UNSCH MICROBIANO
AYACUCHO 1 de 4

-Conocer el fundamento de las diferentes técnicas para detectar y medir el

1. OBJETIVOS crecimiento microbiano.

-Conocer las técnicas del recuento de método directo para el conteo de

levaduras

2. ALCANCE Este procedimiento se aplicará en laboratorio para realizar conteos de

levaduras, y está al alcance de todo el personal profesional de la salud y/o
administrativo dentro del laboratorio.

3. RESPONSABLE Mg. ALEXANDRA ANTONIETA URRUTIA ZEGARRA

CÁMARA DE NEUBAUER: Es un instrumento utilizado en laboratorio

(portaobjetos modificado) para el recuento de células y esporas en un medio
líquido.

LEVADURA: Son hongos microscópicos unicelulares, que se dividen por

gemación y sexualmente. Cobran importancia al realizar la fermentación.

4. DEFINICIONES DILUCIÓN: Se trata de bajar la concentración de soluto u organismo

presente en la solución por unidad de volumen de disolución, añadiendo más
diluyente.

VIABILIDAD: Es la probabilidad o porcentaje de que un ser vivo logre

desarrollarse con normalidad.

5. PROCEDIMIENT Materiales:
O -chicha 100ml
-tubo de ensayo
-Cámara de Neubauer
Reactivos:
-Azul de metileno

EQUIPOS UTILIZADOS:

-Microscopio

PROCEDIMIENTO

Mesa N° 01:

Producto Terminado de la chicha de jora

➔ Reunir el material necesario para medir el crecimiento microbiano.

➔ Homogeneizamos la muestra de chicha de jora.
➔ Tomar la muestra de la chicha con el gotero, después llevar a la
cámara de Neubauer.
➔ No generar burbujas en la cámara de Neubauer.
➔ Después observar en el microscopio a un aumento 40x
➔ Observar los 5 cuadrantes de la cámara de Neubauer
➔ Anotar el conteo de las levaduras
➔ Realizar el cálculo del conteo de las levaduras.

Resultados

Se obtiene CR= 20,55 X 106 Cel/ml de 411 células totales que se observaron en la cámara
de Neubauer y haciendo su conteo respectivo.

Mesa N° 02:

Diluciones sucesivas (Al final de la fermentación)

➔ Reunir el material necesario para medir el crecimiento microbiano.

➔ Homogeneizamos la muestra de chicha de jora.
➔ Luego se hace la dilución 1/10 en un tubo de ensayo colocando 9ml
de agua y 1ml de muestra.
➔ Se homogeniza la muestra diluida.
➔ seguidamente se toma unas dos gotas de la muestra con una pipeta,
luego se coloca a los extremos de la cámara de Neubauer.
➔ Se colocó el cubreobjeto y se observó al microscopio un aumento de
40X.
➔ Observar los 5 cuadrantes de la cámara de Neubauer
➔ Realizar el conteo de las levaduras en los 5 cuadrantes de cámara de
Neubauer.
➔ Anotar el conteo de las levaduras
➔ Realizar el cálculo del conteo de las levaduras.

Resultados

Se obtiene CR = 49 X 106 Cel/ml de 98 células totales que se observaron en la cámara de

Neubauer y haciendo su conteo respectivo

Mesa N° 03:
 Prueba de viabilidad ( crema de la levadura)

➔ Tomar la muestra de la chicha 1ml y diluir en azul de metileno

➔ gotear en la cámara de Neubauer
➔ observar en el microscopio.

Resultados
La viabilidad es de 100% porque no se tiñó con el colorante azul de metileno.
Las levaduras son muy resistentes.

6. FORMULARIOS
Y REGISTROS
7. REFERENCIA Manual de Procedimiento Técnico de Monitoreo Microbiológico de
Superficies MPT/PMCyR/PR-011 (Revisión 0) /Original. NB/ISO/TR
10013:2002 Directrices para la documentación del sistema de gestión de la
calidad.

8. ANEXO
9. LISTA DE Laboratorio del Área de Fisiología y Genética Microbiana.
DISTRIBUCIÓN
Redactado por Revisado por Aprobado por
DE LA CRUZ CHIMAYCO, Ruth
Blga. ALEXANDRA A. Blga. ALEXANDRA A. URRUTIA ZEGARRA
MUÑOZ MEZA, Liz Viviana URRUTIA ZEGARRA
PALOMINO BENDEZU, Roger
TINCO NUÑEZ, Alex Ricardo

Fecha de redacción Fecha de revisión Fecha de aprobación

29/04/2022 02/05/2022 02/05/2022

Versión original Fecha de vigencia Revisión Fecha de vigencia
N°01
01/05/2022 01/05/2022