TRABAJO CINÉTICA ENZIMATICA

JUAN SEBASTIAN OROZCO GOMEZ

Cod:1950046

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROCESOS MICROBIOLOGICOS INDUSTRIALES
QUIMICA INDUSTRIAL
2019
Ejercicios Cinética Enzimática

1. Para estudiar la dependencia de la v frente a [S] de una reacción catalizada

enzimáticamente, una cantidad constante de enzima se adiciona a una serie de
medios de reacción de 10 ml de volumen conteniendo diferente [S]. Las
velocidades iniciales de reacción se han determinado midiendo el número de
moles de producto formado por minuto, obteniéndose los siguientes resultados:

Responda las siguientes cuestiones:

{S} Vo 1/{S} 1/Vo

0,05 0,25 20 4 b 3,989
0,005 0,25 200 4 Vmax 0,2506894
0,0005 0,25 2000 4 m 5,00E-05
0,00005 0,2 20000 5 Km 1,25E-05
0,000005 0,071 200000 14,084507
0,0000005 0,0096 2000000 104,166667

0,000001 2x10-2
0,1 2x10-3

a) ¿Cuál es la Vmax para esta [E]?

120
y = 5E-05x + 3.989
100 R² = 1

80

60

40

20

0
0 500000 1000000 1500000 2000000 2500000

La Vmax para este [E] es igual a:

1/b que equivale a 3,989 por lo tanto la Vmax=0,2506894
 b) ¿Cuál es la Km de esta enzima?

Km= m*Vmax= 5x10-5 x 0,2506894= 1,25x10-5

c) Demostrar si está reacción sigue o no la cinética de Michaelis-Menten.

0.3

0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
-0.01 0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06

Observando la gráfica, a pesar de que no se cuenta con muchos datos, se puede

deducir que si sigue la cinética de Michaelis-Menten.

d) ¿Cuáles serán las velocidades iniciales a [S]=1x10-6 M y a [S]=1x10-1 M?

Vo=Vmax*[S] / Km+[S]= 0,2506894* 0,000001 / 1,25x10-5+0,000001 = 2x10-2

Vo=Vmax*[S] / Km+[S]= 0,2506894* 0,1 / 1,25x10-5+0,1 =2x10-3

2. La cinética de una enzima viene medida como función de la [S] en ausencia y

presencia del inhibidor a una [I]=10-4 M. A partir de los siguientes resultados:

[S] Vo sin I Vo con I 1/[S] 1/Vo sin 1/Vo con

3,00E-04 10,4 2,1 3,33E+03 0,09615385 0,47619048
5,00E-04 14,5 2,9 2,00E+03 0,06896552 0,34482759
1,00E-03 2,25E+01 4,5 1,00E+03 0,04444444 0,22222222
3,00E-03 33,8 6,8 3,33E+02 0,0295858 0,14705882
9,00E-03 40,5 8,1 1,11E+02 0,02469136 0,12345679
a) Representar v0 frente a [S] y 1/V0 frente a 1/[S].

Sin I Con I
45 9
40 8
35 7
30 6
25 5
20 4
15 3
10 2
5 1
0 0
0.00E+002.00E-034.00E-036.00E-038.00E-031.00E-02 0.00E+002.00E-034.00E-036.00E-038.00E-031.00E-02

Inversos:

Sin I Con I
0.12 0.6

0.1 y = 2E-05x + 0.0224 0.5 y = 0.0001x + 0.1125

R² = 0.9988 R² = 0.9982
0.08 0.4

0.06 0.3

0.04 0.2

0.02 0.1

0 0
0.00E+00 1.00E+03 2.00E+03 3.00E+03 4.00E+03 0.00E+00 1.00E+03 2.00E+03 3.00E+03 4.00E+03

b) Calcular Vmax. y Km en ausencia y presencia de inhibidor. c) ¿Qué tipo de

inhibición es esta?

Con I Sin I
b 0,1125 b 0,0224
m 0,0001 m 2,00E-05
Vmax 8,88888889 Vmax 44,6428571
Km 0,00088889 Km 8,93E-04

Analizando los resultados se puede observar que es un inhibidor no competitivo ya

que la Km aumenta y la Vmax disminuye.
c) Calcular la Ki.

