Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y

Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología

Seminario I:
ENZIMOLOGÍA
Profesor Coordinador: Nelson Carvajal

1.- Relacione la energía de activación con la velocidad de una reacción

química
Para que una reacción se produzca espontáneamente es necesario que el cambio de
energía libre sea negativo, es decir, (∆G) negativo.
De la misma manera si una reacción tiene una alta energía libre, será más dificultoso que la
reacción se produzca y por ende llegar a los productos.
La cantidad de energía necesaria para alcanzar el nivel de energía libre del sistema
y por lo tanto para producir la reacción se denomina energía de activación (nivel mínimo de
energía para reaccionar).
Se desprende de lo anterior que aquella reacción en que
la energía libre sea menor y por lo tanto su energía de activación
también lo sea, se producirá de alguna manera “mas
espontáneamente” que una que tenga una energía de activación
mayor, de la misma manera una reacción con una energía libre y
una energía de activación alta, será bastante difícil llevarla a
cabo a menos que se pueda entregar energía por otra vía, o se
pueda disminuir la energía de activación.

Energía de activación: energía requerida para alcanzar

el punto en que la estabilidad de los sustratos sea vencida
y sea posible llevar a cabo una reacción química
completamente, en palabras simples la energía
requerida para pasar la barrera que nos impone el
equilibrio energético.

La energía de activación se relaciona íntimamente con la velocidad de reacción al determinar

el punto en que los reactantes pasan a productos. Mientras mayor sea la energía de activación,
menor será la velocidad de reacción, pues implicará más tiempo pasar la barrera de transformación
de reactantes a productos.

2.-En base al concepto de energía de activación, discuta el efecto del calor

y los catalizadores en la velocidad de una reacción química. Porque los
sistemas biológicos emplean catalizadores.
Las moléculas en los organismos, antes de reaccionar y formar
sus productos se encuentran en un estado de relativa estabilidad, y
no pueden pasar a un estado de menor energía sin adicionarles una
cantidad de energía, esta es la energía de activación, un empuje
sobre una barrera energética, después de este “empuje” se produce
la reacción que llevara a la formación de los productos.

Para las moléculas en solución acuosa dentro de la célula, el

empuje se logra gracias a las colisiones entre las moléculas, colisiones
que se vuelven mas violentas a medida que se aumenta la
temperatura.

Ahora, en los organismos no se puede usar solamente la temperatura para lograr el “empuje” de la
energía de activación, porque además de esto ser un gasto energético enorme, un aumento excesivo
en la temperatura aumentaría de en gran medida el grado de desorden dentro del organismo, y así

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arruinando el orden en el que se logra mantener a las moléculas gracias a la energía que se obtiene
del catabolismo. Sumándole a esto, que los sistemas biológicos, en general, son isotérmicos esto
quiere decir que todas sus partes se encuentran a la amisma temperatura. Por lo tanto un aumento
en la Tª, para lograr una velocidad de reacción más rápida significaría provocar daños en el
organismo.
Por lo anteriormente expuesto, se deduce que los sistemas biológicos utilizan otro sistema para
aumentar la velocidad de una reacción química vital. Esto es en base a catalizadores.

Un catalizador reduce la barrera de energía para una reacción con lo que aumenta la
fracción de moléculas que tienen la energía suficiente para alcanzar el estado de
transición y hacer que las reacciones vayan más rápido en ambas direcciones.
La mayor parte de los catalizadores biológicos son proteínas que se denominan enzimas. Los
sistemas biológicos utilizan enzimas para llevar reacciones por otro camino que tiene menor energía
d activación, sin afectar el equilibrio de la reacción.

3.- Establezca una clasificación de las enzimas, en base al tipo de reacción

catalizada
En un comienzo, la clasificación y denominación de enzimas se realizó con nombres propios,
pero al ir pasando los años, ya no fue posible conocer todas las enzimas por sus nombres comunes
(debido a que se encontró que un sustrato podía ser catalizado por más de una enzima) y por lo
tanto se comenzaron a clasificar respecto al tipo de reacción que catalizan.

