Química Analítica I 2023A

Informe

CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA

(HPLC) CUANTIFICACIÓN DE CAFEINA EN BEBEIDAS
COMERCIALES

Santiago Quevedo Salazar1 , Juan Pablo Pérez Plaza2 , Henry Becerra Figueroa3
Universidad Santiago de Cali, Cali,
1
Universidad Santiago de Cali, Cali, Colombia

*santiago.quevedo00@ussc.edu.co1 *Juan.perez18@usc.edu.co2 *Henry.becerra00@usc.edu.co3

Resumen. En la práctica se buscó utilizar la cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC)

para la cuantificación de la cafeína en diferentes bebidas comerciales, para esto todas las
soluciones se prepararon con agua grado HPLC, después de prepara y acondicionar la fase
móvil y acondicionar el equipo HPLC se prepararon las 4 muestras las cuales se les determino
un tiempo de retención del estándar de cafeína y hacer la lectura de estándares y muestras se
obtuvo: en la muestra N°1 985607 Mtra2 893839 Mtr3 1436 Mtr4 778110 de cafeína. Lo cual
dio un Std. Dev de 530425 y un % RSD del 67,2%

1. INTRODUCCIÓN
La cromatografía líquida de alta resolución o HPLC por sus siglas en ingles es una de los tipos de
cromatografía en columna mas usados para la separacion y cuantificacion de compuestos quimicos,
haciendo uso de altas presiones de hasta 400 atmósferas para forzar la fase móvil a través de la
columna, lo que lleva a separaciones en tiempos mucho más rápidos a

El objetivo del presente artículo es guiar a quienes se inician en la escritura científica, paso a paso en
sus etapas, destacando los aspectos más relevantes.
La etapa final de una investigación es comunicar los resultados, de manera que éstos permitan
integrar los conocimientos a la práctica profesional, es decir, se basa en los hallazgos de estudios
científicos que deben tener validez, importancia, novedad y utilidad para el quehacer profesional. En
relación a las publicaciones científicas, existe una serie de mitos: se cree, por ejemplo, que si una
revista es de prestigio, publicar en ella es signo de validez o que si el autor ha publicado con
anterioridad un muy buen trabajo, ello es garantía futura de validez científica o que está libre de
prejuicios y de sesgos. Esto no es tan cierto, en el trabajo investigativo y sus resultados pesan muchos
otros elementos que se presentan en este artículo.
Esta etapa final es similar a la etapa inicial en el grado de dificultad que involucra. Para interpretar
y comunicar los resultados de un estudio se requiere experiencia, conocimiento de la estadística y
capacidad de análisis para realizar los comentarios pertinentes relacionándolo con otros hallazgos de
investigaciones similares, incluyendo creatividad del autor o autores, compenetración intelectual,
razonamiento lógico y sensibilidad frente a las interpretaciones que se pueden dar.

[1]
 Química Analítica I 2023A
Informe

La introducción debe responder a la pregunta de "porqué se ha hecho este trabajo". Describe el

interés que tiene en el contexto científico del momento, los trabajos previos que se han hecho sobre el
tema y qué aspectos no dejan claros. Con la abundancia de trabajos de revisión existentes actualmente,
la Introducción no necesariamente debe ser muy extensa y puede beneficiarse de lo expuesto en la
revisión más reciente sobre el tema.
Es conveniente que el último párrafo de la Introducción se utilice para resumir el objetivo del
estudio.

2. METODOLOGIA

La sección de material y métodos debe ser lo suficientemente detallada como para que otro autor
pueda repetir el estudio y verificar los resultados de forma independiente.
Contiene una descripción concisa de los pasos realizados para llevar a cabo la práctica, y esquemas,
fotos o diagramas del montaje realizado.

3. DISCUCIÓN DE RESULTADOS

Tabla. Datos para curva de calibración

Concentración
STD Área
[ppm]
1 4 140178
2 12 427019
3 24 873594
4 36 1280006
5 48 1693751

Grafico 1. Curva de calibración de cafeína

Curva de cafeina
1800000
1693751
1600000 f(x) = 35335.239213198 x + 6595.66751269018
R² = 0.999673587817392
1400000
1280006
1200000
1000000
Área

873594
800000
600000
400000 427019

200000
140178
0
0 12 24 36 48 60
Concentración (ppm)

Índice de correlación (R2)= 0,9997

[2]
 Química Analítica I 2023A
Informe

De acuerdo con los resultados la ecuación de la recta será:

Área = 6595,7 + 35335 * Concentración (ppm)

Tabla. Comparación de concentración teorica con calculo experimental

Concentración
Concentración
Producto Muestra Área experimental
teórica [ppm]
[ppm]
  1      
  2      
Speed Max 3 28 1436 -0,146020449
  4      

De acuerdo con los resultados obtenidos se puede observar que el sistema es adecuado para el análisis
de la muestra ya que el análisis de linealidad muestra una correlación adecuada entre la concentración
de cafeina y la respuesta del área bajo la curva obtenida.
Además, podemos observar que el coeficiente de correlación es muy cercano a 1, por lo tanto los
resultados presentan una relación lineal.

