LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL II

CAFEÍNA EN BEBIDAS ENERGIZANTES

Integrantes: Diego Aceituno López.

Matías Carrillo Fernández.

Profesor: Jaime Carmy Karmy.

Fecha: 17/06/2021
Introducción.

En este práctico se determina la cantidad de cafeína en una

muestra de bebida energética, se procederá a realizar una
normalización de pH, para luego hacer una precipitación de las
proteínas, y por último se inyecta la solución resultante en el HPLC.
Todo esto se cuantificará realizando gráficos por medio del estándar
externo y una curva de calibración.

Parte experimental.

Materiales.

- Pipeta aforada 30 mL.

- Vaso pp 250 mL.
- Matraz aforado 250 mL.
- Papel filtro Watman 1.
- Jeringa con aguja para 3 mL
- Jeringa roma.
- Filtro millipore de 0.45 um.

Equipo

- cromatógrafo liquido de alta eficiencia (HPLC).

- Columna RP – 18.

Reactivos y soluciones:

- Cafeína p.a.
- Reactivo de Carrez I: Pesar 36 g de hexaciano ferrato de
potasio trihidratado y diluir a 1 L
- Reactivo de Carrez II: Pesar 72 g de sulfato de cinc
heptahidratado y diluir a 1 L
- Metanol grado HPLC.
- Hidróxido de amonio p.a.
- Curva de calibración: Preparar 100 mL de una solución de
cafeína de concentración 250 ppm.
- Curva de trabajo: A partir de la solución stock y por dilución
preparar la curva de calibración, tomando como volumen final
100 mL, de las siguientes concentraciones: 4, 8, 20, 40, 60 y
100 ppm.
Procedimiento:

Preparación de la muestra:

- Se toma una alícuota de 30 mL de muestra y se deposita en

un vaso de 250 mL
- Se añaden 25 mL de hidróxido de amonio concentrado y se
deja reposar por 15 minutos.
- Se neutraliza la mezcla anterior con ácido clorhídrico
concentrado hasta bajar el pH a 6,4 +/- 0.2 unidades.
- Se traspasa la solución anterior a un matraz de aforo de 250
mL.
- Se añaden 10 mL de cada uno de los reactivos de Carrez I y
II.
- Se enrasa y deja decantar.
- Se filtra a través de papel filtro Watman 1 o equivalente y el
filtrado se recoge en un vaso.
- Con una jeringa de 3 mL se recoge unos 2 mL de filtrado, se
saca la aguja.
- Se coloca un filtro Millipore de 0,45 um a la salida del cuerpo
de la jeringa y se le coloca la aguja de punta roma del equipo.
- Se ambienta el inyector con la solución y posteriormente se
abre la válvula de la muestra.

Condiciones cromatográficas:

Flujo: 1,45 mL/min

Temperatura de columna 40ºC
Lambda del detector: 274 nm.
Fase móvil: 80% agua y 20% metanol.
Columna RP-18.
 Resultados.
DATOS
Volumen de muestra = 30 mL
Volumen de aforo = 250 mL
Resultados de las inyecciones:
Concentración (ppm) Area 1 Area 2 Area 3 Area Promedio DE area CV area
20 2970 3030 3050 3017 41,63 1,38
40 4550 4570 4510 4543 30,55 0,67
60 5900 6010 6020 5977 66,58 1,11
100 8890 9050 9030 8990 87,18 0,97
Muestra Problema 5200 5230 5270 5233 35,12 0,67
Tabla 1 Datos entregados.

Con las 3 áreas dadas se saca un promedio y con eso se hace la

siguiente tabla:

X Y
Concentración (ppm) Area Promedio
20 3017
40 4543
60 5977
100 8990
5233
Tabla 2 Datos para Confeccionar Grafico.

1) Con esta tabla se obtendrá un gráfico con la ecuación de la recta,

en la cual reemplazamos el área de la muestra para obtener su
concentración en ppm.

Area Promedio
10000
9000
f(x) = 74.4857142857143 x + 1534.95238095238
8000 R² = 0.999912641747714
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

Tabla 3 Grafico con ecuación de la recta.

Reemplazamos el área de la muestra en la ecuación tal que así

y = 74,486x + 1535
5233=74,486x+1535
X=49,64691 ppm

Concentración en la muestra
La ppm que obtuvimos se multiplican por (aforo/alícuota) = 250/30,
obteniendo así la concentración que hay en la muestra.

49,64691 * (250/30) = 413,72425 ppm

2) La calidad de los resultados de repetibilidad analítica se ve

afectada debido a que uno de los valores de las áreas, es mas
alejado, por lo que aumenta la desviación estándar, causando que
mientras mayor desviación estándar tenga menor confiabilidad será
su valor.
Pero en el caso de nuestra muestra problema, su desviación
estándar en 35,12, la cual es relativamente baja en comparación
con las otras, por lo tanto nuestro resultado es confiable.
 3)

Tabla 4 Formula de platos teóricos y de altura de platos teóricos.

Para calcular la altura de platos teóricos se usarán los datos del

último cromatograma, ya que parece haber sido corregido por el
programa.

Largo de la columna (cm ) 15

# Tiempo de retencion Ancho N HETP
1 37,785 1,082 19512,1135 7,68753215E-04
2 41,127 3,0158 2975,56178 5,04106489E-03
3 52,71 1,9855 11276,2899 1,33022476E-03
4 66,472 0,5556 229019,784 6,54965250E-05
Tabla 5 Desarrollo de pregunta 3.

Se usaron las ecuaciones de platos teóricos, para obtener la altura.

Conclusiones.

Según el Decreto Nº 253, sobre la ley alimentos para consumo de

deportistas, el límite máximo es de 180 ppm o 180 mg/L en
alimentos líquidos, por lo tanto, nuestra muestra (con un valor
413,72425 ppm) sobrepasa con creces el valor establecido por el
Decreto.

Bibliografía.

https://www.bcn.cl/leychile/navegar?
idNorma=206919&idParte=7296954
Tablas.

TABLA 1 DATOS ENTREGADOS. 4

TABLA 2 DATOS PARA CONFECCIONAR GRAFICO. 4
TABLA 3 GRAFICO CON ECUACIÓN DE LA RECTA. 4
TABLA 4 FORMULA DE PLATOS TEÓRICOS Y DE ALTURA DE PLATOS TEÓRICOS. 6
TABLA 5 DESARROLLO DE PREGUNTA 3. 6