Universidad Central de Venezuela

Facultad de Ciencias
Escuela de Química
Laboratorio de Instrumental Analítico

Título de la Práctica:
Determinación cuantitativa del Ácido Ascórbico presente
en cápsulas de Vitamina C Letisan ® mediante
Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (HPLC)

Identificación de la muestra: Vitamina C, Letisan ® (Cápsulas)

Reporte

Concentración de Ácido ascórbico en

29 ± 10
cápsulas de vitamina C(%p/p)
Concentración de Ácido ascórbico en
972 ± 307
cápsulas de vitamina C (mg/kg)
Intervalo de Confianza (95%) 972 ± 763
Coeficiente de Varianza (%) 34
LOD (%p/p) 0,0002

Realizado por:
Alfonzo, Rosinel C.I: 22.017.871
Torre Mora, Jennifer C.I: 26.411.841
Torrealba, Joyner C.I: 25.482.286

Caracas, 7 de diciembre de 2022

 Resumen

La determinación cuantitativa de ácido ascórbico en comprimidos comerciales de Vitamina

C, Letisan ® se realizó mediante el método de calibración externa y empleando las áreas
de pico obtenido. Se alcanzaron las condiciones de separación óptimas para la
cuantificación empleando un flujo de 0,800 mL/min en una columna de elevado número de
platos teóricos. EL valor obtenido en el análisis fue de (971±307) mg/tableta, y se
determinó que existen diferencias al 95% de significancia con el valor reportado de
500mg.

Objetivos

Objetivo General:

Determinar cuantitativamente el contenido de Ácido Ascórbico presente en las cápsulas

de Vitamina C Letisan ® mediante la técnica de Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia
(HPLC).

Objetivos Específicos:

 Determinar el flujo óptimo (ml/min) a través de cambios de flujo empleado en la bomba

del cromatógrafo y al calcular la altura de plato y números de platos teoricos para cada
caso.
 Calcular los parámetros cinéticos obtenidos experimentalmente y comparar con los
valores esperados reportados en la bibliografía.
 Cuantificar la cantidad de Ácido Ascórbico presente en cápsulas de Vitamina C a
través de HPLC utilizando como tecnica cuantitativa la curva de calibración extterna
generada a partir de los estandares Ácido Ascórbico.

2
Equipos y reactivos empleados (marca, modelo, fórmula y pureza)

Tabla 1. Equipos y reactivos utilizados durante la práctica.

Equipos Marca y modelo

Detector Inteligente UV-Visible Jasco. UV-2075 Plus
Bomba Inteligente HPLC Jasco. PU-2080 Plus
Unidad de Gradiente Ternario con
Jasco. LG-2080-02
Desgasificador Popular
Columna (4,6x150 mm).
Características:
-Tamaño de partícula de relleno: 5 μm.
-Forma de partícula de relleno: esférica. Waters Spherisorb ® 5μm ODS2
-Columna C18 de fase reversa, con soporte de
sílice.
-Tamaño de poro: 80 Å
Reactivos empleados Pureza (%)
Agua (H2O) filtrada Alta pureza
Fase móvil: NaH2PO4. (50mM) Alta Pureza
Ácido Ascórbico (C6H8O6) 99,7%
Muestra de Vitamina C
(Ácido Ascórbico 500mg)
Materiales de uso en el laboratorio
Balanza analítica
Pipetas volumétricas
Pipetas graduadas
Micropipeta
Balones
Beakers
Inyectadoras con filtro para inyección de la muestra

3
 Metodología Experimental

Preparación de los estándares para la Preparación de la muestra de Vitamina C a

generación de la curva de calibración: partir de las cápsulas Letisan ®:

Determinación del flujo óptimo de la

bomba del HPLC:

4
 Tablas de datos y resultados analíticos

Tabla 2. Preparación de solución de estándares y curva calibración externa del ácido

ascórbico.
ID Masa error Vol. error Vol. error (mL) Conc. M Error Área Obs.
(g) (g) Ali (mL) Aforo (mg/L) (mg/L) (int)
(mL) (ml)
StdM 0,0266 0,0001 - - 100,0 0,01 265,202 0,997 Apen.
1
Std1 - - 1,250 0,006 50,00 0,06 6,630 0,041 145553,5 Apen.
2
Std2 - - 2,500 0,006 50,00 0,06 13,260 0,061 177374,5
Std3 - - 3,75 0,01 50,00 0,06 19,890 0,095 273339,6
Std4 - - 5,00 0,02 50,00 0,06 26,520 0,149 345135,7
Curva de Área=10446,794 C+61672,867
calibración
r^2 0,9683210 Desviación típica 19867,830 Apen.
4 3
Sensibilidad característica (0,0044/m) 4,01643E-07 Apen.
(mg/L) 4
LOD 9,5 mg/L 1,6 %p/p Apen.
5
15789 mg/Kg 0,36 mg/tableta