Clasificación Tipo de Reacción que catalizan

ÓxidoReductasa Participan en reacciones de oxido reducción. Ej. : C. Transp. Electrones.
s
Tranferasas Participan en reacciones en que se deben transferir grupos funcionales.
Hidrolasas Hidrólisis de grupos funcionales
Liasas Agrega grupos a los doble enlaces saturando la cadena respectiva o remueve
grupos formando doble enlaces
Isomerasas Reacciones de racemizacion, una que es inespecífica para configuraciones
absolutas ( L o D )
Ligazas Unión de dos o mas sustratos, utilizando ATP

4.- Discuta y defina las características más sobresalientes de las enzimas

Las enzimas, son en su mayoría proteínas, esto les confiere características especiales como
carga eléctrica, estructura terciaria y cuaternaria especifica, solubilidad especial,
su síntesis esta relacionada directamente con la información del ADN, veremos que
muchas de estas características se aplican de formas particulares a las enzimas.
Las enzimas son catalizadores biológicos por lo que su característica principal es que
catalizan reacciones dentro del organismo, la manera en que lo hacen es utilizando vías
alternativas de las reacciones para lograr disminuir la energía de activación
Las enzimas son altamente especificas, la especificidad es por sobre todo con el tipo de
reacción que catalizan y no tanto con el sustrato. Esta especificidad esta dada sobretodo por
características físicas estructurales mas que únicamente químicas, que se van a configurar en
el sitio activo de una enzima
Las enzimas son eficaces, ya que aun en pequeñas concentraciones pueden catalizar
concentraciones de hasta mil veces más sustrato, además de que transforman un gran
numero de moléculas de sustrato en poco tiempo.
Son reutilizables, característica fundamental, ya que si no tuvieran esa cualidad, sería
energéticamente poco funcional para la célula. Esta característica puede ser observada
fácilmente en mediciones de concentraciones enzimáticas antes y después de una reacción
catalizada biológicamente.

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Son regulables. Es posible regular las velocidades de los procesos metabólicos mediante
cambios en la eficacia catalítica de las enzimas específicas.
No alteran el equilibrio de las reacciones, solo alteran la velocidad en que este equilibrio
se produce
Su funcionamiento óptimo esta determinado por un pH y temperaturas determinadas.

5.-En un modelo del sitio activo de una enzima, analice la unión del
sustrato y su posterior transformación en los productos de la reacción.
Haga el mismo análisis para una reacción con dos sustratos.

Las enzimas se unen temporalmente a uno o más reactantes de la reacción que catalizan.
En esta unión disminuyen la energía de activación necesaria para la reacción .
Para esta unión enzima-sustrato, los enlaces formados son no covalentes:

• Puentes Hidrogeno
• Interacciones Iónicas
• Interacciones Hidrofobicas

Ahora, para que una reacción química tenga lugar, las moléculas de los reactantes deben chocar
con una energía y una orientación adecuadas. La actuación del enzima permite que los reactantes
(sustratos) se unan a su sitio activo con una orientación óptima para que la reacción se produzca y
modifica las propiedades químicas del sustrato unido a su sitio activo, debilitando los enlaces
existentes y facilitando la formación de otros nuevos

Cuando existen dos sustratos va existir un sitio activo para cada uno en la enzima y reaccionaran
de manera independiente, o los dos sustratos ocuparán el mismo sitio activo y competirán por éste.

6.- Discuta el concepto de complementariedad enzima-sustrato.

Durante una reacción química catalizada por enzimas, la interacción principal se produce
entre el sustrato y una porción altamente especifica de la enzima denominada “sitio activo”, esta
interacción se produce para alcanzar un estado denominado “complejo enzima sustrato o ES” , la
afinidad entre una enzima determinada y su sustrato esta dirigida por una complementariedad
mayoritariamente física, es decir, el sustrato tiene una distribución espacial que es afín con la forma
del sitio activo ( esta forma del sitio esta previamente determinada por el correcto plegamiento de la
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proteína y por su estructura ya sea terciaria o cuaternaria ), la interacción se lleva a cabo mediante
una serie de enlaces débiles (no covalentes) que se producen en los aminoácidos que forman parte
de la estructura del sitio activo y las moléculas de sustrato que calzan de forma precisa en esos
aminoácidos, es por ello también que las enzimas son específicas para determinadas
configuraciones espaciales, los sitios activos tienen además determinadas cargas eléctricas por los
aminoácidos que los forman por lo que las interacciones iónicas también toman importancia.
Dado que la complementariedad está dada casi absolutamente por el sitio activo
nombraremos algunas características de él:

