Cinética química

Clasificación de la reacciones químicas

Número de molec. que reaccionan: Cinética:

• monomoleculares • orden 0
• bimoleculares • primer orden
• trimoleculares • segundo orden
•… • tercer orden
1er orden: la velocidad es
proporcional a la concentración
de reactivo

AB [A]0

[A]
[A]0
2

dA
v  k * [S ] t t
dt 2
 [ A] 1
log  k *t
[ A0 ] 2.303

pend = -k
ln [A]

t
2do orden: la velocidad es proporcional al producto de
la concentración de 2 reactivos (o a la segunda
potencia de uno de ellos)

A+BP

 k AB 
[dA] [dB ] [dP ] [dA]
v   
[dt ] [dt ] [dt ] [dt ]

2AP

 k A
[dA]

2

[dt ]
 Las reacciones químicas deben salvar barreras energéticas
para transcurrir. Los catalizadores aceleran la velocidad de rx.

Energía

Ea

E´a
A

G
B

Coordenada de reacción
Equilibrio químico

A+BC+D

ΔG  G  RTln
0 CD
A B
K eq 
CD
A B
En el equilibrio, cuando G = 0

G° = -2,3 RT log Keq

 Si

A+BC+D

Entonces en el equilibrio

[C]*[D] > [A][B]

G° = -2,3 RT log Keq < 0

Si A + B  C + D

Entonces en el equil. [C]*[D] < [A][B]

y G° > 0
Enzimas

Son catalizadores biológicos

Permiten que ocurran reacciones químicas dentro

de los organismos

Son en su mayoría proteínas pero también hay

enzimas de ARN

No afectan G° ni la cte. de equilibrio

Son altamente específicas

Se denominan por la reacción catalizada más el

sufijo asa
 Línea del tiempo en el estudio de
enzimas
• Fines siglo 17, ppios del 18: digestion de carne por jugo gástrico,
digestión de almidón a azúcares por saliva
• 1858: Pasteur habla de la fermentación como un principio vital
• 1877: Kühne acuña el término enzima (de ενζυμον, “en la levadura”)
• 1897: Buchner* publica su trabajo sobre enzimas en extractos de
levaduras muertas (zimasa).
• 1912. Michaelis y Menten describen la ecuación de velocidad para
reacciones catalizadas enzimáticamente
• 1926. Sumner* muestra que la ureasa es una proteína y la cristaliza
• 1930: Northrop* y Stanley* confirman esto con sus trabajos en
pepsina, tripsina y quimotripsina
• 1965. Phillips y col. cristalizan y resuelven la estructura de la lisozima
por difracción de rayos X (rel. estr. fx)
• 1982. Cech* y Altman* descubren las ribozimas.

* Recibieron el Premio Nobel por sus trabajos

Aplicaciones de las enzimas

• Alimentación:
- amilasas (prod. de azúcares de almidón)
- fermentaciones
- proteasas: comida infantil, reducción de
turbidez en cervezas
- celulasas y pectinasas (clarificantes)
- renina: prod. de queso
Aplicaciones de las enzimas

• Industria del papel: amilasas, celulasas y

ligninasas
• Biocombustibles: ligninasas, celulasas, lipasas
• Jabones de lavar: proteasas, amilasas, lipasas
• Biología molecular: enz. de restricción, ligasas,
etc.
• Múltiples reacciones en la industria
farmacéutica.
¿Cómo se nombra a las ez?: Clasificación EC

consta de 4 elementos, por ejemplo

2.7.1.11

Primer elemento: clase

1.oxidorreductasas
2.transferasas
3.hidrolasas
4.liasas
5.isomerasas
6.ligasas
 Segundo elemento: subclase

Tercer elemento: sub subclase

Cuarto elemento: n° de serie dentro de la

sub subclase
 2.7.1.56
Fosfofructokinasa

Fru6P + ATP  Fru1,6bisP + ADP

2.7.1.90

Fru6P + PPi  Fru1,6bisP + Pi

Fosfofructokinasa dep. de PPi o

Fructosa 6P, pirofosfato 1-fosfo transferasa
 1.1.1.40
Enzima málica

malato + NADP +  piruvato + CO2 + NADPH

1.1.1.39
Enzima málica
malato + NAD+  piruvato + CO2 + NADH

malato deshidrogenasa (oxaloacetato-

decarboxilante) (NADP+)
Las enzimas usan otros compuestos
no proteicos durante la catálisis