3. La enzima aspartato transcarbamilasa cataliza la primera reacción propia de la

síntesis de pirimidinas. En un estudio de ésta enzima, utilizando aspartato como
sustrato, en presencia de CTP 0,5 M y en ausencia del mismo, se obtuvieron los
siguientes datos:

a) Cual es el valor de Km, Vmax y Kcat si la concentracón de enzima es 0,5 mM

Con CTP Sin CTP

m 5,2414 m 2,2584
b 0,2442 b 0,0464
Vmax 4,0950041 Vmax 21,5517241
Km 21,4635545 Km 48,6724138
Kcat 8,19000819 Kcat 43,1034483

b) Cual es la eficiencia catalítica de la enzima.

Km 21,4635545 Km 48,6724138
Kcat 8,19000819 Kcat 43,1034483
Kcat/Km 0,38157744 Kcat/Km 0,88558271
 siguientes condiciones:
a). [S]=2x10-3 M y [I]=2x10-3 M
b). [S]=4x10-4 M y [I]=2x10-3 M
c). [S]=7.5x10-3 M y [I]=1x10-5 M
Asume que KM=2x10-3 M, KI=1.5x10-4 M y Vmax=270 nM/min.
c) Utilizando la ecuación de Michaelis-Menten, calcular V0 para una [S]=3 mM.
¿Existe alguna discrepancia entre éstos datos y los experimentales?.
Justificarlo. Solución:
En cada inciso calculamos la velocidad sin (v0) y con (vi) efectos de inhibición
a).
v0 =
Vmax [S ] (270nM / min ) 2x10 6 nM
=
( )
= 135nM / min
K M + [S ] 2x10 6 nM + 2 x10 6 nM

vi =
Vmax [S ]
=
(270nM / min ) 2 x10 6 nM ( )
= 17.61nM / min
æ [I ] ö æ 2x10 6 nM ö
6
(
K M çç1 + ÷÷ + [S ] 2x10 nM çç1 + ) ÷÷ + 2x10 nM
6
21,5517241∗3
è K i ø è 1 .5 x10 5
nM ø
Sin CTP 𝑉𝑜 = = 1.25
48,6724138+3
æ v ö æ 17.61nM / min ö
i% = çç1 - i ÷÷ * 100 = ç1 - ÷ * 100 = 86.96%
è v0 ø è 135nM / min ø
b).
Vmax [S ] (270nM / min )(4x10 5 nM )
4,0950041∗3
Con CTP 𝑉𝑜 = = 0,502
21,4635545+3v 0 = = = 45nM / min
K M + [S ]
6
2x10 nM + 4x10 nM
5

Cuando se compran los datosV se[Spuede ]

vi =y los obtenidos con
calculados por la ecuación
max
observar (270una
nM /diferencia
= la concentración de
(
min ) 4x10 5 nM
3mM,
)
entre los
aunque = 3.72nM / min
æ [ I ] ö
K M çç1 + similar
los valores siguen un comportamiento (
÷÷ + [S ] en2x10
æ
)
nM çç1de
los casos
6 2 x10 6
+ presencia
nM ö
÷÷y+ausencia
4x10 5 nM
è Ki ø
5
de CTP, esto se puede atribuir a los factores externos e è 1.5x10 nM ø afectar
internos que pueden
el experimento como lo son la temperatura el pH, la concentración. Etc.
Gracias a esto podemos deduciri que æ lavi ecuación
ö æ 3.72permite ö
nM / min predecir
% = ç1 -
ç ÷÷ * 100 = ç1nos- el
÷ * 100 = 91.74%
comportamiento, pero que debido a los factores
è v0 ø que afectan è 45nM / min ø no logra
la reacción
predecir valores completamente exactos.
c).
Vmax [S ] enzimática?
d) ¿Qué efecto tiene el CTP sobre la actividad
v0 =
(270nM / min ) 7.5x10 nM
=
( 6
) = 213.16nM / min
K M + [S ] 2x10 nM + 7.5x10 nM
6 6