 Corresponde a una porción relativamente pequeña de la enzima

 Es de forma tridimensional y modificable
 Tiene forma de surco o hendidura
 La especificidad depende de la disposición de los esqueletos aminoaciditos y de la estructura
de los átomos del sustrato.
 Sus componentes básicos son los residuos encargados de la unión de sustratos (residuos
catalíticos) y de la transformación de los sustratos en los productos de la reacción (residuos
catalíticos).

La función del sitio activo y, por lo tanto, la actividad catalítica de la enzima, depende de la
posición y tipo de grupos laterales de los aminoácidos que conforman el sitio. En él, los reactantes se
mantienen en una orientación tal que la reacción puede ocurrir por una vía alternativa, con una
menor energía de activación. La energía del estado de transición disminuye porque este interacciona
favorablemente con los residuos del sitio activo, mediante enlaces de hidrógeno, uniones
electroestáticas, interacciones hidrofóbicas. En consecuencia, la conformación global de la molécula
de proteína es crítica para su funcionamiento eficiente como enzima.

7.-Discuta los modelos de la llave-cerradura y encaje inducido en la

interaccion enzima sustrato
El modelo llave-cerradura supone que la estructura del sustrato y la del
centro activo son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en
una cerradura. Este modelo es válido en muchos casos, pero no es siempre
correcto.

En algunos casos, el centro activo

adopta la conformación idónea sólo en
presencia del sustrato. La unión del sustrato al
centro activo del enzima desencadena un
cambio conformacional que da lugar a la
formación del producto. Este es el modelo del
ajuste inducido. Sería algo así como un
cascanueces, que se adapta al contorno de la
nuez.

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8.- Analice el progreso de una reacción enzimático en el tiempo y discuta

el concepto de velocidad inicial.

En el inicio de una reacción catalizada por enzimas, se

observa que el aumento de la velocidad de la reacción es
directamente proporcional a la concentración de sustrato,
esto fundamentalmente porque la mayoría de las enzimas y sus
sitios activos están libres y puede realizar la acción catalítica a
todas las moléculas de sustrato que son ingresadas al sistema. A
medida que la concentración de sustrato se ve aumentada, la
velocidad de la reacción comienza a aumentar de manera
menos significativa, tomando la curva una forma de
hipérbola, la explicación a esto es que, existen menos
moléculas de enzimas libres y por tanto es mas difícil que una
molécula de sustrato se una a una enzima para formar el
complejo ES. Por último, en las cercanías de la velocidad
máxima representada por la línea punteada, la variación de la velocidad a través del tiempo es
casi imperceptible y se vuelve INDEPENDIENTE DE LA CONCETRACION DE SUSTRATO, ya
que se produce porque todas o casi todas las enzimas del sistema están formando parte de un
complejo ES y aunque haya un aumento de sustrato, el aumento real en la formación de productos
es casi 0.
La velocidad de una reacción se mide por la cantidad de producto que es producido o
al revés por la desaparición del sustrato, la Vi (velocidad inicial) se utiliza porque es una medida
real de la capacidad de las enzimas de transformar sustrato en productos, sin ser saturadas ni verse
afectadas por variaciones del equilibrio entre sustrato y producto. La concentración de productos es
tan poca, que no alcanza a ser suficiente para revertir la situación). Está representada en el inicio de
la reacción catalizada, cuando el aumento de la velocidad de reacción es directamente proporcional
a la concentración del sustrato.

9.-Analice el efecto de la concentración de sustrato y de la enzima en la

velocidad de una reacción enzimática. Aplique la ecuación de Michaelis-
Menten para los efectos del sustrato e indique los métodos gráficos que
puede emplear para calcular los parámetros cinéticos contemplados en
esta ecuación.
La ecuación de Michaelis Menten tiene la misma forma de una hipérbola rectangular:

Ec. De Michaelis Menten

V = V0 máx [S]
Km + [S]

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Concentración de sustrato versus Velocidad de la

reacción.

