PROBLEMAS DE BIOQUIMICA. Curso 08/09.

PROBLEMAS DE CINETICA ENZIMATICA. 1. Una enzima cataliza una reacción con una velocidad máxima de 5 µmoles por minuto, siendo su Km para el sustrato de 0,5 mM. Si la ponemos en presencia de una concentración 500 mM de sustrato, ¿Qué cantidad de sustrato se logrará transformar en 10 min? Sol.: 50 µmoles 2. La Km de una hexoquinasa para la glucosa es 10-4 M. Si la concentración de glucosa en el medio de reacción es 1,8 µg/ml, ¿cuál será la relación [E]/[ES]? (Pm glucosa= 180). Sol.: 10. 3. La Km para el etanol de la alcohol deshidrogenasa de levadura es de 1,3 x 10-2 M. Si la concentración de alcohol en el medio de reacción es de 59,8 µg/ml, ¿qué proporción de enzima estará libre y qué proporción estará combinada con el sustrato? (Pm etanol= 46). Sol.: [ES]= 9,1%; [E]= 90,9% 4. Calcular qué velocidad se obtendrá en una reacción enzimática si la velocidad máxima es igual a 100 y la concentración de sustrato es igual: a) 10 Km y b) Km/3. Sol.: a) v= 90,9; b) v= 25 5. Calcular qué concentración de sustrato, expresada en función de la Km, nos dará una velocidad de reacción enzimática igual al 60% de la velocidad máxima. Sol.: [S]= 1,5 Km. 6. Calcular la relación entre la concentración de sustrato necesaria para una velocidad 90% de la velocidad máxima y la requerida para una velocidad 10% de la velocidad máxima, es decir [S]90/[S]10, para una enzima cuya cinética de saturación sigue una hipérbola. Sol.: [S]90/[S]10= 81. 7. Una enzima cuya Km= 2,4 x 10-4 M se ensaya con las siguientes concentraciones de sustrato: a) 2 x 10-7 M; b) 6,3 x 10-5 M; c) 10-4 M. La velocidad medida en la reacción con 5 x 10-2 M de sustrato fue de 0,128 µmoles/min. Calcular las velocidades iniciales en los otros casos. Sol.: a) 0,107 µmoles/min; b) 26,61 µmoles/min; c) 27,6 µmoles/min. 8. Una enzima cataliza una reacción a una velocidad de 35 µmoles/min cuando la concentración de sustrato es 0,01 M. La Km para el sustrato es 2 x 10-5 M. ¿Cuál será la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a) 3,5 x 10-3 M; b) 4 x 10-4 M; c) 2 x 10-4 M; d) 2 x 10-6 M y e) 1,2 x 10-6 M?. Sol.: a) 34,8 µmoles/min; b) 33,3 µmoles/min; c) 31,8 µmoles/min; d) 3,18 µmoles/min; e) 1,98 µmoles/min.

6 a) Determínese la Km de la enzima y la velocidad máxima que se puede conseguir con la concentración de enzima utilizada.588 1.8 nmoles/min.78 3. Km= 0.0 2.5 3.3 -3 80 x 10 74. 12.35 µmoles/min.5 2.4 mM.500 0.: a) Km= 0.: Km= 5 mM.0 2. Calcular la Km y la Vmáx a partir de los datos que se resumen a continuación: Sustrato (mM) Velocidad (µmoles/min) 2.0 128 x 10-3 92. pero con distintas concentraciones iniciales de sustrato.9.5 1. expresada como U/ml.95 3.67 2.152 U/ml.0 1.0 2. 25 µl de una preparación enzimática se llevan a ensayo a un volumen de reacción estándar de 1 ml y a temperatura y pH óptimos.6 100 x10-3 83. La descarboxilación enzimática de un ß-cetoácido procede con las velocidades iniciales para las concentraciones que se citan: [cetoácido] (mM) Velocidad (µmoles CO2/2 min) 2.417 0. 11. A partir de los siguientes datos obtenidos para una reacción catalizada enzimáticamente.40 2.42 12.714 0.64 Sol.0 1. Un sustrato fue hidrolizado por una enzima y la velocidad inicial de desaparición fue medida para distintas concentraciones del mismo. calcular gráficamente la Km y la Vmax de dicha enzima Sustrato (mM) 0.13 4.00 1. b) 6.5 1.500 0. Sol. contiene nuestra preparación enzimática?. b) ¿Qué cantidad de enzima.000 0.00 Sol.3 0. obteniéndose las velocidades iniciales que se indican: Sustrato (mM) Velocidad (nmol/min) -3 303 x10 120. Vmax= 5 µmoles/min 10.: Vmáx= 0.0 Velocidad (µmoles/min) 1.083 mM y Vmax= 153.370 0.252 A partir de estos datos calcular Vmáx y Km de esta reacción enzimática. Sol.: Km= 2 mM.50 2.526 0.14 38. Vmáx= 3 µmol/min. .0 149 x10-3 98.250 0.

