Resultados de la preparación de la curva de calibración de cafeína

Tabla 1. Resultados para la curva calibración de cafeína

Concentración (μg/mL) Área Tiempo de retención (min)
3.125 142303.266 2.59
6.25 36645.992 2.532
12.5 60072.668 2.398
25 97855 2.607
50 376434.688 2.99
100 606092.75 2.673
m 5823.6
b 28813
R2 0.9184

(𝑦 − 28813)
𝑦 = 5823.6𝑥 + 28813 ∴ 𝑥 =
5823.6
Donde:

𝑦 = Á𝑟𝑒𝑎
𝑥 = 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 (𝜇𝑔⁄𝑚𝐿)

Curva de calibración de cafeína

700000
y = 5823.6x + 28813
600000 R² = 0.9184

500000

400000
Área

300000

200000

100000

0
0 20 40 60 80 100 120
Concentración (μg/mL)

Resultados de la muestra con cafeína (Cafiaspirina)

Tiempo de retención: 2.615

Área del pico: 372918.719

Concentración de cafeína:
(372918.719 − 28813)
𝑥= 𝑥 = 59.088144 𝜇𝑔⁄𝑚𝐿
5823.6
59.088144 μg/mL *(500) = 29544.072 μg = 29.544072 mg/tableta

Tabla 2. Parámetros cromatográficos

Tiempo muerto (min) [TM] 0.132
Tiempo de retención cafeína (min) [TR cafeína] 2.615
Tiempo de retención ajustado cafeína (min) [TR' cafeína] 2.483
Tiempo de retención AAS (min) [TR AAS] 1.015
Tiempo de retención ajustado AAS (min) [TR' AAS] 0.883
Factor de capacidad cafeína [K´ cafeína] 18.81060606
Factor de capacidad AAS [K´ AAS] 6.689393939
Selectividad [α] 2.81200453
Altura del pico de cafeína [H cafeína] 26822.707
Altura del pico de AAS [H AAS] 33801.617
Longitud de la columna [L] (cm) 20
Número de platos cafeína [N cafeína] 0.000745637
Número de platos AAS [N AAS] 0.000591688
Resolución [R] 0.002215838

DISCUSIÓN

Analizando los resultados obtenidos de la curva de calibración observamos que hubo gran
variación entre los datos y algunos errores en la preparación, la primera observación sería que no
se cumple con el criterio de aceptación de linealidad, ya que el coeficiente de determinación (R2)
obtenido fue de R2=0.9184, que es un valor menor al aceptado (R2≥0.999) según los parámetros
establecidos, y observando los puntos graficados atribuimos esta gran variación a que la primer
solución tenía una concentración mucho mayor a la esperada. Cabe destacar que la curva de
calibración usada para esta práctica fue preparada por el equipo Cofmex y analizada en el equipo
de HPLC por el equipo Pentaburetas, por lo que al ser diferentes los analistas debemos considerar
varias puntos, las soluciones pudieron haber sido mal preparadas desde un inicio, pudo haber una
contaminación cruzada al haber un cambio de analistas, existe la posibilidad de que en la
preparación de las muestras se utilizaran las mismas probetas sin un lavado extenuante, lo que
alteraría la concentración de las soluciones o pudo haber un error en la inyección de la muestra,
igualmente por falta de un lavado extenuante, ya que es la primera vez que los analistas utilizan
un equipo de esta clase, lo que pudo haber causado un error en la inyección o en el lavado. Todos
estos puntos mencionados pudieron haber sido causantes de dicha falta de linealidad en la curva
de calibración obtenida por lo que para mejorar los resultados obtenidos en futuras prácticas se
recomienda lo siguiente:

Instruir a los analistas en las técnicas y cuidados adecuados a la hora de preparar soluciones para
una curva de calibración, a fin de obtener soluciones con concentraciones lo más exactas posibles
y resultados precisos en el análisis.
Realizar el análisis por triplicado, con dos fines, que los analistas se familiaricen con el uso de los
equipos y mejoren su obtención de resultados con este, y observar si los resultados obtenidos son
repetibles y confiables, y no simplemente causados por alguna eventualidad.

Considerando lo ya antes mencionado, se utilizó la curva de calibración de Cafeína para poder

determinar la concentración de Cafeína presente en una tableta de Ácido acetilsalicílico con
Cafeína (medicamento genérico intercambiable) y comprobar lo reportado por el fabricante
(30mg por cada tableta) en el envase primario en que se encontraba la muestra. Para comprobar
esto, se sustituyo el valor de Área correspondiente al pico de cafeína en la formula 𝑥 =
(𝑦−28813)
5823.6
(obtenida del despeje de la formula obtenida al graficar los puntos de la curva de
calibración). Posteriormente la concentración obtenida se multiplico por el factor de dilución
utilizado y se determinó que la concentración de Cafeína en la tableta analizada fue de 29.544072
mg, lo que significa que hubo una variación del 98.48% respecto a lo reportado por el fabricante
que eran 30mg de Cafeína en cada tableta, por lo que concluimos que la concentración reportada
en el envase primario si corresponde con el valor real encontrado.

En caso de que la concentración obtenida fuera menor a los 30mg esperados se propondría
realizar varias cromatografías en capa fina con diferentes fases móviles, desde las más polares
(agua, metanol, etc.) a las más no polares (hexano) para observar en cual hay una mejor elución de
la muestra y con cual podemos realizar una mejor separación de los componentes, y una vez
determinada cual es la fase móvil más óptima, realizar de nuevo el análisis al HPLC utilizando dicha
fase móvil.

CONCLUSIÓN

Se aprendió sobre el uso y cuidados que hay que tener al realizar un análisis cromatográfico
utilizando un equipo de Cromatografía Líquida de Alta Resolución. Además se cuantifico la
cantidad de Cafeína presente en una tableta de Cafiaspirina y se comprobó que lo reportado por el
fabricante se encontraba dentro de los límites aceptados.