LAB. en Casa-Enzimas Bioquimica

UNIVERSIDAD DEL MAGDALENA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Informe de laboratorio Santa Marta, Colombia, oct/2021
Laboratorio de enzimas
Presentado Por:
Natalia Uribe Manjarres (2019211033)
Jesús Romero ()
Jhonatan Velasquez (2016213050)
Trabajo a presentar a:
Edith Gordon Cancio
Bioquímica
Grupo: 1
Universidad del Magdalena
Santa Marta / Colombia
2021-II
Pá gina 1
OBJETIVOS
 Adquiere destreza en el manejo de implementos de laboratorio para dicha práctica.

 Utiliza con eficacia materiales y espacio en el laboratorio.
 Identificar como actúan las enzimas en las reacciones de un organismo.
 Reconocer que factores afectan la actividad enzimática.
RESUMEN
Las enzimas son catalizadores biológicos que permiten que las reacciones metabólicas
ocurran a gran velocidad en condiciones compatibles con la vida.
En las células, la actividad secuencial de muchas enzimas permite que las moléculas se
degraden, o bien se formen moléculas de mayor tamaño a partir de moléculas sencillas.
Desde el punto de vista químico, las enzimas son proteínas globulares, algunas de ellas
con estructura cuaternaria. Para cumplir su función requieren conservar su estructura
nativa, en particular se destaca una región conocida como sitio activo, que es responsable
de catalizar la reacción.
Las enzimas son catalizadores biológicos que, como los catalizadores químicos, aceleran
reacciones y no se consumen durante la reacción, por lo que pueden intervenir muchas
veces catalizando la misma reacción: son moléculas eficientes. A diferencia de otros
catalizadores, las enzimas tienen un sitio activo que les permite unir y orientar las
moléculas que intervienen en la reacción y de esa forma maximizan la posibilidad de
formación o ruptura de enlaces necesarios para la obtención de productos.
El interior de la célula es denso y, aunque los sustratos y las enzimas están en número
relativamente pequeño, se pueden encontrar y dar lugar al complejo ES porque están en
continuo movimiento. Las enzimas se mueven más lentamente que los sustratos y la
velocidad de encuentro va a depender de la concentración de sustrato presente.
El sitio activo tiene una forma determinada por el ordenamiento espacial de los -R que es
única y que es reconocida por su sustrato. Esta es la base de otra de las características
de las enzimas que es su especificidad
Las enzimas tienen un pH y una temperatura óptimos
Pá gina 2
Las enzimas son catalizadores biológicos que tienen una configuración nativa
determinada por las fuerzas estabilizadoras de la proteína. Cualquier factor externo
que altere esas fuerzas va a modificar la actividad de la misma.
La gráfica muestra la variación de la actividad de una enzima mitocondrial a distintos

pH.
Los valores de pH o temperatura óptimos varían según la enzima, pero en todos los
casos permiten que la estructura del sitio activo sea la más adecuada para la catálisis.
La cinética enzimática ayuda a conocer el mecanismo de reacción
La cinética enzimática estudia las velocidades de las reacciones catalizadas por