18.052 0.9 µmoles. corta al eje de abscisas en -40 litros/mol? Sol.69 mM.: Km= 25 mM 15. Vmax= 2 x 10-4 moles/min.48 µmoles/2 min 14. Vmáx= 0. ¿Qué información puede obtenerse a partir de una representación de LineweaverBurk cuando la recta obtenida.0 -0.3 x 102 (moles/l)-1. ¿Qué información puede obtenerse de una representación de Lineweaver-Burk sabiendo que cuando (1/[S]) x 10-2= 2.: Km= 1 mM. convenientemente extrapolada.1 M ¿Qué cantidad de sustrato se habrá consumido al cabo de 4 minutos de reacción? Sol. 16. Sol.5 Se pide: a) Calcular la Vmax y Km de dicha enzima en ausencia y presencia de inhibidor. c) En ausencia de inhibidor y con una concentración inicial de sustrato de 0.500 0. Sol.330 1. b) ¿De que tipo de inhibidor se trata?.000 0. Al representar por el método Lineweaver-Burk los datos obtenidos con una determinada enzima se encontró que las rectas cortaban los ejes de coordenadas en los puntos indicados a continuación: Sin inhibidor Con inhibidor (1mM) -1 Corte 0Y (µmol/min) 0. ¿Qué información podría obtenerse de este dato? Sol. 19.: Km= 24 mM. Km= 7.Al representar por el método de Lineawer-Burk una cinética enzimática se obtienen una recta que corta al eje de ordenadas en 1/v= 3 x 105 min/mol.278 1.2 -1 Corte 0X (mM) -2. .13. c) 19. y que la pendiente de dicha recta es 120 min/litro Sol.5 M-1.392 2.420 0. calcular Vmáx y la Km.5 mM.33 µmoles/min 17 Calcular la Km y Vmax de una enzima sabiendo que la recta obtenida en una representación de Lineweaver-Burk corta al eje de ordenadas en 5 x 103 (moles/min)-1.: Km= 4 mM. b) Inhibición competitiva.246 0.: Vmax= 3.170 Sol.: Vmax= 5 µmoles/min.: Vmáx= 4 x 10-2 moles/h. 1/v=0.2 0. A partir de una representación de Lineweaver-Burk para una reacción enzimática cuya recta corta al eje de ordenadas en 1/v= 25 h/mol y extrapolando al eje de abcisas en 1/[S]= -1. Km= 0.000 0. A partir de los siguientes valores determinar gráficamente Km y Vmáx para una reacción enzimática: Sustrato (mM) Velocidad (µmoles P/2 min) 5. Km'= 2 mM.