Curva de calibración de ácido ascórbico

400000.0
350000.0
300000.0 f(x) = 10478.2286709753 x + 61672.866666667
R² = 0.968321041093724
250000.0
Área (Int)

200000.0
150000.0
100000.0
50000.0
0.0
5.000 10.000 15.000 20.000 25.000 30.000
Concentración (mg/L)

Gráfico 1. Curva de calibración externa para la determinación de ácido ascórbico en una

muestra de vitamina C.
Tabla 3. Datos para la construcción de la recta de regresión.

X Y Xi2 Yi2 Xi.Yi

1 6,650 145553,467 44,223 21185811658,684 967930,553
2 13,300 177374,500 176,890 31461713250,250 2359080,850
3 19,950 273339,600 398,003 74714536928,160 5453125,020
4 26,600 345135,700 707,560 119118651414,490 9180609,620
Σ 66,500 941403,267 1326,675 246480713251,584 17960746,043
Promedios 16,625 235350,817

Tabla 4. Datos y resultados para la determinación de ácido ascórbico.

ID Masa error Vol error Vol error Vol error Señal (ua)
(g) (g) aforo (ml) ali. (ml) aforo (ml)
(ml) (ml) (ml)
MA1 0,3365 0,0001 100,0 0,1 0,400 0,001 25,00 0,03 199437,3000
MA2 0,3245 0,0001 100,0 0,1 0,400 0,001 25,00 0,03 282998,2000
MA3 0,3380 0,0001 100,0 0,1 0,400 0,001 25,00 0,03 189401,5000
Tableta 3,5315 0,0001

Tabla 5. Concentración de ácido ascórbico presente en la muestra.

ID Conc. error mg/ error Conc error %p/p error CV Obs
(mg/L) (mg/L) tableta mg/table (mg/kg) (mg/kg) %p/p %
(mg) ta
MA1 824 42 865 44 244934 12355 24,50 0,05 0,2 Apen.
6
MA2 1324 83 1441 91 408050 25639 40,80 0,10 0,2
MA3 764 38 798 40 226083 11275 22,6 0,05 0,2
Conc. 971 1034,81 293022,45 29,30 Apen.
Promedio 7
desviación 307 353,37 100061,71 10,01
std.
CV (%) 31,7 34,1 34,1 34,1
Int. 3,18 Apen.
Confianza 8
(3, 95%)

6
Tabla 6. Selección del flujo óptimo de trabajo.

Flujo T W H N obs
(ml/min) retención
(min)
0,800 2,378 0,139 0,03203 4682,89136 Apen. 9
0,600 3,227 0,200 0,03601 4165,4116
0,400 4,875 0,286 0,03227 4648,76033

Tabla 7. Parámetros de eficiencia de la columna.

Flujo T W H N obs
(ml/min) retención
(min)
0,800 2,378 0,139 0,03203 4682,89136 Apen. 9
2,447 0,144 0,03247 4620,22299
2,478 0,15 0,03435 4366,5664
Promedio 0,0329 4556,5603
Desviación std. 0,0012 167,4965
CV (%) 3,7438 3,6759

7
 Discusiones
La selección del flujo óptimo de trabajo se pudo realizar al calcular los parámetros de
eficiencia de la columna H (altura de plato) y N (número de platos), en donde, se obtuvo
una menor H y un mayor N para un flujo de 0,800 mL/min, siendo además este, el flujo de
mayor rapidez, lo que conllevaba a obtener resultados de manera rápida y eficiente.

Con relación a los parámetros cinéticos H, N, y L, obteniendose valores de 0,0329, 4557,

15 cm, respectivamente que, al ser comparado con la bibliografía, se pudo notar que el
Ácido Ascórbico en la muestra, obtuvo valorers similares a los de la eficiencia de la
columna cromatografica.

