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Ao de las cumbres mundiales en el Per

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA


Facultad de Medicina Humana

PRACTICA N 7
PEROXIDASA

NOMBRE

: Villalobos sosa Isaac

CURSO

: Estructura, funcin celular y tisular I.

CICLO

: II ciclo

PROFESORES ENCARGADOS:
Dra. Violeta Morin Garrido
Mg. Carlos Holguin Mauricci.

Piura- Per
2010

ACTIVIDAD ENZIMATICA.

La peroxidasa es una enzima que cataliza la oxidacin de un amplio nmero de sustratos


orgnicos e inorgnicos, utilizando el poder oxidante del perxido de hidrogeno.
Es utilizada ampliamente en bioqumica clnica. Asi, los ensayos para la determinacin y
cuantificacin de metabolitos como la glucosa, acido rico, colesterol y los triglicridos en
fluidos biolgicos usan peroxidasas como enzima acoplada. Tambin, se utiliza en
inmunoensayos para al deteccin de virus de virus tan conocidos como el virus de
inmunodeficiencia humana (VIH) causante del SIDA o el herpesvirus.
La peroxidasa tambin se utiliza como biocatalizador para la generacin de productos de
inters biotecnolgico e industrial como las resinas fenolicas, adhesivas y protectores de
radiacin magnetica, colorantes alimentarios y componentes bioactivos de los detergentes.
OBJETIVOS:
Evidenciar la presencia de la enzima catalasa en los tejidos vivos que acelera la
descomposicin del perxido de hidrogeno (H2O2), en el agua y en el oxigeno
molecular. Esta actividad ocurre tanto en una celula animal como el hepatocito del
hgado, o en una celula vegetal de tomate y que podra resultar toxico para la
celula sino es desdoblado.
Determinar el efecto de tiempo y temperatura de la actividad enzimtica de la
amilasa contenida en la tialina de saliva, sobre el almidon.

MATERIALES:
Tomate (lycopersicon esculentum)
Trozo de hgado fresco
Trozo de hgado triturado
Papel filtro absorevente
Algodn
Gradillas
Almidon en solucin de 1%
Mortero
Gillette u hoja de bistur

6 tubos de prueba por mesa


Trozos de hgado hervido
H2O2 al 3%
Arena fina
Pinzas
Fsforo
Marcadores
Mechero o bao Maria

FUNDAMENTO TEORICO:
Definicin
Son catalizadores bilgicos proteicos. Su poder cataltico es mucho mayor que el de los
catalizadores inorgnicos.
Se han identificado unas 2000 enzimas diferentes
Las clulas pueden realizar reacciones qumicas a gran velocidad a temperatura
relativamente baja y un pH biolgico merced a las enzimas que una celula elabora
determinan las funciones biolgicas de la misma, ya que una celula solo puede llevar a
cabo de una reaccin qumica, a un ritmo razonable, se tiene una enzima especifica para
catalizar esa reaccin. Sin enzimas las reacciones serian lentas, que difcilmente se llevan
a cabo.
Enzimas: catalizadores biolgicos.
Las reacciones qumicas en sistemas biolgicos raramente ocurren en ausencia de unjn
catalizador. Estos catalizadores se denominan enzimas y son en su totalidad molculas de
naturaleza proteica
(aunque ha habido estudios acerca de enzimas de naturaleza
glucosidico).
Es razonable pensar en la necesidad que tienen los seres vivos de poseer estos
catalizadores, ya que las funciones vitales de cualquier clula serian imposibles de
mantener si las reacciones que ocurren en ella fueran extremadamente lentas.
Ademas de incrementar la velocidad las enzimas exhiben una elevada especificdad y en
algunos casos pueden ser reguladas por diferentes metabolitos, aumentando y otras veces
pueden ser reguladas por diferentes metabolitos, aumentando y otras veces
disminuyendo, de acuerdo a las necesidades del momento, su actividad.
Todas estas propiedades pueden ser cumplidas por molculas altamente complejas, que al
ser molculas organicas( macromolculas) comparten caractersticas con las protenas no
enzimticas y difieren de los catalizadores inorgnicos:
a) Son termohabiles y su actividad depende en ciertos casos del pH del medio.
b) El reconocimiento de la enzima con el reactivo a procesar (denominado sustrato )
es altamente especifico.
c) Tienen gran eficiencia, es decir, transforman un gran numero de molculas de
sustrato por unidad de tiempo.
d) Estan sujetas a un gran diversidad de controles celulares, genticos y alostericos.