Las reacciones enzimáticas se caracterizan porque aunque se aumente la concentración

de sustrato la velocidad no aumenta linealmente, aparece un efecto de saturación. La
saturación se debe a que todos los centros activos están ocupados. La velocidad depende de la
cantidad de enzima con sustrato suficiente. Consideraremos sólo la velocidad inicial de las
reacciones para cada concentración de sustrato cuando se construya una gráfica, evitando el error
introducido por el deterioro del enzima. Como en el primer momento no hay producto no
consideraremos la reacción contraria.

S + E  ES E+P

• Si la concentración de sustrato es muy pequeña (Km > [S]), podemos despreciarla en el

denominador.

• Si la concentración de sustrato es grande (Km < [S]), Km es despreciable:

V = Vmax

• Si la concentración del sustrato es igual a la Km (Km = [S]):

V0 = Vmáx
2

La velocidad es independiente respecto a la concentración de sustrato. Es lo que ocurre

en el tramo final de la gráfica que tiende asintóticamente a V. Es la ecuación de una hipérbola.

La enzima presenta saturación de velocidad respecto a la concentración de sustrato. La enzima

no seguirá la cinética de Michaelis – Menten, si tiene cooperatividad en la unión del sustrato por lo
que la curva será sigmoidea. La V será igual y la saturación dependerá de la concentración de
enzima. La saturación se alcanza para determinada concentración de enzima, si la concentración de
enzima es el doble la velocidad será el doble. La velocidad y n son dos formas de expresar la
actividad de una proteína.

Lineweaver-Burk Eadie-Hosftee

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El diagrama de Lineweaver-Burk se Es una representación grafica de la

emplea como herramienta gráfica para cinética de la enzimas en la cual la
calcular los parámetros cinéticos de una velocidad de relación se analiza en función
enzima. Su utilidad consiste en que el de la concentración de sustrato:
recíproco de la cinética de Michaelis-
Menten es fácilmente representable y que
de él emanan mucha información de
interés.

10.- Analice el efecto del pH y la Temperatura sobre la velocidad de una

reacción enzimático.
Cada enzima tiene un pH o rango de pH óptimo en el que su actividad es máxima. En un
pH más alto o más bajo que el óptimo, la actividad decrece.
Esto se debe a que las cadenas laterales de los aminoácidos del sitio activo de la enzima
pueden actuar como ácidos o bases débiles y necesitan encontrarse y mantenerse dentro de cierto
estado de ionización para que sus interacciones sean efectivas.
La existencia de este pH óptimo sirve como mecanismo de regulación de la actividad
(velocidad) enzimático. Si se pone la enzima a un pH fisiológico, siendo su pH óptimo 9, la enzima
trabaja más lento y se puede regular (aumentar) su actividad cambiando el pH. En cambio, si se la
tuviera siempre a su pH óptimo la actividad sería siempre la máxima y no se podría regular. Ej.: La
enzimas hidrolíticas del peroxisoma mantienen su funcionamiento solo en un pH más bajo al
fisiológico.
En cuanto a la variación de Tº, la enzima también es especifica y se verá afectada
morfológicamente si la temperatura aumenta, incluso con posibilidades de llegar a la denaturación
de la proteína, procesos fundamentales para el ser humano como la espermatogénesis requieren
una temperatura óptima que no puede variar en un rango demasiado grande. Aunque lo anterior es
muy importante por el riesgo de destrucción de la enzima, debe recordarse también que la velocidad
de una reacción química depende también de la energía cinética de un sistema manifestada por su
temperatura, así si nos encontramos a temperaturas muy bajas existirá un problema cinético en que
el movimiento de partículas se vera disminuido y con ello la velocidad de la reacción.

