LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

BY LUZ MARIA IBARRA VELAZQUEZ

Procedimiento molecular
para la identificación de
microorganismos.
CHAVEZ ALVAREZ NANCY PAOLA
SANCHEZ VELAZQUEZ DENISSE
PADILLA CASILLAS ELIZABETH
 TÉCNICAS
1. PCR (rt-PCR) Y PCR multiplex
2. Espectrometría de masas MALDI-TOF
3. Técnicas de hibridación de ácidos nucleicos.
 PCR (rt-PCR) Y PCR MULTIPLEX
La PCR (reacción en cadena de la
polimerasa) permite la amplificación
exponencial de fragmentos específicos
de DNA. .
La rt-PCR en tiempo real cuantifica la
amplificación en cada ciclo.
La PCR multiplex permite amplificar varios
microorganismos en una sola reacción.

Detección rápida de bacterias, hongos, parásitos, virus y infecciones

gastrointestinales, respiratorias, de transmisión sexual, etc.t
 PROCEDIMIENTO
Extracción y purificación del DNA de la muestra
01 clínica.

Preparación de la mezcla de reacción con buffer, dNTPs, cebadores

02 específicos, Taq polimerasa y DNA molde.

Amplificación mediante ciclos de desnaturalización, alineamiento de

03 cebadores y extensión de la cadena de DNA

Detección del amplicón mediante electroforesis en gel de agarosa o

04 fluorescencia en rt-PCR.

Identificación microbiana basada en el tamaño o secuencia del

05 amplicón.
 Espectrometría de masas MALDI-TO
permite la identificación bacteriana y
fúngica mediante el análisis de
proteínas celulares. Se menciona su
uso directo a partir de hemocultivos
positivos.
La identifica microorganismos
mediante los perfiles de proteínas
específicas, que funcionan como
una huella digital característica de
cada especie.
 PROCEDIMIENTO
Preparación de la muestra mediante extracción proteica o
01 aplicación directa de colonias bacterianas.

02 Mezcla con matriz para ionización de las proteínas.

Irradiación con un láser pulsado de la muestra que provoca la

03 desorción y ionización de las proteínas.
Separación de los iones proteicos en un tubo de vuelo libre
04 según su relación masa/carga.
Detección de los iones y obtención de los espectros de masas
05 proteicos.
Identificación por comparación con base de datos de perfiles
06 proteicos conocidos.
 Técnicas de hibridación de ácidos nucleicos
La hibridación de sondas de DNA o
RNA complementarias permite
detectar genes o secuencias
particulares de diferentes
microorganismos.

por ejemplo para detección de T.

vaginalis, Candida spp, Gardnerella
vaginalis.
 PROCEDIMIENTO
01 Obtención de RNA/DNA de la muestra problémica.

02 Desnaturalización del RNA/DNA molde.

Incubación con sonda marcada complementaria a

03
la secuencia blanco

04 Lavado para eliminar hibridación inespecífica.

Detección de la señal de la sonda hibridada

05 indicando presencia de la secuencia molde.
Thank
you!