Cofactores: compuesto no proteico necesario para la

actividad de una enzima

Cofactores metálicos: metales (Mg2+, Ca2+, Na+, K+,

etc.)
Coenzimas: moléculas orgánicas que sólo se unen
durante la catálisis (NADH, Glut)

Grupos prostéticos: moléculas orgánicas unidas en

forma fija, covalente o no

Apoenzima: enzima – gr. Prostético

Holoenzima: enzima + gr. prostético
 Citocromo P450:
una hemoproteína

Grupo prostético: hemo

 Cofactores: Mg2+ y K+

Piruvato kinasa
¿Como se mide la cantidad de enzima?

Actividad enzimática

Unidad internacional (UI o U)

Cantidad de ez. que causa la

transformación de 1 µmol de
sustrato por minuto, en condiciones
óptimas de medida
UI: µmol/min

Act. Específica: µmol/min*mg prot

N° de recambio o act. molar: s-1

EC: katal o catal

Unidades: mol * s-1, mol*s-1*kg-1
¿Cómo se puede seguir una reacción
catalizada enzimáticamente?

Medida directa A B
Se puede medir abs, rotación óptica, luminiscencia, fluorescencia,
producción o consumo de CO2, O2, radiactividad, etc.

A  B
Mediante reacción
acoplada

B+ C  D
B + NADH  C + NAD+
Piruvato kinasa
Ejemplos
PEP + ADP  Piruvato + ATP
Piruvato + NADH  Lactato + NAD+
Piruvato + ADP  PEP + ATP
luciferina + ATP  luciferil adenilato + PPi
luciferil adenilato + O2  oxiluciferina + AMP + luz

Glucosa oxidasa

Glucosa + O2 + H2O  ác. glucónico + H2O2

2 H2O2 + 4-aminofenazona + 4-OH benzoato  quinonimina
(roja)
Cinética enzimática
Victor Henri
(1872-1940)

dx K *  * (a  x )

dt 1  m * (a  x )  n * x

const * [S]
v
[S] [P]
1 
K1 K 2
Cinética enzimática

Leonor Michaelis – Maud Menten

(1879-1949) - (1879-1960)

Si bien ambos desarrollaron prolíficas carreras científicas luego de su trabajo juntos, el

progreso fue muy lento debido a cuestiones religiosas (LM) y de género (MM).
 (Ehrlich:
tinción Gram,
Año L. Michaelis 1er trat. sífilis,
1875 Nace en Berlín trat. difteria
con antisuero,
1893 Graduación premio Nobel
1896 Médico 1908)
1897 Dr. en Medicina
98-99 Lab. Ehrlich
00-04 Hosp. Berlín
1903 docente U. de B. Otras contribuciones:
Janus green stain para
1905-08 Dir. de Lab. de Bacteriol., mitocondrias, papel de los
Profesor Extraord. radicales libres en
1914 Paper contra Abderhalden oxidaciones, disol. de la
(inicio del fin de su carrera en Alemania) queratina por ác. glicólico
1922 Japón (Nagoya)
1926 USA (John Hopkins)
1929 Rockefeller IMR
1941 Retiro
Año M. Menten Otras contribuciones:
1904 B.A. Estudio de los efectos
hiperglucemientes de la
1907 Medical Dr. (U of Toronto)
Salmonella; en 1944 publica
1911 Ph.D. un paper sobre
1911-1912 Rockefeller IMR, Western electroforesis; avances en
histoquímica (condensación
Reserve Univ.
azo). Además fue pintora,
1912-13 Alemania (Con L. Michaelis) astrónoma aficionada y
1915 St. Louis (cáncer) música.