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11.-Analice la ecuación de Michaelis-Menten. Discuta el significado de los

siguientes parámetros:
- Km
- Vmáx
- Kcat
- Vmáx/ Km

V= Kcat [E]t[S]/ Km+[S] = Vmax [S]/Km+[S]

En una típica reacción catalizada por una enzima, las concentraciones de reactantes y
productos son normalmente cientos o miles de veces mayor que las concentraciones de enzima.
Entonces, cada molécula de enzima cataliza la conversión a producto de muchos sustratos. El evento
catalítico que convierte el sustrato a producto involucra la formación de un estado de transición y
ocurre mas fácilmente en un lugar especifico de la enzima. El complejo que se forma cuando el
sustrato y la enzima se combinan se llama enzima sustrato complejo.
La serie de eventos que llevan a la formación de productos serían:

E + S <---> ES <---> ES* <---> EP <---> E + P

Esta reacciones fueron estudiadas por los bioquímicas Michaelis y Menten y desarrollaron la
Ecuación Michaelis-Menten, esta ecuación es una descripción cuántica de la relación entre
la velocidad de reacción y la concentración de sustrato, y además dos constantes, la Vmax
y Km ([s] a la cual la V = Vmax /2)

La ecuación de Michaelis – Menten puede ser usada para demostrar que la concentración de
sustrato que produce exactamente una V = Vmax /2 es igual a Km.
Este hecho proporciona una herramienta poderosa para el análisis de enzimas normales y
alteradas.

Km  Suele asociarse con la afinidad de la enzima por el sustrato. La constante de Michaelis es la

concentración de sustrato a la que se obtiene la mitad de la velocidad máxima. No depende de la
concentración de la enzima.
Vmax  Velocidad máxima que alcanza la reacción, la cual se produce cuando la enzima se
encuentra saturad (todas las enzimas forman parte del complejo enzima sustrato).
Kcat  (Número de recambio) Mide la velocidad del proceso catalítico. Constituye una medida
directa de la producción catalítica de producto en condiciones óptimas (enzima saturada). Las
unidades de Kcat son s-1 por lo que se puede interpretar como el número de moléculas de sustrato
recambiadas por molécula de enzima por segundo.
Kcat/Km  Medida de la eficacia enzimática. Por lo tanto una enzima muy eficiente tendrá un valor
de Kcat/KM grande, ya que esto indicará un valor de K cat elevado (que significa un recambio rápido) y
un valor de KM pequeño (que significa una afinidad elevada por el sustrato).
Vmax/ Km el sustrato es mucho menor que la Km, entonces, se obvia la [S] del denominador de la
ecuación, obteniendo una ecuación lineal. Esto indica que Vm/Km es la pendiente de la ecuación
descrita. Por lo tanto, a concentraciones muy inferiores a Km, la ecuación tiende a comportarse
como una ecuación lineal.

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12-. Discuta los diferentes tipos de inhibidores enzimáticos, considerando

aspectos estructurales y cinéticos. Incluya, además los métodos usados
para definir el tipo de inhibición producido por un compuesto particular.

Tipo de
Sitio de unión en la enzima (Estructural) Efecto cinético
inhibidor

Especifico para el sitio activo, donde compite

con el sustrato por un unirse a la enzima en un
equilibrio dinámico. Este tipo de inhibición es
reversible por el sustrato.
Las uniones del sustrato y el inhibidor a la Vmax inalterada; Km (definida
Inhibidor
enzima son excluyentes. como la [S] requerida para la
competitiv
La unión del inhibidor impide la unión del mitad de la actividad enzimática
o
sustrato por los siguientes mecanismos: máxima) se ve aumentada.
• Análogo al sustrato
• Cambio conformacional
• Impedimento estérico

Se une a la E o al complejo ES en un sitio

distinto al sitio activo, la unión del sustrato
con la enzima queda inalterada pero el
complejo ESI no es capaz de formar productos.
Inhibidor
Esta inhibición no puede ser reversible por Km inalterada; Vmax disminuye
no
el sustrato. en relación a la concentración
competitiv
Al unirse, ya sea a la enzima libre o al CES, el del inhibidor.
o
inhibidor provoca un cambio conformacional.
Esto no impide la unión al sustrato, pero altera
la posición del grupo catalítico con respecto al
enlace susceptible del sustrato.

