Universidad Nacional Autónoma de

México
Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Informe Nro. 4: Cromatografía de

compuestos orgánicos

CURSO : LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA

Integrantes: Calzada Santos Kevin

Morales Morales David
I.INTRODUCCION

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de

mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia. Es
un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo
objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias
sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una
retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación
efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la
mezcla.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen
mutuamente:

 Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y

que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
 Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad
analítica). En este caso, las cantidades de material empleadas son
pequeñas.

II._ OBJETIVOS

-Conocer la cromatografía como técnica de separación de mezclas de

sustancias, sus características y los factores que en ella intervienen.
-Estudiar la incidencia del coeficiente de reparto entre la fase móvil y la fase
estacionaria.
-Analizar la influencia del solvente en la separación cromatográfica.
-observar las diferentes características de la placa en la cromatografía.

III.FUNDAMENTO TEORICO

CROMATOGRAFIA
¿En qué consiste?

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La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad
la separación de mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción
de cada componente en otra sustancia. De forma general, consiste en pasar
una fase móvil (una muestra constituida por una mezcla que contiene el
compuesto deseado en el disolvente) a través de una fase estacionaria fija
sólida. La fase estacionaria retrasa el paso de los componentes de la muestra,
de forma que los componentes la atraviesan a diferentes velocidades y se
separan en el tiempo. Cada uno de los componentes de la mezcla presenta un
tiempo característico de paso por el sistema, denominado tiempo de
retención. Cuando el tiempo de retención del compuesto deseado difiere del
de los otros componentes de la mezcla, éste se puede separar mediante la
separación cromatográfica.

La separación de los diferentes componentes de una mezcla que se

encuentran en un líquido o gas es el resultado de las diferentes interacciones
de los solutos a medida que se desplazan alrededor o sobre una sustancia
líquida o sólida (la fase estacionaria). Las diversas técnicas para la separación
de mezclas complejas se fundamentan en la diversidad de afinidades de las
substancias por un medio móvil gas o líquido y un medio absorbente
estacionario (papel, gelatina, alúmina o sílice) a través del cual circulan.

 ¿Por qué se separan los componentes?

   Dejamos que se mueva la mezcla por un soporte y los componentes se

separan por que se mueven a diferentes velocidades, debido a las diferentes
fuerzas de adsorción que ejerce el soporte sobre cada elemento, así de fácil. 
Si no nos hemos equivocado es adsorción, que puede confundirse con
absorción, pero no es lo mismo. Vamos a explicarlo.
La absorción es cuando una sustancia se introduce en la estructura de otra.
Ejemplo: una esponja absorbe agua, entonces si cortamos la esponja en
pedazos vamos a encontrar agua en todas partes de la estructura de la
esponja 

   La adsorción es un fenómeno superficial, la sustancia adsorbida no se

introduce en el volumen del cuerpo, sino solo se adhiere a la superficie.

 ¿Queda claro la diferencia? Pues ahora que ya sabemos lo que es la

adsorción veamos otra definición de cromatografía:

   La cromatografía es una separación física de los componentes de una

mezcla basado en la adsorción selectiva de los componentes de la mezcla al
moverse por un soporte.

   Imaginemos el rotulador anterior, si pintamos sobre una tira de papel de filtro

o secante con el rotulador un poco más arriba de la base de la tira de papel (el
papel será el soporte) y ahora lo metemos en un recipiente con alcohol en la
base del recipiente, el alcohol moja la base de la tira de papel, asciende por las
tiras de papel y al llegar a la tinta del rotulador que pintamos, disuelve la tinta y
sigue subiendo hasta provocar la separación de los pigmentos. 

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   Esto se produce por las distintas velocidades a las que se mueven los
pigmentos por el papel cuando se mojan con el alcohol y se mueven. Abajo hay
un video con ejemplo ya realizados para que los puedas ver.

   Como vemos hay una fase fija que será la colocación de la mezcla en el
papel y otra móvil que será la subida del alcohol por el papel. La fase fija se
hace con papel (sólido) y la móvil se hace con un líquido, el alcohol. Más
adelante explicaremos las fases cromatografías. Aquí tienes una imagen del
ejemplo de la tinta del rotulador.

   ¿Para qué se utiliza la Cromatografía?

   La cromatografía se utiliza para lograr la separación de los componentes de

una mezcla como para medir la proporción de cada elemento en la mezcla.

   Fases de la cromatografía

   Las cromatografías se hacen en dos fases. Una estática y otra móvil. 

