Q.F.B. Anaí Arianna Mendoza López. UA Bioquímica.

Problemario 3. Cinética Enzimática

1. La enzima ureasa aumenta la velocidad de hidrólisis de la urea en a pH 8 y 20°C en un factor de 10 14. Si una cantidad
dada de ureasa puede hidrolizar completamente una cantidad dada de urea en 5 minutos a pH 8 y 20°C, ¿cuánto tardará
en hidrolizarse esta misma cantidad de urea en las mismas condiciones, pero en ausencia de ureasa? Suponga que ambas
reacciones tienen lugar en sistemas estériles de modo que las bacterias no pueden atacar la urea.

2. Subraye cuál de los efectos mencionados sería provocado por una enzima que catalizara la reacción simple:

a) Descenso de Keq b) aumento de k1 c) Aumento de Keq d) aumento de ΔG‡ e) descenso de ΔG‡ f) ΔG° más negativa
g) aumento de k2

3. Calcule la concentración de sustrato necesaria para observar un 75% de la velocidad máxima de una reacción enzimática
con una constante de afinidad, KM = 3 µM. (Ecuación de Michaelis Menten)

4. En un experimento se midió la tasa inicial de una reacción enzimática, v, a varias concentraciones de substrato [S]. La
concentración de la enzima es 10 nM. Se graficó 1/v versus 1/[S] y se observó una línea recta en la cual el intercepto-y es
0.005 nM-1 seg y la pendiente es 200 seg. ¿Cuál es el valor de KM y el de Vmax para esta reacción enzimática? ¿Cuál es el
valor de kcat para esta enzima? ¿Determine el coeficiente de especificidad? 30 µM de un inhibidor [I], es adicionado y se
observó que el intercepto y es 0.0065 nM-1 seg y la pendiente es 260 seg. ¿Qué tipo de inhibición se observó? ¿Cuál es el
valor de Ki para el inhibidor con esta enzima?

5. Analizando la reacción catalizada por 2 µg de una enzima de cinética mikaeliana (PM 20 000) en presencia o ausencia
de un inhibidor (1 mM), se obtuvieron los resultados siguientes:

a) Calcule los parámetros cinéticos en ausencia y presencia del inhibidor

b) Explique el tipo de inhibición que ejerce el inhibidor y determine el valor de KI
c) Indique cómo afectaría a los parámetros cinéticos cada una de las siguientes modificaciones: 1) un aumento de la
concentración del inhibidor, 2) un aumento de la concentración de sustrato, 3) un aumento de la concentración de enzima.
Razone las respuestas.

6. Se ha estudiado el efecto de diversos inhibidores sobre una enzima implicada en la replicación del virus de la gripe A,
obteniéndose los siguientes resultados:

a) Calcule los valores de Vmax y KM de la enzima

b) Indique el tipo de inhibición producido por cada inhibidor, indicando cómo se modifican en cada caso los parámetros
cinéticos y el valor de KI
c) ¿Qué inhibidor seleccionaría para combatir al virus? ¿Por qué?
d) ¿Cómo influiría un aumento de la concentración de sustrato en los efectos de los inhibidores?

7. Considere a la enzima Invertasa, que cataliza la hidrólisis de Sacarosa a fructosa y glucosa. Esta enzima posee una KM
para sacarosa de 0.5 mM y una constante catalítica de 175 min. Si se mide su actividad en presencia de 0.25 mM de
sacarosa con 25 pmol de enzima en la cubeta:
a) ¿Qué velocidad de catálisis se observará? ¿Qué fracción representa esto de la Vmax que se podría calcular en esta
reacción si se variase la cantidad de sacarosa?
b) ¿Cuánto sustrato habría que añadir para que la velocidad observada alcanzase 0.95% de la V max? ¿Qué importancia
podría tener esto para la posible aplicación industrial de la enzima?
Explique sus respuestas.

8, 9 y 10. Realizar los problemas en página 262 del libro Bioquímica de Leningher, número: 10, 15 y 18.

Todas las gráficas necesarias se pueden realizar con ayuda de Excel.