Se une solo al complejo ES en otro sitio

No
que el activo, causa modificaciones en la
competitiv Vmax disminuye Km, disminuye
conformacion de la enzima que hace
o
aparecer un sitio para un inhibidor.

Para analizar la inhibición de un compuesto en particular se observan las acumulaciones de

sustancias químicas en un experimento o también como en los exámenes médicos en la sangre. Se
analiza la reacción enzimática por lo que hace, no por lo que es.

13.- Analice los conceptos de cooperatividad y alosterismo en la acción

enzimática. En su análisis incluya los aspectos cinéticos y estructurales.
Alosterismo
Tal como su nombre lo indica “alosterico”(otro sitio ) la regulación alosterica de una enzima
se produce por unión de una sustancia que en este caso de denomina efector en un sitio
diferente al sitio activo, alterando la conformación de la enzima, aumentando o
disminuyendo la afinidad de la enzima por el sustrato. Así, podemos clasificar a los efectores
en positivos si aumentan la afinidad de a enzima por el sustrato o negativos si disminuyen la
afinidad por el sustrato, regulando así el funcionamiento de la enzima. Estos efectores
generalmente son productos de las vías metabólicas a la cual pertenece una determinada enzima, y
funcionan alternando vías, es decir activando una vía metabólica e inhibiendo otra.
Aquellas enzimas que son inhibidas por su mismo sustrato se denominan homotrópicas y la
inhibición depende de cuantos sitios activos estén ocupados.
Las que son inhibidas por efectores distintos a sus sustratos se denominan heterotrópica.

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Cooperatividad
Este tipo de regulación, descubierto recientemente, plantea que aquellas enzimas que
tienen más de una parte proteica pueden ir alternando secuencialmente su afinidad por
el sustrato, logrando una alta velocidad de transformación pero a concentraciones
mayores, esto porque al principio la afinidad se ve bastante disminuida. La unión de este efector
puede también disminuir la afinidad de las otras partes de la enzima por el sustrato, siendo un
efector negativo.
Un ejemplo conocido con este tipo de funcionamiento aunque no es una enzima es la
hemoglobina.

14.- Discuta los conceptos de enzimología en medicina.

Las enzimas son polímeros biológicos que catalizan múltiples procesos dinámicos, los cuales
hacen posible la vida tal como se le conoce. Como determinantes de la velocidad a la cual tienen
lugar los eventos fisiológicos, las enzimas tienen participación importante en lo que es salud y
enfermedad. Gracias a sus acciones cuidadosamente coordinadas, se logra la degradación de
alimentos para suministrar energía y bloques estructurales, el ensamble de estos bloques en
proteínas, membrana y ADN codificante de la información genética, así como el encauzar la energía
para producir el movimiento celular. Mientras que en la salud todos los procesos fisiológicos
acontecen de manera regulada y ordenada, y se conserva la homeostasis, en los estados patológicos
ésta puede sufrir importantes trastornos. Por ejemplo, la lesión tisular grave, característica de la
cirrosis hepática, puede deteriorar profundamente la capacidad de las células para formar las
enzimas catalizadoras de procesos metabólicos tan importantes como la síntesis de urea. Diversas
enfermedades genéticas, poco frecuentes pero a menudo debilitantes y mortales, proporcionan
impresionantes ejemplos adicionales sobre las consecuencias fisiológicas drásticas que pueden
seguir al deterioro d ela actividad, incluso de 1 sola enzima.
Después de una lesión tisular grave (infarto cardíaco o pulmonar, aplastamiento d euna
extremidad) o cáncer, se liberan a la sangre las enzimas propias de tejidos específicos. Por lo tanto,
la medición de dichas enzimas en el suero sanguíneo proporcionan una información diagnóstica y
pronóstica invaluable a los médicos.
Los factores principales que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas
(concentraciones enzima y sustrato, Tº, pH, presencia de inhibidores) resultan de interés clínico. Por
el principio de homeostasia, la buena salud necesita de cientos de reacciones catalizadas por
enzimas y que éstas se desarrollen a las velocidades adecuadas. La insuficiencia para alcanzar estos
objetivos, turba el equilibrio homeostático de los tejidos, con profundas consecuencias potenciales.
Un médico debe conocer la manera en que el pH, las concentraciones de las enzimas y sustrato, y
los inhibidores influyen en la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.
La velocidad de ciertas reacciones catalizadas por enzimas responde a variaciones ustiles en
el pH intracelular que caracterizan la acidosis y alcalosis metabólicas. Debido a que la velocidad de
la catálisis enzimática aumenta o disminuye en respuesta a las fluctuaciones correspondientes de la
Tº, fiebre e hipotermia trastornan la homeostasis, al momento de modificar la velocidad d emuchas
reacciones catalizadas por enximas. Sin embargo, estos cambios sutiles pueden volverse una
ventaja para el médico. Por ejemplo, es posible explotar la disminución de la actividad de todas las
enzimas que acompaña a la disminución de la Tº corporal (hipotermia), para disminuir la demanda
metabólica global durante la cirugía de corazón abierto, o el transporte de órganos en los
transplantes.