Como todos los catalizadores las enzimas aceleran notablemente la velocidad de una
reaccin qumica y cumplen con las siguientes caractersticas.
1) Son efectivas en pequeas cantidades.
2) No sufren modificaciones qumicas irreversibles durante la catlisis. Es decir, que
luego de la reaccin enzimtica, las molculas de enzimas que reaccionaron son
indistinguibles de las que no lo han hecho,(la estructura de la molecula se mantiene,
al principio y al final de la reaccin, exactamente igual).
3) No afectan la posicin de equilibrio de la reaccin que cataliza.El estado inicial y
final de la reaccin es el mismo, solo que se llega al equilibrio mucho mas
rpidamente.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES
ENZIMATICAS.
Temperatura
Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reaccin hasta
cierta temperatura optima, ya que despus de aproximadamente 45C se comienza a
producir la desnaturalizacin trmica. Las enzimas de muchos mamferos tienen una
temperatura optima de 37C, por encima de esa temperatura comienza a inactivarse y se
destruyen. Sin embargo existen especies de bacterias y algaas que habitan en fuentes de
aguas termales y en el otro extremo ciertas bacterias articas tienen una temperatura
optima cercana a los 0C.
Efecto de pH sobre la actividad enzimtica.
El pH no afecta la actividad enzimtica directamente sino que modifica la concentracin
de protones. Los protones adems de alterar la estructura de la enzima y el substrato o
producto.en esos casos, la concentracin de protones afecta directamente la velocidad de
la reaccion.
Cualquier cambio de pH, sabiendo que las enzimas son protenas, puede alterar el carcter
ionico de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica, afectando asi a las
propiedades catalticas de una enzima.A pH alto o bajo se puede producir la
desnaturalizacin de la enzima y en consecuencia su inactivacin.
Enzimas.
Pepsina 1,5 (pH optimo)
Tripsina 7,7.
Catalasa 7,6.
Arginina 9,7.
Funerasa 7,8.
Ribonucleasa 7,8.

PROCEDIMIENTO
I.

Experimento N 01: Evidencia de la actividad de la catalasa sobre los


perxidos.
Experimento N01:efecto de un catalizador inorgnico.
Vierta una solucin de H2O2 en dos tubos de prueba. En uno de ellos deje caer una
pequea cantidad de H2O2 .Observe y anote la velocidad de la reaccin que tiene lugar en
cada tubo.
Observe y describa:
En un primer caso cuando agregaron agua y agua oxigenada en ambos casos no ocurri
ni se presencio evidencia de una reaccin qumica, en cambio cuando al agua oxigenada
se le agrego arena si ocurri una reaccin y se presencio con un burbujeo moderao.
II.
Experimento N02: Accion de una enzima.
En dos tubos limpios vierta 2ml de H2O2 , coloque en uno de los tubos un pedacito de
hgado del tamao aproximado de dos granos de arroz juntos; y en el otro, un pedacito de
papa del mismo tamao; los resultados son comparables a los de la prueba
anterior.Indique la velocidad de la reaccin, de acuerdo a la clave que aparece en la
primera parte del procedimiento.
Observe y describa:
En el caso de el tubo que se le agrego un pedacitos de hgado ocurri una reaccin muy
rpida y esta se noto con un burbujeo que rpidamente se difundi por todo el tubo de
ensayo esto es debido a que el hgado contiene abundantes enzimas de peroxidasa capaz
de metabolizar al agua oxigenada.
En cambio en el tubo que se le agrego pedacitos de papa tambin se noto un burbujeo
pero a comparacin con el del hgado este fue moderado esto es debido a que en la papa
existe una menor cantidad de enzimas peroxidasa.
Experimento N 03: Reusando la enzima.
Con la pipeta saque los dos ml del liquido al que le agrego hgado y vierta un ml en cada
uno de los tubos de prueba limpios.Corte el pedacito de hgado en partes iguales y luego
coloque una parte en cada tubo. En uno de los tubos aada un pedacito de hgado fresco y
en el otro un ml de H2O2 nuevo.Anote sus observaciones.
Observe y describa
En el caso 1 cuando se agrega igual cantidad de agua ya utilizada y le agregan un pedazo
de hgado nuevo existe reaccin pero esta es moderado en cambio en el caso 2 cuando se
le agrega mas agua oxigenada nueva sin utilizar la reaccin es mayor y muy rpida ya que
existe ms oxigeno que la enzima tiene que liberar