Para la determinación de ácido ascórbico en vitamina C mediante cromatografía líquida

de alta eficiencia (HPLC) se construyó la curva de calibración mediante la elución de
soluciones patrón de ácido ascórbico, con la ayuda de la fase móvil, observándose para
cada estándar picos resueltos y simétricos. Para la cuantificación, se obtuvo la curva de
calibración Área=10446,794 C + 61672,867 con un ajuste lineal medianamente aceptable
(r2= 0,96832104). Las variaciones apreciadas en la linealidad de la curva de calibración
pueden deberse a los errores asociados a la inyeccion de muestra al cromatografo lo que
conllevó a la posibilidad de una variabilidad en la cantidad de muestra inyectada, además
de los errores operacionales generados en la preparación de los patrones de calibración.

Mediante el parámetro estadístico de la desviación estándar de los residuales se

determinó el límite de detección (LOD) 0,0002 %p/p.

Mediante la curva de calibración externa, y las áreas obtenidas experimentalmente por

triplicado de la muestra, se determinó la concentracion del acido ascorbico dando un valor
de (971 ± 307) mg/tableta, dicho valor es superior al reportado por el medicamento de
250 mg/tableta. Lo que indica que, puede que haya errores sistemáticos asociados,
problemas instrumentales o que las cápsulas de Vitamina C no hayan sido preparadas de
manera uniforme, ya que, al realizar estos patrones de calibración, se consideran
concentraciones de los ppm (mg/L) siendo estos valores bastante pequeños.
Adicionalmente, la desviación generada en la construcción de la curva de calibración
conlleva a errores en la determinación de la concentración de la cantidad de Ácido
Ascórbico en las cápsulas de Vitamina C.

8
 Conclusiones

 Se obtuvo un flujo óptimo de trabajo para la generación de la curva de calibración

e identificación de la muestra de Vitamina C de 0,800 mL/min. Mostrando
eficiencia con ayuda de los parámetros H y N, así como rapidez en su
determinación.

 Se determinó (971 ± 307) mg/tableta de Ácido Ascórbico en las cápsulas de

Vitamina C, dicho valor es superior al reportado por el medicamento de
250mg/comprimido. La preparación no uniforme de las cápsulas, los errores
sistemáticos, la inyección de la muestra por diferentes operadores y el ajuste
moderado de la curva de calibración pudo conllevar a la obtención de un valor
superior al reportado de Ácido Ascórbico en el medicamento comercial.

Apéndice

 Apéndice 1: Preparación de la solución estándar madre de ácido ascórbico

200 ppm y errores correspondientes.
o Concentración de ácido ascórbico en el patrón madre en mg/L
Ecuación:

Pureza 1 1000 mg
C StdM =Masa de est á ndar (g) × × ×
100 Volumen aforo(L) 1g

Ejemplo:

99,7 g 1 1000 mg
C StdM =0,0266 g á cido asc ó rbicox x × =265,202 mg/ L
100 g 0,1 L 1g

o Error de la concentración del patrón madre de ácido ascórbico

Ecuación:

√( )(
S Masa est á ndar 2
)
2
S
SStdM =C StdM × + Vol .afo r o
Masa est á ndar Vol. aforo

9
Ejemplo:

√( )( )
2 2
0,0001 g 0,01 mL
SStdM =( 265,202 mg/L ) × + =0,997 mg/L
0,0266 g 100,00 mL

Reporte de la concentración del ácido ascórbico en el estándar madre:

C StdM = (265 ± 1 ) mg/L

 Apéndice 2: Preparación de estándares de calibración de ácido ascórbico.

o Preparación de estándar de calibración de 5 ppm (Std1)
Ecuación:

Volumen al í quota StdM ×Concentraci ó nStdM

C Std 1=
Volumen aforo

Ejemplo:

(1,250 mL)×(265,202 mg/ L)

C Std 1= =6,630 mg/ L
(50,00 mL)

o Error de la concentración del estándar de calibración Std1

Ecuación:

√( S StdM 2
)( )( )
2 2
S al í quota SVol .aforo
SStd 1=C Std 1 × + +
Conc .StdM Vol . al í quota StdM Vol . aforo

Ejemplo:

√( )( ) ( )
2 2 2
mg 0,997 mg/ L 0,06 mL 0,06 mL
SStd 1=6,630 × + + =0,041mg/ L
L 265,202 mg/ L 1,250 mL 50,00 mL

Reporte de la concentración de ácido ascórbico en el estándar Std1

C Std 1=( 6,630,10 ±0,041 ) mg / L

o Prueba de valores anómalos Q de Dixon para el Std 1.