   En la fase estática o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo,

por ejemplo papel. En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en
nuestro ejemplo un papel.

   En la fase móvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya está
sobre el soporte de la fase estática, por ejemplo un líquido que se mueve por el
papel con la mezcla. En la fase móvil empezará el proceso de separación de
los componentes de la mezcla al moverse a distintas velocidades por el líquido
los distintos componentes de la mezcla sobre el papel.

   Tipos de Cromatografía

   Aunque hay muchas y variadas técnicas cromatográficas, el objetivo de todas

es separar las sustancias que forman una mezcla y enviarlas secuencialmente
a un detector para que las determine y cuantifique.

   Todas se basan en el mismo fenómeno: permitir que las sustancias que

forman una mezcla entren en contacto con dos fases (un líquido y un gas, un
sólido y un líquido, etc.). Una de las fases es estática (no se mueve) y tenderá
a retener las sustancias en mayor o menor grado; la otra, fase móvil, tenderá a
arrastrarlas. Cada sustancia química tiene distinta tendencia a ser retenida y a
ser arrastrada.

   Dependiendo de la naturaleza de la fase estática y de la fase móvil se

pueden distinguir distintos tipos de cromatografía

   a) Cromatografía sólido-líquido. La fase estática o estacionaria es un sólido y

la móvil un líquido.

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   b) Cromatografía líquido-líquido. La fase estática o estacionaria es un líquido
anclado a un soporte sólido.

   c) Cromatografía líquido-gas. La fase estática o estacionaria es un líquido no

volátil impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas.

   d) Cromatografía sólido-gas. La fase estacionaria es un sólido y la móvil un

gas.

   Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la

mezcla y la fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre.

   a) Cromatografía de adsorción. La fase estacionaria es un sólido polar capaz

de adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo
polar.

   b) Cromatografía de partición. La separación se basa en las diferencias de

solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil,
que son ambas líquidas.
   
   c) Cromatografía de intercambio iónico. La fase estacionaria es un sólido que
lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar
por aquellos iones presentes en la fase móvil.

TECNICAS DE SEPARACIÓN:

La cromatografía y métodos de separación clásicos se basa en la separación

de componentes de una muestra. Estas técnicas no son de caracterización
propiamente dicha; las propiedades de los materiales dependen de los componentes y
de la proporción existente entre ellos.

Estas técnicas no dan información de la naturaleza de los componentes, para

eso se necesitan otros métodos de análisis.

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1. Mecanismos de Separación:

a) Separación por adsorción (cromatografía de adsorción):

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un
sólido activo (componentes con polaridad baja o media).

b) Separación por reparto (cromatografía de reparto):

Diferente solubilidad en fases estacionaria y móvil (Componentes con
polaridad media o alta).

c) Separación por tamaño molecular (Cromatografía de permeación de gel,

de tamiz molecular o de exclusión por tamaños):

Parámetros de columna
 Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados

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 Límite de exclusión: M mínimo a partir del cual las macromoléculas
no experimentan retención.

Las moléculas pequeñas penetran en los poros de las partículas de gel, por lo que
necesitan más tiempo para salir al final de la columna. Las moléculas grandes, en
cambio, al no penetrar en las partículas de gel se mueven con el disolvente a una
velocidad mayor de elución y salen antes de la columna. Por tanto, a mayor masa
molecular menor tiempo de elución. Este método permite separar por tamaños
moleculares siendo posible obtener incluso distribuciones de masas moleculares a 6
distintos tiempos de elución.
 d) Separación por Intercambio iónico:
La separación se basa principalmente en la diferente afinidad para el
intercambio de iones de los componentes de la muestra.

Las especies cargadas negativamente se unen a la matriz sólida cargada

positivamente y son retenidas, mientras que las especies positivas son
rechazadas. De esta manera en función de la carga las especies se eluyen a
distintos tiempos dando lugar a la correspondiente separación.
La elución de las especies retenidas se consigue cambiando el pH del disolvente
hasta igualarlo a su punto isoeléctrico o hasta invertir su carga neta.

“Una separación puede estar basada en la conjunción de diversos mecanismos”

2. Métodos de análisis cromatográfico:

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a) Análisis por desarrollo (cromatografía en papel o capa fina).
b) Análisis por elución (cromatografía de gases, cromatografía líquida).
c) Análisis frontal.
d) Análisis por desplazamiento.