Experimento N04 : Efecto del tamao de las partculas.


Coloque un pedacito de hgado y otro de papa en dos tubos de prueba. Eche un poco de
arena en cada uno y agite la mezcla cuidadosamente con la bagueta para moler el hgado.
Aada dos ml de H2O2 a cada tubo. Los resultados son comparables con lo que usted
obtuvo usando un trocito de hgado y para enteros. Determine y anote la velocidad de la
reaccin.
Observe y describa
Como sabemos existe una mayor reaccin enzimtica cuando hay mayor superficie de
sustrato
En el caso de la mezcla de hgado + agua oxigenada + arena la reaccin es muy rpido
hasta tal que las burbujas salen del tubo de ensayo como medida de la reaccin que ha
ocurrido ya que se une el slice de la arena mas la peroxidasa y el agua oxigenada
En cambio el de la mezcla de agua oxigenada mas la arena y los pedacitos de papa estas
tambin reaccionan de manera rpida pero es menor que al anterior esto es como ya
mencionamos anteriormente la papa tienen menos enzimas que el hgado.
EXPERIMENTO N05: Efecto de la temperatura.
Evitando rozar las paredes del tubo de prueba, coloque una pequea cantidad de hgado
triturado y ponga el tubo dentro de la vasija con agua hirviendo dentro de los 5 primeros
minutos.Transcurrido este tiempo, aada un ml de H2O2 . Observe y anote los resultados.
Tome dos tubos de prueba y vierta un ml de H 2O2 a cada uno. Coloque uno de los tubos en
bao Maria (37C ) y el otro lado en hielo. Saque ambos tubos y coloque en cada uno de
ellos un pedacito de hgado.
Observe y describa
Primeramente en el tubo que estuvo a una temperatura ambiente (37) la reaccin ocurri
de una muy rpido dado que la peroxidasa es una enzima que est en nuestro organismo
humano y esta adecuado para que actu en esas condiciones
Luego en el tubo que colocaron a una temperatura de 100 no se observa reaccin dado
que la enzima se ha coagulado por lo tanto no hay reaccin.
En el tubo que se coloco a 0 aproximadamente, hay reaccin pero es menor la presencia
de burbujas(moderado)

III.
Experimento N06: EFECTO DE PH.
En cada uno de los tres tubos de de prueba bien limpios, coloque un pedacito de hgado
plenamente t4rituradpo, agregue a uno de ellos, un ml de H 2O2 destilada.El pH del otro, 3
ml de Na(OH) y al otro 3 ml de HCl a 0.1M.Vierta a cada tubo de H 2O2 y observe los
resultados.
Observe y describa
El hgado + agua oxigenada + HCl
En este caso no hay reaccin dado que el acido ha desnaturalizado la protena y como la
enzima es una protena ya no reacciona.
El hgado +agua oxigenada +NaOH
En esta situacin ocurre una reaccin pero es moderada dado que la enzima tiene mas
afinidad por las bases que los cidos.
El hgado +agua oxigenada + agua destilada
En esta situacin se observa una reaccin violenta hay mayor burbujeo a comparacin de
los cidos y bases dado que como el PH del agua destilada es neutro entonces no va ha
haber un aspecto inhibitorio de la enzima, al igual que como actua sobre el organismo
humano.