10
Tabla 8. Resultados de la señal obtenida para el estándar 1 de ácido ascórbico.

ID Señal (ua)
Std1.1 168088,50
Std1.2 138836,70
Std1.3 129735,20
Promedio 145553,46
Ecuación:

|Valor sospec h oso−valor má s cercano|

Q=
( Valor m á s grande−valor m á s peque ñ o )

Ejemplo:

|168088,5−138836,7|
Qexp= =0,763
( 168088,5−129735,2 )

Qcri=0,970 ,n=3 y t=95 % de confianza

Qcri >Qexp por lo cual no se rechaza el valor.

 Apéndice 3: Determinación de los parámetros del método por mínimos

cuadrados.
o Determinación de los parámetros de la recta de regresión
Ecuaciones:

S xy
m=
S xx

b= y−m x

Para la determinación de la pendiente (m) y el intercepto (b) se calcularán primero los

valores de Sxx, Syy y Sxy, que se determinan mediante las siguientes ecuaciones:

2
( Σ xi )
S xx =∑ ( x i−x ) =Σ x i −
2 2
N

2
( Σ yi )
S yy =∑ ( y i− y ) =Σ y i −
2 2
N

11
 Σ xi Σ yi
S xy =∑ ( x i−x ) ( y i− y )=Σ xi y i−
N

donde X corresponde a las concentraciones de los estándares de calibración y Y

corresponde al área del pico correspondiente. Empleando los valores de concentración y
área presentados en la tabla 3, se tiene:

Ejemplo:
( 66,5 )2
S xx =( 1326,675 )− =221,1125
4
( 9414 03,267 )2
S yy =( 246480713251,584 )− =24920685628,9167
4

( 66,500 ) ( 941403,267 )
S xy =( 17960746,043 )− =2309916,7350
4
Entonces, la pendiente será.

2309916,7350
m= =10446,794
221,1125

Finalmente, el intercepto será.

b=235350,817− (10446,794 × 16,625 )=61672,867

o Determinación del coeficiente de correlación momento-producto

Ecuación:

S xy
r=
√ S xx S yy
Para la determinación del coeficiente hace falta conocer los valores de S xx, Syy y Sxy, que
se determinaron en la sección anterior. Entonces el valor de r será.

Ejemplo:

2309916,7350
r= =0,98403305
√( 221,1125)(24920685628,9167)
Y el cuadrado del coeficiente momento-producto será.

12
 2
r =0,96832104

o Determinación de la desviación estándar de la regresión (desviación

típica)

Ecuación:

√
2
S −m S xx
Sr = yy
N−2

Para determinar Sr se deben conocer los valores de Sxx, Syy y m, que es la pendiente, que
fueron determinados anteriormente. Entonces el valor Sr será.

Ejemplo:

√
2
24920685628,9167−( 10446,794 ) (221,1125)
Sr = =19867,830
4−2

o Determinación de la desviación estándar de la pendiente y el intercepto

Ecuaciones:

Sm =
√
Sr 2
S xx

√
1
Sb =S r 2
( Σ xi )
N−
Σ xi2

Para la determinación de las desviaciones estándar de la pendiente (m) y el punto de

corte (b), se deben conocer los valores de Sr y Sxx, que fueron calculados en la sección
anterior. A partir de los datos de la tabla 3, se tiene.

Ejemplo:

√
2
(19867,830)
Sm = =1336,115
221,1125

13
 √
1
Sb =( 19867,830 ) 2
=24333,023
( 66,5 )
4−
1326,675

Reporte de la recta de regresión

Á rea=( 10446,794 ± 1336,115 ) C+ ( 61672,867 ± 24333,023 )

 Apéndice 4: Determinación de la sensibilidad característica.

Ecuación:

0,0044
Sensibilidad caracter í stica=
m

Ejemplo:

0,0044 −7
Sensibilidad caracter í stica= =4,01643 x 10
10446,794

 Apéndice 5: Determinación del límite de detección (LOD).

Ecuaciones:

3 ( Se ñ al /Ruido )
LOD= ( en mg /L)
m

Ejemplo:

971
3( mg/ L)
307
LOD= =0,00091mg/ L
(104 78)

 Apéndice 6:

o Determinación de la concentración en la muestra M1 en unidades de

mg/L, mg/comprimido, mg/kg y %p/p
Ecuación:

14
 Á rea−b
C (mg/ L)=
m

Á rea−b Vol . aforo( mL)

C M ( mg /L)= ×
x
m Vol . al í quiota(mL)

1L Masa tableta(g)
C M ( mg/ tableta ) =C M ( mg/L ) ×Vol . aforo muestra ( mL ) × ×
x x
1000 mL Masa muestra ( g)

1L 1 1000 g
C M ( mg/kg )=C M ( mg/ L ) ×Vol . aforo muestra ( mL ) × × ×
x x
1000 mL Masa muestra ( g) 1 kg

1 kg 1g
C M ( % p/ p )=C M ( mg/kg ) × × × 100
x x
1000 g 1000mg

Ejemplo:

El área de las muestras se presentan en la tabla 8, la muestra M2 se midió por triplicado

presentándose el promedio en dicha tabla.