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Muchos fármacos de importancia terapeútica actúan al disminuir la velocidad de reacciones

metabólicas, por competir con el sustrato natural de una enzima metabólica fundamental. Estos
fármacos, a menudo, semejan los sustratos naturales.

15.-Use la ecuación de Michaelis-Menten para demostrar lo siguiente:

a) “v” tiende a hacerse independiente de [S] cuando [S]>>Km

b) La reacción es de primer orden con respecto a S cuando [S] << Km
c) [S]=Km cuando “v” es igual a la mitad de la Vmáx.

En un dibujo donde aparezcan moléculas de sustrato, de enzima y de

complejo enzima-sustrato, describa las situaciones correspondientes a los
puntos (a) y (c).

A altas concentraciones de sustrato la velocidad representada por el punto C es casi igual a

la velocidad máxima y la diferencia entre
estas es casi despreciable, la velocidad
máxima se alcanzara solo cuando todas
las moléculas de enzimas estén
formando el complejo ES.
A concentraciones bajas de sustrato,
como en el punto B y A, las bajas
velocidades de reacción indican que en
ese momento solo una parte de las
moléculas de enzimas están unidas a
sustratos. De hecho, en la concentración
de sustrato en el punto B, exactamente
la mitad de las moléculas de enzimas
están formando el complejo ES.

a) Si la concentración de sustrato es mayor que Km, la cual recordemos es el punto de

referencia para saber si las concentraciones de sustrato son muy altas o muy bajas,
tendríamos que la enzima se saturaría de sustrato.
Razón por la cual la velocidad tendería a acercarse a la Vmáx., lo que no significa que la
enzima trabajará a un 100%, puesto que la gráfica de v versus [S] es una hipérbole que
tiende asintóticamente al valor máximo, lo que significa que lo alcanzará cuando la [S] llegue
al infinito, lo que en la práctica nunca ocurrirá.
La interpretación se basa en el siguiente hecho, si el 100% de los complejos enzima-sustrato
estuvieran acoplados, no se soltaría producto por lo tanto la reacción se detendría, lo que
ocurre en realidad es que si la enzima se encuentra saturada esta trabajará a una velocidad
del 99.9% de su Vmáx, cabe destacar que
estamos hablando de [S] 100 veces Km.

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b) Si Km es mucho mayor que [S], tenemos que la velocidad es proporcional a la [S]. Es decir
que en valores de concentración bajo Km, la velocidad es mas proporcional: “si la [S]
aumenta al doble, la velocidad de reacción también se duplica” y esta es la única zona en la
cual ocurre esto. Por lo tanto, como ya dijimos en (a), Km es un punto de referencia para
concentraciones muy altas o muy bajas.

c) Cuando la [S] es igual a Km, la velocidad es igual a la mitad de la Vmáx, lo que nos dice que
la Km es la concentración de sustrato necesaria para tener una velocidad igual a la mitad de
la velocidad máxima. Si la Vmáx, significa que la enzima está saturada, la mitad de la Vmáx
significa que la mitad de sustrato está con la enzima y la otra mitad está libre.