b) el inhibidor "a" es competitivo.4 mM. Una reacción enzimática se lleva a cabo con distintas concentraciones de sustrato. Calcular: a) Vmax.2 1.625 0. y una pendiente de 0.08 3. b) Km.176 1. en ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes: (Ia)=(Ib)= 1.2 mM.15 3.8 4. e) 3 mM 23.0 -2.: a) Km = 0.480 3.2 M. Vmax= Vmax'= 100 µmoles/min.5 0. a) ¿De qué tipo de inhibición se trata? b) Calcular la Km y Vmax en ausencia y presencia de inhibidor c) Determinar la concentración de inhibidor sabiendo que Ki = 2. d) Calcular la Ki del compuesto A. sabiendo que su Ki = 5 mM Sol. respectivamente. calcular la cantidad de sustrato que se habrá consumido al cabo de 5 minutos de reacción. el punto de corte con el eje de ordenadas es el mismo.: a) Km=Km'b= 1mM. en ausencia y presencia de un inhibidor.5.43 0.83 0.05 min. KmA = 0. Km'= 5 mM. se encontraron los puntos de corte con los ejes indicados en la tabla: Sin adiciones + 5 mM A + ? mM B -1 Corte OY (µmoles/min) 0.8 Corte OX (mM)-1 . Una reacción enzimática se lleva a cabo a diferentes concentraciones de sustrato. al emplear una misma cantidad de enzima y sustrato. Los datos obtenidos se representan en unos ejes de coordenadas según el método de Lineweaver y Burk.2 mM. e) Calcular la concentración de B en el tercer experimento. en las condiciones que se explican en la tabla adjunta.75 mM. Al representar por el método de Lineweaver y Burk los resultados obtenidos en tres experimentos. Al representar por el método de los dobles inversos la cinética de la enzima fosfatasa alcalina (en una resuspensión de 8 µg/ml) y en presencia de p-nitrofenil fosfato. Km'a= 3 mM. La siguiente tabla muestra los datos obtenidos: Sustrato (mM) v (µmoles/min) va (µmoles/min) vb (µmoles/min) 0. Kia = 0.62 5.6 10-1 mM Sol.67 0.4 2. ¿Qué efecto produce este compuesto sobre la actividad enzimática? b) Idem que en "a" pero en el compuesto "b". Kib = 1. corte en abscisas (mM-1) = -3.110 2. Vmax'b = 5 µmoles/min. VmaxB= 1.01 y 0.5 -5.0 Se pide: a) Calcular Vmax y Km en ausencia y presencia de A. en ausencia y presencia de inhibidor.81 Se pide: a) Determinar todos los parámetros cinéticos de la enzima. d) 5 mM. mientras que la pendiente es de 0.5 mM.2 7. Vmax= Vmax'a = 10 µmoles/min. Inhibidor no competitivo. se obtiene una recta que corta al eje de ordenadas en 1/300 min/µM.7 y -0.27 mM. c) 10 µmoles.22 1.6 6. c) [I]= 4. 21. al ensayar en presencia de 60 µM de glicerol fosfato.: a) Inhibición competitiva. c) Número de recambio si el Pm de esta enzima es de 80000 daltons. Inhibidor competitivo. b) Km= 0.20. b) ¿Qué tipo de inhibidores son Ia e Ib? Sol.2 y corte en ordenadas (µmoles/min)-1 = 0. y haciendo la misma representación gráfica. Vmax= VmaxA = 2 µmoles/min. c) En ausencia de A o B y con una concentración inicial de sustrato de 0.160 3.25 µmoles/min.86 1. mientras que el "b" es no competitivo.5 0. b) KmB= 0. Por otro lado.01.44 2. Las rectas obtenidas cortan a los ejes de coordenadas en los siguientes puntos.1 min.55 mM 22. d) ¿De qué tipo de .5 mM.

: a) Inhibición no competitiva y b) Ki= 10-3 M 27.72 1. b) el valor de Km del enzima.02 1.09 6. se obtienen una velocidad Vmáx de reacción de 0.00 4. se observa que el enzima mantiene invariable su Km pero su velocidad máxima disminuye en un 20%.08 mM.inhibidor se trata?.02 1. glutámico.20 8. c) Vmax= 10 µmoles/ min. Al estudiar la cinética de inhibición de cierto enzima se han obtenido los resultados de la tabla siguiente: __________________________________________________________ Sustrato (mM) v (µmol/min) ______________________________________________ [I]= 0 [I]= 0.67 5. e) Calcular Km'.90 2.60 0. c) Nº de recambio= 3000 min-1.52 1. Indicar: a) ¿qué tipo de inhibición ejerce la serina? y b) ¿cuál será el valor de su Ki?.: a) Inhibición acompetitiva. Sol. e) Km’= 30 µM.05 mM. La deshidrogenasa de Spirulina máxima es capaz de oxidar el metilviológeno reducido liberando hidrógeno. En una cuba de fermentación con 25 l de capacidad que contiene un sustrato a una concentración inicial de 0. cuando a un preparado enzimático se le añade L-serina de modo que su concentración resulte ser 16 mM.25 1.: a) Inhibición acompetitiva. f) 20%. b) Km= 15 µM. Averiguar: a) ¿qué tipo de inhibición ejerce el cianuro? y b) ¿cuál será el valor de su Ki?.4 mmoles/min. Por error. b) Ki = 8 mM 26.05 5.54 0. La glutamina sintetasa (GS) cataliza la siguiente reacción: L-Glu + NH3 + ATP L-Gln + ADP + Pi Cuando las concentraciones de NH3 y de ATP son saturantes. Sol. b) Km= 0. Vmax’= 300 µM y Ki= 60 µM. un operario añade 1. f) Determinar el grado de inhibición en estas circunstancias si estamos en presencia de 45 µM de p-nitrofenil fosfato. La enzima responsable del proceso funciona a mitad de dicha velocidad cuando [S]= 20 µM.50 9.2 mM 25. c) la velocidad máxima y d) el valor de Ki Sol. Vmax' y Ki. Sin embargo.13 5. según la ecuación: Hidrogenasa Metilviológeno --------------------------> colorante oxidado + H2 En presencia del ión cianuro (CN-) a concentración 2.02 2. d) Ki= 0. el enzima manifiesta una cinética michaeliana respecto al ácido.5 mmoles de un compuesto tóxico a .10 6. d) Inhibidor competitivo.64 __________________________________________________________ Determinar gráficamente: a) el tipo de inhibición. 24.1 mM [I]= 1 mM __________________________________________________________ 0.: a) 300 µM/min.5 10-4 M.18 0.43 0. Sol. se observa que tanto Km com Vmax disminuyen hasta alcanzar 1/3 del valor primitivo.