enzimas y su variación frente a cambios de parámetros experimentales. La velocidad
de una reacción química corresponde al número de moléculas de reactivo(s) que se
convierten en producto(s) por unidad de tiempo y depende de la concentración de los
compuestos incluídos en el proceso y de la constante de velocidad que es una
característica de la reacción. Por ejemplo, la conversión reversible de A en B tiene una
velocidad de reacción directa cuya ecuación es:
v= k+1 [A] y otra inversa que es v inversa = k-1 [B]
donde k+1 y k-1 son las constantes de velocidad y [A] y [B] simbolizan las
concentraciones de A y B respectivamente. En el equilibrio, las dos velocidades son
iguales lo que lleva a definir la constante de equilibrio de la reacción (Keq)
Keq = k+1/k-1 = [B] / [A]
ABSTRAC
Enzymes are biological catalysts that allow metabolic reactions to occur at high speed under
conditions compatible with life. In cells, the sequential activity of many enzymes allows
molecules to degrade, or larger molecules to form from simple molecules. From the chemical
point of view, enzymes are globular proteins, some of them with quaternary structure. To fulfill
their function they require preserving their native structure, in particular a region known as an
active site, which is responsible for catalyzing the reaction. Enzymes are biological catalysts
that, like chemical catalysts, accelerate reactions and are not consumed during the reaction, so
they can intervene many times catalyzing the same reaction: they are efficient molecules.
Unlike other catalysts, enzymes have an active site that allows them to bind and orient the
molecules involved in the reaction and thus maximize the possibility of formation or rupture of
bonds necessary to obtain products. The inside of the cell is dense and, although substrates
and enzymes are in relatively small numbers, they can be found and give rise to the ES complex
Pá gina 3
because they are in continuous motion. Enzymes move more slowly than substrates and the
rate of encounter will depend on the concentration of substrate present. The active site has a
shape determined by the spatial arrangement of the -R that is unique and that is recognized by
its substrate. This is the basis of another of the characteristics of enzymes which is their
specificity Enzymes have optimal pH and temperature Enzymes are biological catalysts that
have a native configuration determined by the stabilizing forces of the protein. Any external
factor that alters these forces will modify the activity of the force. The graph shows the
variation in the activity of a mitochondrial enzyme at different pH. The optimal pH or
temperature values vary according to the enzyme but in all cases allow the structure of the
active site to be the most suitable for catalysis. Enzymatic kinetics helps to know the reaction
mechanism Enzymatic kinetics studies the rates of enzyme-catalyzed reactions and their
variation against changes in experimental parameters. The rate of a chemical reaction
corresponds to the number of molecules of reactant(s) that become product(s) per unit time
and depends on the concentration of the compounds included in the process and the rate
constant that is a characteristic of the reaction. For example, the reversible conversion of A to B
has a direct reaction rate whose equation is:
v= k+1 [A] and another inverse that is v inverse = k-1 [B]
where k+1 and k-1 are the velocity constants and [A] and [B] symbolize the concentrations of A
and B respectively. In equilibrium, the two velocities are equal which leads to defining the
equilibrium constant of the reaction (Keq)
Keq = k+1/k-1 = [B] / [A]
INTRODUCCIÓN
Las enzimas son proteínas “especialistas” y controlan todas las reacciones químicas de
nuestro cuerpo. Hay enzimas en todo lo que está vivo. Se dice que son catalizadores,
porque cada reacción química necesita una enzima para que se realice, es decir, todo lo
que se transforma lo hace gracias a una enzima. Cada enzima actúa sobre una sustancia
concreta, como una llave y una cerradura.
Estructura de una enzima - Enzimas Las enzimas son sensibles: necesitan unas
condiciones adecuadas para poder hacer sus funciones y si las condiciones se alteran,
mueren.
Pá gina 4
La temperatura es fundamental, por eso nuestro cuerpo no soporta fiebre por encima de
41-42º un tiempo prolongado y morimos, ya que las enzimas se desnaturalizan.
Los alimentos tienen enzimas, más enzimas tienen cuanto más frescos y menos
manipulados estén. Al someterlos al calor destruimos sus enzimas y éste es uno de los
argumentos principales de la dieta cruda, en la que no se utilizan temperaturas por
encima de 40º más o menos.
No todas las enzimas se desnaturalizan a 40º, algunas aguantan hasta 70º, pero lo que
hay que tener en cuenta es que cuanta más tª y más tiempo se mantiene la tª elevada,
mayor es la destrucción enzimática.
El estudio se realizó en el laboratorio de Química orgánica y bioquímica del bloque V,

segundo piso de la CD principal de la Universidad DelMagdalena, localizada en la capital
del departamento. Santa Marta, Magdalena Direccion:Cl. 32 #22-08.
Imagen 1. ubicación geográfica de la

universidad (goole maps)
MATERIALES Y MÉTODOS
• Papa • Hígado • Gasa • Espinaca • Setas • Mortero • Recipientes plásticos • Cinta •

Peróxido de hidrógeno • Embudo • Hielo • Solución Bicarbonato de sodio • Solución
Vinagre • Jeringa • Baño maría
FACTORES QUE AFECTAN EL FUNCIONAMIENTO DE LA CATALASA
Pá gina 5
PROCEDIMIENTO
1. Para preparar el homogenizado, corte en pedazos por separado la muestra de hígado.
2. Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir
parte de la muestra; no muela excesivamente para que no queden pedazos muy
pequeños del material.
3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa (cheesecloth).
4. Coloque el homogenizado en un “beaker”.
5. Usando un gotero, coloque cinco cuatro gotas del homogenizado de hígado en una de
las fosas de la placa de porcelana y añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
6. En otra fosa coloque un pedazo pequeño de una seta. Rompa este pedazo con un
bisturí en pedazos más pequeños. Añada tres gotas de peróxido de hidrógeno.
7. Haga el mismo procedimiento que en el #6, en otra fosa con un pedazo de espinaca o
cebolla.
8. A una fosa añada cuatro gotas de agua y tres gotas de peróxido de hidrógeno.
9. Anote los resultados en la tabla.
Homogenizado Reacción al añadir gotas de peróxido de hidrogeno