Análisis por desarrollo

Análisis por elución

Análisis por desarrollo

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3. Clasificación de acuerdo con la forma del lecho cromatográfico:

a) Cromatografía en columna.
a. Columna empaquetada.
b. Columna tubular abierta.
b) Cromatografía plana (o de lecho abierto).
a. Cromatografía en pape.
b. Cromatografía en capa fina (TLC).

4. Clasificación de acuerdo con el estado físico de la fase móvil:

a) Técnicas cromatográficas.
 GLC
 GSC
 LLC
 LSC
b) Cromatografía de gases (siempre en columna).
c) Cromatografía Líquida (en columna o sobre plano).
 Cromatografía Líquida de Alta Eficacia o de Alta Presión, HPLC.
d) Cromatografía con fluido supercrítico.

5. Técnicas especiales:

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 a) Cromatografía con fase invertida
b) Cromatografía con fase normal
c) Análisis isocrático (composición F. móvil constante)
d) Elución con gradiente (Composición F. móvil cambia de forma continua)
e) Elución en etapas o escalonada (Composición F. móvil cambia de forma
escalonada)
f) Cromatografía bidimensional (etapas adicionales de separación)

CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA

La cromatografía en capa fina (en inglés thin layer chromatography o TLC) es
una técnica analítica rápida y sencilla, muy utilizada en un laboratorio de
Química Orgánica. Entre otras cosas permite:
- Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así,
por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación.
- Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser
idénticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma
sustancia.
- Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar cómo
desaparecen los reactivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es
lo mismo, saber cuándo la reacción ha acabado. La muestra a analizar se
deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o aluminio que
previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase
estacionaria). Entonces, la lámina se coloca en una cubeta cerrada que
contiene uno o varios disolventes mezclados (eluyente o fase móvil). A medida
que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a través del adsorbente,
se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra
entre el disolvente y el adsorbente.

Adsorbentes y eluyentes

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Los dos adsorbentes (fase estacionaria) más ampliamente utilizados son el gel
de sílice (SiO2) y la alúmina (Al2O3), ambas de carácter polar. La alúmina
anhidra es el más activo de los dos, es decir, es el que retiene con más fuerza
a los compuestos; por ello se utiliza para separar compuestos relativamente
apolares (hidrocarburos, haluros de alquilo, éteres, aldehídos y cetonas). El gel
de sílice, por el contrario, se utiliza para separar sustancias más polares
(alcoholes, aminas, ácidos carboxílicos). El proceso de adsorción se debe a
interacciones intermoleculares de tipo dipolo-dipolo o enlaces de hidrógeno
entre el soluto y el adsorbente. El adsorbente debe ser inerte con las
sustancias a analizar y no actuar como catalizador en reacciones de
descomposición. El adsorbente interacciona con las sustancias mediante
interacción dipolo-dipolo o mediante enlace de hidrógeno si lo presentan. El
orden de elución de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la
fase móvil o
eluyente. El eluyente puede ser un disolvente único o dos miscibles de distinta
polaridad. En el siguiente
recuadro se recoge por orden creciente de fuerza eluyente los disolventes más
comúnmente empleados.
Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato de etilo <
acetona < 2-propanol < metanol < agua
En general, estos disolventes se caracterizan por tener bajos puntos de
ebullición y viscosidad, lo que les permite moverse con rapidez. Raramente se
emplea un disolvente más polar que el metanol. Usualmente se emplea una
mezcla de dos disolventes en proporción variable; la polaridad de la mezcla
será el valor promediado en función de la cantidad de cada disolvente
empleada. El eluyente idóneo para cada caso ha de encontrarse por "el método
del ensayo y del error".
Determinación de Rf
La retención se puede explicar en base a la competencia que se establece
entre el soluto a separar y la fase móvil por adsorberse a los centros activos
polares de la fase estacionaria. Así, las moléculas de soluto se encuentran
adsorbidas en la fase estacionaria y a medida que se produce la elución van
siendo desplazadas por la fase móvil. La retención y la selectividad en la
separación dependen de los valores respectivos de las constantes de los
diferentes equilibrios químicos que tienen lugar, que están en función de:
- la polaridad del compuesto, determinada por el número y naturaleza de los
grupos funcionales presentes. Los solutos más polares quedarán más
retenidos puesto que se adsorben más firmemente a los centros activos de la
fase estacionaria, mientras que los no polares se eluirán con mayor facilidad.
- naturaleza del disolvente. Así, para un mismo compuesto, un aumento en la
polaridad del disolvente facilita su desplazamiento en la placa.