16.- Por qué la velocidad de una reacción enzimática se aproxima a un

límite a alta concentración de sustrato.
En las cercanías de la velocidad máxima representada por la línea punteada, la variación de
la velocidad a través del tiempo es casi imperceptible y se vuelve INDEPENDIENTE DE LA
CONCETRACION DE SUSTRATO, ya que se produce porque todas o casi todas las enzimas del sistema
están formando parte de un complejo ES y aunque haya un aumento de sustrato, las enzimas no dan
abasto para catalizar todo el sustrato presente en el sistema el aumento real en la formación de
productos es casi 0.
Así puede seguir acercándose sin llegar a la velocidad máxima.

17.- Una enzima que sigue la cinética de Michaelis- Menten tiene una Km
de 1µM para su sustrato. La velocidad inicial es 0.1 µM por min a una
concentración de sustrato a 100 µM. ¿Cuál es la velocidad inicial cuando
[S] es igual a:

a.- 1mM ( 103 µM)

b.- 1 µM
c.-2 µM
V= V max * [S] 0.1 =
Vmax * 100

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K m + [S] 1
+ 100

Vmax = 0, 101 b.- V = 0,101 * 1 = 0.0505 µM/ min

a.- V = 0.101* 103 = 0,100899 µM/min 1+1

1 + 103
c.- V = 0.101 * 2 = 0,06733333… µM/ min

1+2

18.- Para una reacción enzimática que sigue una cinética de Michaelis-
Menten, dibuje un grafico v0 versus [S].
a) en ausencia de un inhibidor
b) en presencia de un inhibidor
c) en presencia de un inhibidor no competitivo
Haga los mismo empleando una grafica de dobles recíprocos de
Linewever-Burk.

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Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología

a) en ausencia de inhibidor

b) en presencia de inhibidor competitivo

c) en presencia de un inhibidor no competivo

Michaelis-Menten Linewever-Burk

19-. Algunos exámenes de laboratorio que solicita un médico contemplan

mediciones enzimáticas. ¿Cómo explica esto? ¿Cómo se expresan los
resultados que entrega el laboratorio?
Un inmunoanálisis ligado a enzimas le permite al médico analizar la sangre del paciente con
un antígeno (ej., virus o bacterias) para ver si su sistema inmunológico lo reconoce como algo que
ha visto antes. Y también analizar la sangre del paciente para ver si una sustancia particular como
una hormona (un antígeno) está presente en su organismo. Los resultados de estos exámenes son

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Universidad de Concepción Unidad 3: Enzimas y
Metabolismo
Facultad de Ciencias Biológicas Seminario I:
Enzimología

expresados en función de la compatibilidad de un anticuerpo o antígeno con una enzima, es decir, si

se unen o no.

20.-En el tratamiento de la leucemia se emplea la enzima asparaginasa,

que hidroliza la asparagina generando amonio y ácido aspártico. Si un
paciente suyo tiene un nivel sanguíneo de asparagina igual a 1μM y usted
dispone de dos asparaginasas, con las propiedades cinéticas que se indica
¿Cuál de ellas elegiría para el tratamiento?
Asparaginasa 1 Km = 1μM; Vmax = 100 μM/seg
Asparaginasa 2 Km = 0.5 μM ; Vmax = 60 μM/seg

No todas las asparaginasas son eficaces. Sucede que las asparaginasas de diferentes fuentes:
animales, vegetales, bacterias; tienen distinto Km. Como la concentración de asparagina en la
sangre es muy baja, la asparaginasa solo será efectiva si su Km es lo suficientemente bajo como
para hidrolizar la asparagina rápidamente, dada su pequeña concentración en sangre. Es decir
debemos buscar la Asparaginasa con mayor eficiencia enzimática.
Entonces, según esto último y de acuerdo a la ecuación de Michaelis-Menten:

Asparaginasa 1: Eficiencia = 100μM/seg = 100

1 μM

Asparaginasa 2: Eficiencia = 60 μM/seg = 120

0.5 μM

Considerando estos resultados, sería más conveniente utilizar la asparaginasa 2, ya que su

efecto sería más rápido.

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