Tabla 9. Resultados de la señal obtenida para las muestras de ácido ascórbico en

vitamina C.

Señal
ID
(ua)
M1 199437,3
M2 282998,2
M3 189401,5
223945,6
Promedio
7

Se aplicó la prueba de contraste de valores anómalo Q de Dixón para la señal obtenida

para la muestra 2, entonces se tiene,

Ecuación:

|Valor sospec h oso−valor má s cercano|

Q=
( Valor m á s grande−valor m á s peque ñ o )

Ejemplo:

|282998,3−199437,3|
Qexp= =0,89
( 282998,2−189401,5 )

15
 Qcri=0,970 ,n=3 y t=95 % de confianza

Qcri >Qexp por lo cual no se rechaza el valor.

Como no se rechaza el valor sospechoso, entonces se tiene para M1 lo siguiente:

199437,3−61672,867
C M 1 (mg/ L)= =13,18 mg/ L
10446,794

25,00mL
C M 1 (mg/ L)=13,18× =824,20 mg/ L
0,40 mL

82 4,20 mg 1L 3,5315 g
C M 1 ( mg/tableta )= ×100,00 mL × × =864,984 mg/ tableta
L 1000 mL 0,3365 g

1L 1 1000 g
C M 1 ( mg /kg )=824,20 mg/L ×100,00 mL × × × =244933,135mg/kg
1000 mL 0,3365 g 1 kg

mg 1 kg 1g
C M 1 ( % p/ p )=244933,135 × × ×100 %=24,49 % p/ p
kg 1000 g 1000 mg

 Determinación del error de la concentración en mg/L, mg/comprimido, mg/kg

y %p/p

Ecuación:

√
2
Sr 1 1 ( yc− y )
Sc (mg/ L)= + +
m M N m2 S xx

√( )( )( )( )
2 2 2 2
S Vol. aliq S aforo S Vol. a foro muestra S Masa muestra
SC (mg/ L)=C M 1 (mg / L)× + + +
Vol . aliq Vol . aforo Vol . aforo muestra Masamuestra

√( )( )( )(
2 2 2
Sc (mg /L) S Vol. aforomuestra S Masamuestra S Masatableta
SC (mg/tableta)=C M 1 (mg/tableta)× + + +
C M 1 (mg/ L) Vol . aforo mues t ra Masa muestra Masa table

16
 √( )( )( )
2 2 2
S c ( mg/L) SVol .aforo muestra S Masamu e stra
SC (mg/kg )=C M 1 (mg/kg)× + +
C M 1 (mg/ L) Vol . aforo muestra Masa muestra

√( )
2
S c ( mg/kg )
Sc (% p / p)=C M 1 ( % p / p)
C M 1 ( mg /kg )

Ejemplo:

√
2
19867,830 1 1 ( 199437,3−235350,817 )
Sc ( mg/ L ) = + + =1,52 mg/ L
10446,794 3 4 ( 10446,794 )2 ( 221,1125 )

(√ ) ( ) (
mg 2
0,001
)( )( )
2 2 2 2
L 0,03 mL 0,05 mL 0,10 mL 0,0001 g
SC ( mg / L )=824,20 mg/ L× + + + + =41,57 mg/L
mg 25,00 mL 50,00mL 100,00 mL 0,3365 g
0,400
L

(√ ) (
2
mg
41,57
SC ( mg /tableta ) =864,984 mg/tableta ×
824,20
L
mg
+
100,00mL
+
0,3365 g
+ ) (
0,10 mL 2 0,0001 g 2 0,0001 g 2
3,5315 g ) (
=43,63 mg/ta )
L

(√ ) ( ) (
2
mg
41,57
)
2 2
L 0,10 mL 0,0001 g
SC ( mg/kg ) =244934 mg/kg × + + =12355,47 mg/kg
mg 100,00 mL 3,5315 g
824,20
L