( )
El CTP funciona como un inhibidor de la encima ya que reduce la velocidad a la que
Vmax [S ] en producto,(270
el sustrato reacciona y se convierte / min ) 7.5x10 6 nM
pornMconsiguiente, reduce la
v = = = 210.21nM / min
efi9ciencia enzimática. i æ [I ] ö æ 1x10 4 nM ö
(
K M çç1 + ÷÷ + [S ] 2x10 6 nM çç1 + ) ÷÷ + 7.5x10 6 nM
è Kse
5
4. En experimentos de laboratorio, è 1.5x(A
i ø utilizaron dos Amilasas B) øobtenidas de
10y nM
diferente microorganismoæ (ver vi ötabla). Decida
æ 210.cual 21nMenzima
/ min ö presenta una mayor
ç
eficiencia catalítica ,i%(Kcat/ ÷
= ç1 - Km÷)* 100
si la= concentración
ç1 - ÷ * 100
de las = 1.38%utilizada en
enzimas
abbos experientos fue 0,2uM.è v 0 ø è 213 .16 nM / min ø
 Ingeniería Bioquímica Industrial
En experimentos de laboratorio, se utilizaron dos decarboxilasas (A y B) obtenidas de
diferente microorganismo (ver tabla). Decida cual enzima demuestra un mayor
coeficiente de especificidad, (Vmax/ Km), recuerde que entre mayor sea el valor del
coeficiente de especificidad más específica es la enzima por el substrato.

Enzima A Enzima B
[S] Velocidad [S] Velocidad
(mM) (mM/min) (mM) (mM/min)
0.0002 0.3373 0.005 0.3962
0.0002 0.3364 0.005 0.3857
0.0005 0.6945 0.01 0.6163
0.0005 0.6957 0.01 0.6413
0.001 1.0764 0.05 1.5606
0.001 1.1407 0.05 1.5689
0.005 1.9636 0.1 1.9862
0.005 1.7706 División de Ciencias
0.1 Biológicas
1.7909 y de la Salud
0.01 2.0641 0.25
Ingeniería Bioquímica 2.2011
Industrial
0.01 2.0751 0.25 2.2047

Solución:
enzima A
2. PROBLEMAS DE INHIBICIÓN
enzima B
3.5000
yVmax
= 0.5081x + 0.4224 2,36798484 Vmax 2,31320842
3.0000
Km
R² = 0.999
Calcule v y el
V max =
grado
0,00118399 Km i K = 0,02498265 de inhibición
2.36719094 (mM/min)
(μM)
causado por un inhibidor
1.20279143
siguientes condiciones:
M
2.5000
Kcat 1,18E+06 Kcat 1,16E+06
2.0000
Kcat/Km 1,00E+09 Kcat/Km-3 M y [I]=2x10
a). [S]=2x10 4,63E+07-3 M-1
V max/K M = 1.968 min
1.5000
-4 -3
Observando los 1.0000
resultados obtenidos se puede concluir que
b). [S]=4x10 M y [I]=2x10 M
-3 la enzima A-5presenta una mayor
eficiencia 0.5000
catalítica, esto observando
División quec).
la [S]=7.5x10
relación M y [I]=1x10
Kcat/Km Mel orden de 109
en A esta en
de Ciencias Biológicas y de la Salud
División de Ciencias Biológicas y de la Salud
Mientras que en B 0esIngeniería
0.0000
Ingeniería Bioquímica Industrial
del orden
2
de 1047 Asume
Bioquímica que KM=2x10 M, KI=1.5x10-4 M y Vmax=270 nM/min.
Industrial
6
-3

2. PROBLEMAS
5. Calcule vi y el porcentaje DE INHIBICIÓN
de inhibición causado por un inhibidor competitivo bajo
2. PROBLEMAS DE INHIBICIÓN
las siguientes condiciones:
3.0000
Solución:
Calcule vi y el grado de inhibición
En cada
y = 10.814x + 0.4323 causadola por
incisoV calculamos un inhibidor
velocidad sin (v0) ycompetitivo bajo
con (vi) efectos de la
in
Calcule vi y a).
el grado de inhibiciónsiguientes
2.5000 condiciones:
causado por un inhibidor
R² = 0.9967 = 2.31346294
competitivo bajo las
(mM/min)

a).
max
-3
[S]=2x10 M y [I] -3
= 2x 10 M
a). [S]=2x10-3 M y [I]=2x10 -3
MK = (μM)