Agua No ocurre ninguna reacción al instante, ni 1min después
cebolla Hubo una reacción de leve de burbuja o espuma como al
interior del homogenizado 30 segundos después de
agregar el peróxido de hidrogeno y se terminó 30
segundos más tarde.
Hígado Al instante que el peróxido tuvo contacto con el
homogenizado de hígado hubo una reacción de espuma
pronunciada y burbujas muy visibles y aumentaba si le
seguía agregando peróxido de hidrogeno.
papa Aquí la reacción ocurrió en 1 a 2 segundos y para este
caso la espuma es pareja y homogénea tanto que se
aprecia como una capa blanca en vez de espuma.
10. Qué ocurre con el peróxido de hidrógeno?
Este se descompone en agua y oxígeno y al mismo tiempo libera energía y forma de calor
esto debido a que la enzima de la catalasa actúa sobre él.
11. Por qué hay desprendimiento de burbujas?
Pá gina 6
Esto se debe a que hay un desprendimiento de oxígeno de la reacción catalizada

por la enzima catalasa.
12. ¿Qué indican los resultados sobre la fisiología de estos organismos?
Indica que hay presencia de catalasa que es una enzima presente en los peroxisomas de
las células de todos los tejidos animales y vegetales. Esta se encuentra presente en los
materiales orgánicos con lo que se trabajó ya sea en mayor o menor cantidad que otros,
pero ahí esta y por eso reacciona con el peróxido de hidrogeno.
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS
1. Rotule cinco tubos de ensayo del 1 al 5 y caliente un baño de agua hasta 37 °C y otro
hasta 80°C.
2. Añada 5 mL de hígado homogenizado a cada tubo.
3. Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:
Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos
Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos
Tubo 3 = Temperatura ambiental
Tubo 4 = Hielo por 30 minutos
Tubo 5 = Congelador a 4 °C por 30 minutos
4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno al tubo 1.
5. Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que se comienzan a
producir burbujas, y anótelo en la Tabla
6. Repita con los demás tubos.
Tubo Temperatura Tiempo que tardo Observaciones

en iniciar la
reacción
1 80 º 1 segundo casi La espuma era un poco
dos densa y la altura que
alcanzo fue de 1 cm y
medio
2 37º Fue inmediata La espuma era dilatada y
Pá gina 7
se apreciaban bien las

burbujas
3 Ambiente Fue inmediata Al igual que a los 37° La
espuma era dilatada y se
apreciaban bien las
burbujas
4 Hielo Fue inmediata La reacción fue más
rápida y concisa que las
anteriores, pero la
espuma tardo más en
desvanecerse
5 Congelador Fue inmediata Al igual que la anterior
reacción fue más rápida y
en comparación a las
anteriores reacciones,
esto debido al calor que
se le impirme, pero la
espuma tardo más en
desvanecerse se volvió
un poco pegajosa.
7. Compare sus resultados en término de tiempo de reacción vs. temperatura.
8. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?
aumentar la temperatura generalmente acelera una reacción, y bajar la temperatura la

hace más lenta.
9. ¿Qué le sucede a las enzimas cuando se exponen a temperaturas extremas (muy frías
o muy
Altas temperaturas: En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

químicas: por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las
reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general.
Bajas temperaturas: A bajas temperaturas, el aporte de calor usualmente aumenta la

velocidad de una reacción enzimática, porque los reactivos tienen mayor energía y
pueden alcanzar el nivel de la energía de activación con mayor facilidad.
EL EFECTO DEL PH SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS
1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C
2. Añada 3 mL de homogenado de hígado a cada tubo.
Pá gina 8
3. Añada soluciones 3M de HCl o 3M de NaOH a los tubos como se indica a continuación,

y agite suavemente hasta mezclar:
Tubo A – 3 ml de 3M HCl
Tubo B – 3 ml de 3M NaOH
Tubo C – control (no ácido ni base)
4. Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.
5. Observe y anote las reacciones en la Tabla
Tubo Tiempo que toma la Descripción comparativa

