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Especializado
Le dan la Bienvenida al
Curso
“Fundamentos de la
Cromatografía de Líquidos” Sala de Cursos
www.industrialgaray.com
Soporte Analítico
Especializado
Datos de Contacto
Ing. Claudia Hernández
WhatsApp y Telegram +525545152138
industrialgaray1@gmail.com
https://www.industrialgaray.com
Clasificación
de acuerdo al estado de la
fase móvil.
Soporte Analítico
Clasificación Según el
mecanismo de separación
Soporte Analítico
Especializado
Cromatografía de Partición
Cromatografía de adsorción
Cromatografía de Afinidad
Gel de Sílice
Tierra de Diatomeas
Celulosa
▪ Es la más antigua.
▪ Fase estacionaria sólida y fase móvil líquida o gas.
▪ El soluto se adsorbe en la superficie de las partículas sólidos.
Gel de Sílice
Tierra de Diatomeas
Celulosa
▪ Aniones y cationes se unen covalentemente a la fase
estacionaria sólida, por lo común una resina.
▪ Los iones de soluto son de carga opuesta a los de la fase
estacionaria y son atraídos por fuerza electrostática.
▪ Fase móvil: Líquido
▪ Se conoce como cromatografía de filtración en Gel o de
Permeación en Gel (GPC)
▪ No hay interacción entre el soluto y la fase estacionaria.
▪ Se separan por tamaño. Las más grandes salen más rápido.
▪ Altamente selectiva
▪ Se unen covalentemente el soluto de interés para retener y
después se desorbe por cambio de pH o fuerza iónica.
▪ Análisis de anticuerpos en proteínas.
▪ Cromatografía en fase normal (NPC) ▪ Cromatografía en fase inversa (RPC)
▪ Modo de separación tradicional ▪ Fase sólida modificada con grupos
no polares (con mayor frecuencia
▪ Fase estacionaria polar, fase móvil no
grupos C18)
polar
▪ Fase móvil polar: p. Metanol / agua,
▪ Útil para la separación de
acetonitrilo / agua
compuestos no polares y limpieza
▪ Analitos polares o de polaridad
media
▪ Modo HPLC más popular
Soporte Analítico
Especializado
1ª Etapa
Las muestras se disuelven en una fase
móvil (FM) líquida que se hace pasar a
través de una fase estacionaria (FE)
inmiscible, la cual se mantiene fija en
una columna o lecho cromatográfico
Soporte Analítico
Especializado
2ª Etapa
• Los componentes de la muestra se
distribuyen de modo distinto entre la
FM y la FE dependiendo de la
afinidad por ambas fases,
desplazándose a velocidad distinta.
Soporte Analítico
Especializado
3ª Etapa
• Debido a la distinta movilidad, los
componentes se separan en bandas
discriminadas que pueden analizarse
cualitativamente y/o cuantitativamente
Soporte Analítico
Especializado
Soporte Analítico
Especializado
Conceptos Básicos
Soporte Analítico
Especializado
Soporte Analítico
Especializado
• CROMATOGRAMA: Un gráfico
que muestra la cantidad de una
sustancia que sale de una
columna de cromatografía en
función del tiempo
Soporte Analítico
Especializado
Parámetros de Rendimiento
Especializado
▪ Eficiencia
▪ Retención
▪ Selectividad
▪ Resolución
▪ Presión
Soporte Analítico
Eficiencia (N)
Especializado
Eficiencia (N)
Especializado
Soporte Analítico
Eficiencia (N)
Especializado
Soporte Analítico
Eficiencia (N)
Especializado
Considerando el pico B,
𝑁 = 16 𝑡𝐵 Τ𝑤𝑡 2
= 400 platos
Soporte Analítico
Especializado
Proceso de Separación
Soporte Analítico
Especializado
FACTOR DE RETENCION k
Retención
kA = (2.5 - 1)/1 = 1.5
kB = (4.6 - 1)/1 = 3.6
kC = (6.2 - 1)/1 = 5.2
Selectividad α
Soporte Analítico
Especializado
Selectividad (C-B)
α = K2/K1
α = Kc/Kb = 5.2/3.6
= 1.44 α = 1.44
Selectividad (B-A)
α = K2/K1
α = Kb/Ka = 3.6/1.5
= 2.4 α = 2.4
Soporte Analítico
Resolución
Especializado
Parámetros de Rendimiento
Especializado
Presión Soporte Analítico
Especializado
Presión Especializado
Soporte Analítico
Presión Especializado
ECUACIÓN DE VAN DEEMTER Soporte Analítico
Especializado
𝐵
𝐻 = 𝐴 + + 𝐶𝑠 + 𝐶𝑚 ⋅ 𝑢
𝑢
Sistemas De Inyección
Detectores
Columnas
Sistema de Sistema de
suministro de Registro
disolventes
Soporte Analítico
Especializado
Soporte Analítico
Bombas
Especializado
Bombas
Especializado
Bombas
Especializado
Bombas
Especializado
Soporte Analítico
Solventes
Especializado
Solventes
Especializado
Soporte Analítico
Inyectores
Especializado
Soporte Analítico
Inyectores
Especializado
INYECTOR MANUAL
AUTOMUESTREADOR
Soporte Analítico
Detectores
Especializado
Detectores
Especializado
Detector de Fluorescencia.
• Este detector solamente puede detectar compuestos que tengan fluorescencia
nativa o inducida por derivatización .
Colectores de Fracciones
Especializado
Soporte Analítico
Especializado
Acoplamiento HPLC - MS
Soporte Analítico
Columnas
Especializado
Columnas
Especializado
Selección de la Columna
Especializado
Selección de la Columna
Especializado
Tipos
Especializado
FASE NORMAL
FASE REVERSA
INTERCAMBIO IONICO
Próximamente el Curso
“Resolución de Problemas
en HPLC”
Soporte Analítico
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Te invitamos al Curso de
“Caracterización de Polímeros
de Alto peso Molecular por
FTIR y Raman”
22 al 26 de Febrero
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