( )
25.0185663 M

Vmax [S ] (270nM / min ) 2x10 6 nM

siguientes condiciones: 2.0000
b). [S]=4x10 -4
M y [I]=2x10 M-3

a). [S]=2x10-3b). [I]=2x10-4-3 M

M y[S]=4x10 M y [I]
c). [S]=7.5x10 M y [I]=1x10 MV /Kv = =
1.5000 = 2x 10 -3 M-3 -5
min= = 135nM
[ ]
-1

b). [S]=4x10-4 M y [I]=2x10-3 M Asume que KM=2x10-3 M, KI=1.5x10-40 M Ky MVmax + +

0.092
S 6 6
max M

1.0000
=270 nM/min.
2 x10 nM 2 x10 nM
-3 -5-3

( )
-5
c). [S]=7.5x10c).M[S]=7.5 x10 M
y [I]=1x10 M y [I] = 1x 10 M
-3 0.5000
Asume que KM=2x10 M, KI=1.5x10 Solución:
-4
M y V max =270 nM/min. Vmax S ( []
270nM / min ) 2 x10 6 nM
v la= velocidad sin (v ) y=con (v ) efectos de inhibición
En-5cada inciso calculamos
-4
æ [I ] ö
Asume que K0.0000
M=2x10 M, KI=1.5x10 M y Vmax=
i 270 nM/min.
0 i
æ 2x10 6 nM ö
[S ])(2x(2x10 ) =)çç135
a).
[S ]K M= çç(1270
+ nM÷÷ /+min 1+ ÷÷ + 2x10 6 nM
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
6
Solución: Fórmulas requeridas: Vmax 6
10 nM nM
v
En cada inciso calculamos la velocidad sin (v0) y con (v = K
i K M + [S ] è 2 x10i 6ønM + 2 x10 6 nM
0 ) efectos de inhibición
è 1.5x10 nM ø
5
nM / min

vi ö)6(2 x10 nM ) 17.61nM= 17

a). Vmax [S ] (270nM æ / min æ ö / min
6

v0 =
Vmax [S ] (270nM / min )æ2x10[I ]nM
=
vi = 6
ö (
=
K M çç1 + 6 ÷÷ + [S=]135(nM
2x10/ min
i %
)
= ç 1 -
nM )çç1ç+ v ÷ 5
æ 2 x10÷ * 100
nM ö= ç 1 -
÷÷ + 2 x10135
/ min
÷ * 100 = 86.
.61nM

K M + [S ] ø nM ø è ø
6 6

è è 1.5x0 10
2x10 nM + 2èx10 KnM
6 nM
nM / min
i ø

Vmax [S ] (270nM / min ) 2i x10b).6æçnM vi ö( )

æ 17.61nM / min ö
ç1 - v ÷÷ * 100==17
( )
vi = = = - nM / min
ç1.61 ÷ * 100 = 86.96%
æ [I ] ö æ 2x10 nM ö
%
è 0 ø è V
135 nMS / min(270
ø nM / min ) 4x10 5 nM []
( )
6
K M çç1 + ÷÷ + [S ] 2x10 b).
nM çç1 + ÷÷ + 2x10 nM v0 = = = 45nM /
6 6 max

è K i ø è 1 .5 x10 5
nM ø V [S ] K
(270nM / min
v0 =
+ 5 2 x10 nM + 4 x10 nM
M )(4x10 nM )
S
=
6 5
[] = 45nM / min
( )
max

æ v ö æ 17.61nM / min öK M + [S ] V2max x10 nM + 4 x10 nM

( []
270nM / min ) 4x10 5 nM
6 5

i% = çç1 - i ÷÷ * 100 = ç1 - ÷ * = S
V min [S ]ø vi ==
100 86 .96 % = )(4x10 nM )
(270nM / min 5

è v0 ø è vi =135nM /max
æ æ I ö
[I ] ö 6 æ 2x10=6 3nM
6
[ ]æö
.72nM / min
2 x10 nM 6 ö 5 5
a)
[S]=2x10-3 M y [I] = 2x 10-3
M

Vo 2,6733E-07

Vi 2,3615E-07

I% 11,6634

b)
[S]=4x10-4 M y [I] = 2x 10-3
M

Vo 2,57143E-07

Vi 1,5728E-07

I% 38,835

c)
[S]=7.5 x10-3 M y [I] = 1x 10-5
M
Vo 2,6928E-07

Vi 2,6923E-07

I% 0,0186