reacción en completarse de las reacciones
A La reacción fue una capa
de burbujas encima de la
solución esta alcanzo 1 cm
1:01 segundos de altura este inicio 2
segundos luego de ser
agregado el peróxido de
hidrogeno y durante el
transcurso de la reacción
se aprecia un cambio en la
coloración de la solución,
se torna amarrosa.
B Hubo una reacción al
instante que el peróxido
tiene contacto con la
1:10 segundos solución hígado esta es
una capa de burbujas en la
superficie de la y alcanzo
unos 2 cm no hubo ningún
cambio en la coloración
C Hubo una fuerte reacción
en comparación a A y B la
58 segundos espuma alcanzo casi 4 cm
y hubo cambio en la
coloración tornándose de
un rojo más claro
6. ¿Cómo afecta el pH la actividad

enzimática?
La mayoría de los enzimas son muy

sensibles a los cambios de pH. Desviaciones
Pá gina 9
de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente

su actividad. Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y
la arginasa lo tiene a pH 10
7. Las enzimas del estómago funcionan óptimamente a un pH de 2. ¿Cómo se afectaría la

digestión si el pH aumenta a 4?
El alimento no sería procesado
Explicación:
Mira te explico, el pH que tiene la digestión es menor que cero, por lo tanto descompone
las sustancias de los alimentos en migajas, mientras que si tenemos un pH de 4 o mayor
a 4 nuestro líquido gástrico o nuestro flujo gástrico disminuirá haciendo así que los
alimentos queden menos procesados, y no se les sacarán tantas proteínas como se le
hace normalmente a los alimentos, por lo tanto no tendríamos un buen metabolismo y
tampoco tendríamos las suficientes proteínas que necesita nuestro cuerpo.
8. ¿De qué otras maneras se podría explorar el funcionamiento de las enzimas estudiadas
en el laboratorio?
9. ¿Puede mencionar otras enzimas que actúan en nuestro cuerpo?
Lipasa, amilasa, lactasa, maltasa.
10. ¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las
enzimas?
Un síndrome febril no alcanza la temperatura suficientemente alta ni sostenida por el

tiempo suficiente para afectar el funcionamiento de las enzimas en el cuerpo. Si bien
produce indirectamente una respuesta enzimática más rápida, esto no es por la
temperatura sino por la activación de células y sustancias del sistema inmunológico para
Pá gina 10
defenderse de la infección. Los aumentos de temperatura que logran afectar el

Funcionamiento enzimático se dan en modelos in vitro, en laboratorios a temperaturas
sostenidamente mucho más altas (o bajas).
11. Busque un ejemplo de una condición médica que se deba al mal funcionamiento de
una enzima.
El síndrome de Hunter es un trastorno genético muy poco frecuente producido por la falta
de una enzima o por su mal funcionamiento. En el síndrome de Hunter, el cuerpo no tiene
suficiente enzima iduronato 2-sulfatasa. El trabajo de esta enzima es descomponer ciertas
moléculas complejas y, sin suficiente cantidad de esta enzima, las moléculas se acumulan
en cantidades perjudiciales.
La acumulación de cantidades masivas de estas sustancias nocivas con el tiempo causa

un daño progresivo y permanente que afecta el aspecto, el desarrollo mental, la función
de los órganos y las capacidades físicas.
El síndrome de Hunter es mucho más frecuente en los varones. La enfermedad es uno de

los tipos que conforman el grupo de trastornos metabólicos hereditarios llamado
«mucopolisacaridosis». El síndrome de Hunter también se conoce como
«mucopolisacaridosis tipo II».
No existe cura para el síndrome de Hunter. El tratamiento consiste en el control de los