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La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde
el origen de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada
compuesto en unas condiciones cromatográficas determinadas (adsorbente,
disolvente, tamaño de la cubeta, temperatura, etc.). Debido a que es
prácticamente imposible reproducir exactamente las condiciones
experimentales, la comparación de una muestra con otra debe realizarse
eluyendo ambas en la misma placa.
Para calcular el Rf se aplica la siguiente expresión:
Rf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida por el
eluyente (Y)

La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha.

Si ésta es excesivamente grande se obtendrá un valor erróneo del Rf. Se
recomienda elegir un eluyente en el que los componentes de la mezcla
presenten un Rf medio en torno a 0.3-0.5. Para compuestos poco polares, se
debe utilizar un disolvente apolar como el hexano. En el caso de compuestos
con polaridad media, se aconseja utilizar mezclas hexano/acetato de etilo en
distintas proporciones. Los productos más polares, requieren disolventes más
polares como mezclas de diclorometano/metanol en distintas proporciones.

Revelado de las placas

La mayor parte de las placas de cromatografía llevan un indicador fluorescente

que permite la visualización de los compuestos activos a la luz ultravioleta (254
nm). El indicador absorbe la luz UV y emite luz visible. La presencia de un
compuesto activo en el UV evita que el indicador absorba la luz en la zona en
la que se encuentra el producto, y el resultado es la visualización de una
mancha en la placa que indica la presencia de un compuesto.

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En el caso de compuestos que no absorben luz UV, la visualización (o
revelado) del cronograma requiere utilizar un agente revelador. Este tiene que
reaccionar con los productos adsorbidos proporcionando compuestos
coloreados.

IV.MATERIALES
-Tubo de prueba.
-beaker

-capilares

-mechero
-camara de revelado
-Cromatoplaca.

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-papel whatman

-Silicagel G activado.

V.Procedimiento
 Se toma el capilar y en la parte central a cierta distancia
se pasa fuego para partirla por la mitad de la forma que
queden pequeños orificios.

 Una vez separados y ya teniendo los 2 capilares, se toma con estos partes de
la muestra estándar y se vierte en la cromatoplaca aprox. A 10mm hacia arriba
desde el borde inferior y 5 mm al lado de los costados, se repite esto tanto en
derecha como izquierda.

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 Introducir la cromatoplaca en la cámara de saturación y esperamos que el líquido
el que a su vez contiene 2 ml del sistema solvente. Cuando el solvente este por
llegar al borde superior retirarla de la cámara, marcar el frente de solvente, dejar
secar.

 Llevamos la cromatoplaca a que sea revelado, con ayuda de una manguera

y con el líquido revelador soplamos a cierta distancia del papel hasta que
se produzca el revelado

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  Finalmente calculamos el Rf

VIII. CONCLUSIONES
 La cromatografía de capa fina (TLC) es una técnica muy simple, que
presenta una gran utilidad en separaciones de compuestos para
llevar a cabo un análisis cualitativo.
 Resulta particularmente útil en la separación de colorantes, puesto
que, al tratarse de sustancias detectables a simple vista, no se
requiere la etapa de revelado de las manchas.

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 En los tintes comerciales estudiados, esta técnica ha permitido detectar
la presencia de hasta 6 colorantes distintos en una misma formulación y
comparar los constituyentes de los diferentes tintes.
 Dado que la cuantificación de los compuestos separados por TLC
presenta una dificultad notable, los resultados obtenidos por esta técnica
pueden emplearse como etapa previa a un estudio por HPLC.

BIBLIOGRAFÍA

 http://depa.pquim.unam.mx/~fercor/dqo/manuales/1311/p7.pdf

 http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis

17
 Remington Farmacia. Segunda Edición. Editorial Médica Panamericana.

 Principio y aplicaciones de la cromatografía. Miriam Barquero Quiroz. Serie

Química.

 Química orgánica. Morrison y Boyd. Quinta Edición 1998. Impreso en México.

 Química orgánica: Fundamentos teórico-prácticos para laboratorio. Lydia

Raquel. Impreso en España.

 Química orgánica. Aliger Cava de Jongh Jonhson. Segunda Edición. Impreso

en España.

 Química orgánica: conceptos y aplicaciones. Philip S. Bailey, Christina A.

Bailey – 1998
 ABBOT D. y Andrews R.S. Introducción a la Cromatografía. 3a. Ed. Alhambra,
Madrid, 1970.

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