RESULTADOS:

SUSTANCIA 01 02 01
2ml de H2O2 2ml 2ml 2ml
Arena
Perxido de
H2O2
Trocitos de
hgado
Trocitos de
papa
Hgado
fresco
Perxido de
H2O2
Hgado
fresco
triturado
Papa fresca
triturada
Velocidad de
reaccin

Experimento01

02
2ml

01

02

1
trozo

1
trozo

01

02

0c 37c

100c

HCl

ml

neutro
ml

2
gr
++

++

+++

gr

ml
2
trozos
2
trozos
1
trozo
1 ml
2 gr

++++

Experimento2

++

++++ +++

Experimento 3

+++
+

Experimento 4

+++
+

Experimento 5

Experimento 6

CUESTIONARIO:
1. Cul es el beneficio celular de la presencia de la catalasa en las clulas
vivas?
La catalasa es una enzima que acelera las reacciones qumicas en el organismo es
muy importante dado que su funcin es de proteger a las clulas del efecto toxico
del perxido de hidrogeno producida en las diferentes reacciones redox
producidas en la clula
2. para qu sirven las enzimas?
Las enzimas sirven en que Contribuyen al desdoblamiento de las molculas de los
principios nutritivos (protenas, grasa y carbohidratos) en otras ms pequeas
durante la digestin de los alimentos. Asimismo, facilitan su paso a la sangre a
travs de la pared intestinal; catalizan la formacin de molculas grande y
complejas con el fin de producir los constituyentes celulares; y favorecen el
almacenamiento y gasto de energa. Las enzimas, tambin actan en las funciones
de la reproduccin, procesos de la respiracin y en la visin, y todos los dems
mecanismos orgnicos.
3. Comparando los resultados obtenidos, Cmo interpreta la diferencia de la
actividad enzimtica en cada tubo; Indique la razn de ello? Concluya de
manera general
La diferencia radica que en cada experimento que se realiza en cada tubo
participan sustancias diferentes , como tambin cantidades diferentes , adems
que unas en diferentes situaciones de temperatura , de PH , entre otras es decir la
reaccin de la actividad enzimtica depende de muchos factores como acabamos
de mencionar, estos factores modifican la velocidad de reaccin , unos generan
efectos inhibitorios y otros hacern acelerar la reaccin
Por ejemplo a temperaturas mayores que la normal generan que las enzimas se
desnaturalizasen y por lo tanto las enzimas llegan a coagularse y ya no reaccionan

4. Cmo verificar que todos los tejidos vivos poseen catalasa?


La enzima catalasa es una enzima antioxidante.

En todos los organismos vivos estn formadas por clulas y estas para su
existencia tienen que realizar su respectiva metabolizacin y en la metabolizacin
de las clulas se genera perxido de agua y esto es toxico para la clula. Entonces
la clula tiene que tener una enzima que descomponga dicha sustancia y es ah
donde acta la peroxidasa generando agua y oxigeno a la clula que es
indispensable para su metabolizacin y supervivencia.

5. Cules son los factores que afecta la velocidad enzimtica?


El tamao de las partculas es decir aquellos que tienen ms superficie va haber
mayor actividad enzimtica y por lo tanto una mayor velocidad
La concentracin de la enzima y sustrato a mayor concentracin de enzima
habr un incremento de la accin enzimtica
PH las enzimas son protenas formadas por grupos aminos y carboxilo y
reaccionaran en mayor o menor proporcin dependiendo de la acidez o basicidad
del sustrato
La temperatura modifica el efecto de la enzima llegando ala conclusin que en
altas temperaturas coagulan las enzimas volvindolas inactivas
6. Explique el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica.
Un aumento en la temperatura provoca un aumento de la velocidad de reaccin
hasta cierta temperatura ptima, ya que despus de aproximadamente 45 0 C se
comienza a producir la desnaturalizacin trmica. Cuando mayor es la
temperatura, mayor es la velocidad de reaccin. La velocidad de reaccin aumenta
debido a que hay ms molculas con la energa suficiente para entrar en el estado
de transicin. Las velocidades de las reacciones catalizadas por enzimas aumentan
tambin al incrementarse la temperatura. Sin embargo, las enzimas son protenas
que se desnaturalizas a temperaturas elevadas. Cada enzima tiene una temperatura
ptima a la que acta con su mxima eficacia. Debido a que las enzimas son
protenas, los valores de la temperatura ptima dependen del pH y de la fuerza
inica. Si la temperatura se incrementa ms all de la temperatura ptima, la
actividad enzimtica desciende bruscamente. La temperatura ptima de una
enzima normalmente est cerca de la temperatura normal del organismo del que se
procede

7. Qu es un sistema enzimtico?

Es un sistema complejo que participan en la hora de actuar la actividad enzimtica


y est formada por:
Sustrato este es cualquier compuesto qumico

Sustancia, compuesto qumico que sufre la reaccin qumica.