síntomas y las complicaciones.
CONCLUSIÓN
En esta práctica del laboratorio se comprobó y confirmó que ciertos factores como la
temperatura el pH y la concentración afectan la actividad enzimática al finalizar cada
practica se obtuvieron resultados los cuales se confirmaron luego de una buena
investigación por parte de todos se concluyo que para que haya una actividad enzimática
sus condiciones deben ser optimas.
Pá gina 11
WEBGRAFÍA
http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/energy_enzymes_catalysis/
07t.html#:~:text=Las%20enzimas%20son%20catalizadores%20biol
%C3%B3gicos.&text=A%20bajas%20temperaturas%2C%20el%20aporte,de%20activaci
%C3%B3n%20con%20mayor%20facilidad.
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#:~:text=EFECTO%20DE%20LA
%20TEMPERATURA%20SOBRE,enzimas%20siguen%20esta%20ley%20general.
https://www.mayoclinic.org/es-es/diseases-conditions/hunter-syndrome/symptoms-
causes/syc-20350706#:~:text=El%20s%C3%ADndrome%20de%20Hunter
%20es,suficiente%20enzima%20iduronato%202%2Dsulfatasa.
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/cellular-energetics/environmental-impacts-
on-enzyme-function/a/hs-enzymes-review
https://www.1doc3.com/web/ver/206421/que-efecto-podria-tener-una-fiebre-prolongada-
sobre-el-funcionamiento-de-las-enz
https://brainly.lat/tarea/28576841
https://medicoplus.com/medicina-general/principales-enzimas-celulares
Pá gina 12

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Universidad del Magdalena

Santa Marta / Colombia

 Adquiere destreza en el manejo de implementos de laboratorio para dicha práctica.

Las enzimas tienen un pH y una temperatura óptimos

La gráfica muestra la variación de la actividad de una enzima mitocondrial a distintos

La cinética enzimática ayuda a conocer el mecanismo de reacción

La cinética enzimática estudia las velocidades de las reacciones catalizadas por

v= k+1 [A] y otra inversa que es v inversa = k-1 [B]

Keq = k+1/k-1 = [B] / [A]

v= k+1 [A] and another inverse that is v inverse = k-1 [B]

Keq = k+1/k-1 = [B] / [A]

El estudio se realizó en el laboratorio de Química orgánica y bioquímica del bloque V,

Imagen 1. ubicación geográfica de la

• Papa • Hígado • Gasa • Espinaca • Setas • Mortero • Recipientes plásticos • Cinta •

FACTORES QUE AFECTAN EL FUNCIONAMIENTO DE LA CATALASA

1. Para preparar el homogenizado, corte en pedazos por separado la muestra de hígado.

3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa (cheesecloth).

4. Coloque el homogenizado en un “beaker”.

9. Anote los resultados en la tabla.

Homogenizado Reacción al añadir gotas de peróxido de hidrogeno

10. Qué ocurre con el peróxido de hidrógeno?

11. Por qué hay desprendimiento de burbujas?

Esto se debe a que hay un desprendimiento de oxígeno de la reacción catalizada

12. ¿Qué indican los resultados sobre la fisiología de estos organismos?

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS

2. Añada 5 mL de hígado homogenizado a cada tubo.

3. Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:

Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos

Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos

Tubo 3 = Temperatura ambiental

Tubo 4 = Hielo por 30 minutos

Tubo 5 = Congelador a 4 °C por 30 minutos

4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno al tubo 1.

6. Repita con los demás tubos.

Tubo Temperatura Tiempo que tardo Observaciones

se apreciaban bien las

7. Compare sus resultados en término de tiempo de reacción vs. temperatura.

8. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?

aumentar la temperatura generalmente acelera una reacción, y bajar la temperatura la

Altas temperaturas: En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones

Bajas temperaturas: A bajas temperaturas, el aporte de calor usualmente aumenta la

EL EFECTO DEL PH SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS

1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C

2. Añada 3 mL de homogenado de hígado a cada tubo.

3. Añada soluciones 3M de HCl o 3M de NaOH a los tubos como se indica a continuación,

Tubo C – control (no ácido ni base)

4. Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.

5. Observe y anote las reacciones en la Tabla

Tubo Tiempo que toma la Descripción comparativa

6. ¿Cómo afecta el pH la actividad

La mayoría de los enzimas son muy

de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente

7. Las enzimas del estómago funcionan óptimamente a un pH de 2. ¿Cómo se afectaría la

El alimento no sería procesado

9. ¿Puede mencionar otras enzimas que actúan en nuestro cuerpo?

Lipasa, amilasa, lactasa, maltasa.

Un síndrome febril no alcanza la temperatura suficientemente alta ni sostenida por el

defenderse de la infección. Los aumentos de temperatura que logran afectar el

La acumulación de cantidades masivas de estas sustancias nocivas con el tiempo causa

El síndrome de Hunter es mucho más frecuente en los varones. La enfermedad es uno de

No existe cura para el síndrome de Hunter. El tratamiento consiste en el control de los