1916 Ph.D. Química en Chicago

1918-50 U. Of Pittsburgh
1948 Profesor (2 años antes de
jubilarse)
 Sacarosa  Glc + Fru
+66.5° -22°

La actividad se medía por el cambio en la rotación óptica, que es

proporcional al cambio en la concentración de sacarosa
(grados/minuto)
 4000

3500

3000

Actividad
2500

2000

1500

1000

500
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
[Sacarosa] (mM)

La actividad variaba de forma hiperbólica en función de la concentración de sustrato, algo conocido

para entonces.
 A

B
Modelo de M y M:
Aproximación al equilibrio

SP

k+1 k+2 k+3

E+S ES EP E+P (1)
k-1 k-2 k-3

k+1 kp
E+S ES  E + P (2)
k-1
 k+1 kp
E+S ES  E + P (2)
k-1

Si k+1 y k-1 >> kp

Se tienen condiciones de equilibrio
químico

v = kp [ES] (3)

[E]t = [E] + [ES] (4)

 v k p ES

Et E  ES (5)

Ks 
ES k  1
 ES 
S
E
v+1 = k+1 [E][S]
y
ES k  1
(6)
Ks v-1 = k-1 [ES]

kp
S E
v Ks

Et E  S E
(7)

Ks
 S
v
 Ks
kp Et 1 S
(8)

Ks

S
kp [E]t = Vmax v
 Ks
Vmax 1 S
(9)

Ks

v

S (10)
Vmax Ks  S
Ecuación de Michaelis Menten

v
S * Vmax
Ks  S
Aproximación al estado estacionario (Briggs y Haldane)

k+1 kp
E+S ES  E + P (2)
k-1

Si k+1 y k-1 son de aprox. la misma

magnitud que kp entonces NO se
tienen condiciones de equilibrio
químico
 k+1 kp
E+S ES  E + P (2)
k-1

v = kp [ES] (3)

v k p ES

Et E  ES (5)
Reacción de formación

k+1
E + S  ES (12)

Reacciones de descomposición
k-1
ES  E + S (13)

y
kp
ES  E + P (14)
vf = k+1 [E][S] (15)
vd = k-1 [ES] + kp [ES] (16)
= (k-1 + kp)[ES]

ES
0
t

k+1 [E][S] = (k-1 + kp)[ES] (17)

ES  k  1[E][S]
(18)
(k  1  kp)
 1 k 1 k  1  kp
 Km  (19)
Km k  1  kp k 1

ES  [E][S]
Km
S E
v k p ES v
kp
Ks
 
Et E  S E
(20)
Et E  ES (5)

Ks
v
S * Vmax
Km  S
 4000

Vmax
3500

3000

v
Actividad

2500

2000
Vmax/2
1500

1000

500
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500

Km1 Km2
[S]
 Determinación de Km y VMAX
Transformación de Lineweaver y Burke

1 S  Km 1 Km 1
   *
v Vmax * S Vmax Vmax S
 1/v

1/Vmax
pendiente: Km/Vmax

1/[S]
-1/Km
Transformación de Eadie-Hofstee

v
v  Km  Vmax
v S
Vmax
pendiente: -Km

Vmax/Km

v/[S]
Transformación de Woolf y Hanes

S  1
S  Km [S]/v
v Vmax Vmax

Km/Vmax
-Km

[S]
Sitio activo

Modelo de llave y cerradura

S de Fischer

Enzima
Enzima
Modelo de ajuste inducido de Koshland
Especificidad y eficiencia catalítica: el caso de la PEP Pasa

Sustrato Vmax Km Constante de

(U/mg) (mM) especificidad
(Vmax/Km)
PEP 380 0.05 7600
pNPP 1193 0.57 2093
ATP 452 0.50 904
ADP 714 0.74 964
Glc1P 304 0.24 1267
6PGluconato 452 0.59 766
Glc6P 80 2.01 40
Especificidad: los residuos del sitio activo
determinan la eficiencia catalítica

Enzima/Sustrato Vmax Km Constante de

(U/mg) (mM) especificidad
(Vmax/Km)
Metilmalonato
WT 2.44 0.12 21
T207S 2.13 0.06 35.5
M306I 2.05 0.44 4.7
Etilmalonato
WT 0.61 1.12 0.54
T207S 6.11 0.14 43.6
M306I 4.91 0.17 29