Aquellas sustancias en las que acta la enzima.
Cualquier origen qumico.
La enzima esta siempre acta sobre un sustrato para producir catlisis y
su resultado es un producto.
Coenzimas; provienen de las vitaminas (forma activa de las vitaminas),
tienen peso molecular bajo. Biomoleculas no proteicas que favorece y/o
potencial izan la accin de una enzima.
Sustancias activadoras: temperatura, electrolitos y pH.

8. Qu es una coenzima, cofactor o grupo prosttico?


Coenzima, cofactor o grupo prosttico, son cada uno de los componentes
no proteicos, que actan coordinadamente con una enzima para catalizar
una reaccin.
Las coenzimas son pequeas molculas orgnicas que transportan grupos
qumicos de una enzima a otra. Algunos de estos compuestos, como la riboflavina,
la tiamina y el cido flico son vitaminas
Los cofactores son molculas no proteicas que pueden ser compuestos
inorgnicos, como los iones metlicos y los complejos ferrosulfurosos, o
compuestos orgnicos, como la flavina o el grupo hemo. Los cofactores orgnicos
pueden ser a su vez grupos prostticos, que se unen fuertemente a la enzima, o
coenzimas, que son liberados del sitio activo de la enzima durante la reaccin. Las
coenzimas incluyen compuestos como el NADH, el NADPH y el adenosn
trifosfato
Un grupo prosttico es el componente no aminoacdico que forma parte de la
estructura de algunas protenas y que se halla fuertemente unido al resto de la
molcula
9. Con referencia a la actividad enzimtica, investigue bibliogrficamente, Qu
significan los cambios de reaccin?
El estudio cuantitativo de la catlisis enzimtica, que se denomina cintica
enzimtica, proporciona informacin sobre las velocidades de reaccin. Los
estudios cinticos miden tambin la afinidad de las enzimas por los sustratos y los
inhibidores, y proporcionan conocimientos sobre los mecanismos de reaccin. La
cintica enzimtica tiene varias aplicaciones prcticas, que incluyen una mejor

comprensin de las fuerzas que regulan las rutas metablicas y el diseo de


tratamientos ms adecuados.
La velocidad de la reaccin anterior es proporcional a la frecuencia con la que las
molculas reaccionantes forman el producto.
Otro trmino que es til para describir una reaccin es el orden de la reaccin. El
orden se determina de forma emprica, es decir, mediante experimentacin. Se
define como la s8uma de los exponentes de los de concentracin en la expresin
de velocidad. La determinacin del orden de una reaccin permite a un
experimentador obtener determinadas conclusiones con relacin al mecanismo de
la reaccin. Se dice que una reaccin sigue una cintica de primer orden cuando la
velocidad depende de la primera potencia de la concentracin de un nico
reactante y sugiere que el paso limitante de la velocidad es una reaccin
unimolecular
La actividad especfica de una enzima, una magnitud que alcanza para controlar la
purificacin de la enzima, se define como el nmero de unidades internacionales
por miligramo de protena.
La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima
(Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los
productos o la desaparicin de los reactivos.
Aqu tenemos una ecuacin de cmo es las reacciones enzimticas y la presencia
de sustratos en la participacin de dichas reacciones.

BIBLIOGRAFIA
http://es.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_enzim%C3%A1tica
BIBLIOTECA DE CONSULTA MICROSOFT ENCARTA 2009.
Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos
http://es.wikipedia.org/wiki/Grupos_prost%C3%A9ticos
http://www.angelfire.com/ult/bioquimicae07/intentocucs.html

Exposiciones y explicaciones en clase