√( )
2
mg
12355,47
kg
Sc ( % p/ p )=24,49 % p / p × =0,05 % p/ p
mg
244934,00
kg

Reporte de la concentración de ácido ascórbico en la muestra MA1

C M 1 (mg/ L)=( 824,20 ± 41,57 ) mg/ L

C M 1 (mg/ tableta)= ( 864,98± 43,63 ) mg/tableta

C M 1 (mg/kg)=( 244933,13± 12355,47 ) mg/kg

17
 C M 1 ( % p/ p )=( 24,49 ± 0,05 ) % p/ p

 Apéndice 7: Determinación del coeficiente de variación CV (%)

Ecuaciones:

d esv Std
CV ( % )= x 100 %
Conc promedio

Ejemplo:

307
CV ( % ) ( mg/ L )= x 100 %=31,7
971

353,37
CV ( % ) ( mg/tableta ) = x 100 %=34,1
1034,81

100061,71
CV ( % ) ( mg/ Kg )= x 100 %=34,1
293022,45

10,01
CV ( % ) ( % p/ p )= x 100 %=34,1
29,30

 Apéndice 8: intervalos de confianza al 95% de significancia

Ecuación:
s
μ= x ± t n−1
√n
Ejemplo:

Para dos grados de libertad al 95% de significancia, t = 4,303.

(
μ= 971,83 ± 4,303 ×
307
√3 )
mg/ L=( 971,83 ± 762,69 ) mg/L

(
μ= 1034,81 ± 4,303×
353,37
√3 )
mg/comprimido= (1034,81 ± 877,27 ) mg /tableta

18
 (
μ= 293022,45 ± 4,303 ×
100061,71
√3 )
mg/kg=( 293022,45 ± 248587,13 ) mg /kg

(
μ= 29,30 ± 4,303 ×
10,01
√3
p
)
% = (29,30 ± 24,86 ) % p/ p
p

 Apéndice 9. Cromatogramas obtenidos a través de la técnica HPLC para la

determinación del flujo óptimo

o Flujo 0,800 ml/min:

Gráfico 1. Cromatograma para el estándar 1 a un flujo de 0,800 ml/min.

 Determinación de número de platos teóricos para un flujo de 0,800 mL/min.

( )
2

( )
2
tR 2,378
N=16 x =16 x =4682,89
W 0,139

 Determinación de la altura de platos para un flujo de 0,800 mL/min.

L 15 cm −3
H= = =3,203 x 10 cm
N 4682,89

o Flujo 0,600 ml/min:

19
 Gráfico 2. Cromatograma para el estándar 1 a un flujo de 0,600 ml/min.

 Determinación de número de platos teóricos para un flujo de 0,600 mL/min.

N=16 x ( )
tR 2
W
=16 x(0,200 )
3,227 2
=4165,41

 Determinación de la altura de platos para un flujo de 0,600 mL/min.

L 15 cm −3
H= = =3,601 x 10 cm
N 4165,41

o Flujo 0,400 ml/min:

20
 Gráfico 3. Cromatograma para el estándar 1 a un flujo de 0,400 ml/min.

 Determinación de número de platos teóricos para un flujo de 0,400 mL/min.

( )
2

( )
2
tR 4,875
N=16 x =16 x =4648,76
W 0,286

 Determinación de la altura de platos para un flujo de 0,400 mL/min.

L 15 cm −3
H= = =3,226 x 10 cm
N 4648,76

 Apéndice 10. Cromatogramas de los estándares de calibración a partir del

Ácido Ascórbico.

o Solución estándar 1:

21
Gráfico 4. Cromatograma para el estándar 1, primera réplica.

Gráfico 5. Cromatograma para el estándar 1, segunda réplica.

22
 Gráfico 6. Cromatograma para el estándar 1, tercera réplica.

o Solución estándar 2:

23
 Gráfico 7. Cromatograma para el estándar 2.

o Solución estándar 3:

Gráfico 8. Cromatograma para el estándar 3.

24
 o Solución estándar 4:

Gráfico 9. Cromatograma para el estándar 4.

 Apéndice 11. Cromatogramas de las muestras preparadas a partir de la

Vitamina C Letisan ®.

o Solución muestra 1:

25
 Gráfico 10. Cromatograma para la muestra 1.

o Solución muestra 2:

Gráfico 11. Cromatograma para la muestra 2, primera réplica.

26
Gráfico 12. Cromatograma para la muestra 2, segunda réplica.

Gráfico 13. Cromatograma para la muestra 2, tercera réplica.

27
o Solución muestra 3:

Gráfico 14. Cromatograma para la muestra 3.

28