En cuando a los resultados de la muestra problema, se evidencia que la concentración experimental

obtenida no corresponde con la concentración teórica calculada.
Lo anterior se puede deber a que no hubo una óptima extracción de la cafeína a partir de la matriz de
la bebida energética, ya que solo se tomó una alícuota de producto y se diluyo en agua grado HPLC.
En ningún momento se realizó una extracción del compuesto de interés como lo indican algunos
autores. [1][2][3].

Tampoco se realizó una decoloración de la muestra y esto puede ocasionar interferencias en la

medición, [5].

Otra posible razón es que se utilizo una longitud de onda de 254nm y en varios artículos sugiere que se
realiza la medición de cafeína a 275nm debido a que es donde se aprecia el máximo de absorbancia de
esta. [6] [4].

4. PREGUNTAS

1. ¿Por qué es necesario realizar una purga del equipo con la fase móvil antes de proceder a
hacer las inyecciones?
Esto es para prevenir que se contamine con anteriores las anteriores pruebas echas en el equipo de
HPLC y la lectura de nuestra muestra proceda sin problemas.

2. A partir del área de los picos cromatográficos de los patrones establecer la línea de calibración
mediante análisis de regresión lineal y la concentración de la cafeína en cada solución.

3. Realice los cálculos necesarios para cuantificar el contenido de cafeína en las muestras.

Se necesita los datos de otros grupos

[3]
 Química Analítica I 2023A
Informe

4. El acetonitrilo empleado como parte de la fase móvil (acetonitrilo en agua) puede ser
reemplazado por metanol, si es así, ¿qué proporción debe tener?

5. ¿Considera que el sistema de detección utilizado fue el correcto?¿Por qué?

Si debido a que lo que se pretendía encontrar era un pico de cafeína el cual ya estaba identificado
con los estándares por lo que la detección del espectro de la cafeína fue fácil de encontrar y cuantificar

6. Los picos que se observan antes de la cafeína en las inyecciones de la muestra ¿A qué pueden
deberse?
Esto se debe a que estos compuestos también se encontraban en el estándar por lo que se detectaron
antes del espectro de la cafeína.

7. Proponga una metodología adecuada para determinar cafeína en chocolate por HPLC,
teniendo en cuenta la naturaleza pastosa de la muestra.

5. CONCLUSIÓN

Las conclusiones deben ser presentadas claramente como respuesta a la interrogante que originó el
estudio y a los objetivos planteados, por lo tanto debe haber tantas conclusiones como objetivos.
No deben ser copia literal de los libros. Concluya sobre el método y sobre los contenidos de las
muestras.
Algún texto.

6. BIBLIOGRAFÍA

1. De Aplicación Científica y Técnica, R. (s/f). Extracción, caracterización y cuantificación de

cafeína en bebidas energéticas más. Ecorfan.org. Recuperado el 20 de mayo de 2023, de
https://www.ecorfan.org/spain/researchjournals/Aplicacion_Cientifica_y_Tecnica/vol4num13/
Revista_de_Aplicaci%C3%B3n_Cient%C3%ADfica_y_T%C3%A9cnica_V4_N13_4.pdf

2. Falcon Marcos, D. D., & Gutiérrez Rodriguez, G. N. (2021). Determinación de cafeína en bebidas
energizantes y frecuencia de consumo en estudiantes de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
María Auxiliadora 2019. Universidad María Auxiliadora.

3. Martínez, G., López, F., & Segovia, F. (s/f). Extracción y cuantificación cafeína mediante
espectro UV-Visible en café, té y cacao. Upv.es. Recuperado el 20 de mayo de 2023, de
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/104055/Garc%C3%ADa%3BFuentes%3BFern
%C3%A1ndez%20-%20Extracci%C3%B3n%20y%20cuantificaci%C3%B3n%20de%20cafe
%C3%ADna%20mediante%20espectroscop%C3%ADa%20UV-Visi....pdf?sequence=1

4. Melgar Meza, M. (2015). Determinación de cafeína en bebidas energizantes comercializadas en

el distrito de Miraflores - Lima. Universidad Alas Peruanas.

[4]
 Química Analítica I 2023A
Informe

5. Mojica, M., & Yurley, I. (2016). Determinación de cafeina en bebidas energizantes consumidas
en el área metropolitana de Cúcuta utilizando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
(Archivo Electrónico). Universidad Francisco de Paula Santander.

6. USP. (s/f). Uspnf.com. Recuperado el 20 de mayo de 2023, de

https://online.uspnf.com/uspnf/document/1_GUID-A1199B07-4EA5-476C-ADC6-
EF9D4E9231B1_4_en-US?source=Search%20Results&highlight=caffeine

[5]