Calcular la Ki para un inhibidor competitivo sabiendo que con una [S]= 2 x 10-5 M y una [I]= 10-5 M. b) ¿Cuál será el grado de inhibición? Ki = 3 10-4 M Sol. Suponiendo que el compuesto sólo pudiese ser un inhibidor competitivo o no competitivo y que su Ki fuese igual a 100 µM.76%. Sol. Si se ensaya la enzima con una concentración de sustrato de 60 µM la velocidad de la reacción es de 40 µmoles/min y.: [I]= 1. Se ensaya una enzima con su sustrato específico en presencia de un inhibidor competitivo. Sol. Calcular la concentración de un inhibidor competitivo (Ki= 10-7 M) necesaria para inhibir en un 20% la velocidad de una reacción enzimática (Km= 1. Sol.4 mM.: a) 20 µM. c) 55. Si la velocidad máxima de la reacción no inhibida es de 55 µmoles/min. Calcular: a) Km expresada en µM. calcular la velocidad inicial de la reacción inhibida y el grado de inhibición. b) 75.: Ki= 2 x 10-6 M. ¿Qué concentración de inhibidor competitivo se requiere para conseguir una inhibición del 10% de una reacción enzimática. b) 0. a) Calcular el grado de inhibición de la reacción enzimática en las condiciones anteriormente citadas. b) Vmax (en mmoles/min) de la enzima inhibida c) Grado de inhibición que provoca la presencia del inhibidor.29 mM y la Ki para el inhibidor 2 x 10-5 M?. Sol.dicha cuba al comienzo de la fermentación.5 x 10-4 M de un inhibidor no competitivo?. si la concentración de sustrato es 1. La Vmax de la reacción es 25 moles/l/min y su Km es 4 x 10-5 M a) ¿Qué velocidad se observará en presencia de 4. 33. b) Si [S] incrementa 20 veces mientras [I] permanece constante y c) [S] incrementa 100 veces mientras [I] permanece constante.6 x 10-4 M) cuando la concentración de sustrato es 0.5 x 10-4 M. el grado de inhibición resulta ser del 75%.36 x 10-5 M.35%. Sol. Una cierta enzima cataliza la transformación de 0.62 moles/l/min. observándose un descenso del número de recambio de la enzima.4 mmoles de sustrato en 5 minutos cuando la concentración de éste es saturante. la Km para el sustrato es 0.5% 28. 32.: 0.: Km= 60 µM y Ki= 5 µM .5 x 10-3 M Sol.7 x 10-4 M y su Vmáx es de 300 µmoles/min. Una enzima tiene. en ausencia de inhibidores. Una enzima se ensaya en presencia de una concentración de sustrato 2. 31.5 µmol/min.33 µmoles/min y grado de inhibición= 33. si además se añade un inhibidor competitivo a concentración 30 µM. 30.57%.875 x 10-7 M. Calcular la Km de la enzima y la Ki del inhibidor. Sol.5 mM.: a) 82. se obtiene una velocidad inicial (v') de 1. b) 60% 34.: a) 8.25 mmoles/min. c) 37. sabiendo que: [S]= Km= 2 x 10-4 M y que [I]= Ki= 2.35% 29. una Km para su sustrato de 6.: v'= 18.

sabiendo que la Km de la enzima es 1. necesaria para inhibir en un 80% la velocidad de una reacción enzimática. cuya Ki= 10-7 M.35.6 10-4 M y que la concentración de sustrato es de 40 µM Sol.: 5 x 10-7 M . Calcular la concentración de un inhibidor competitivo.

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