Universidad Popular Autónoma del Estado de Puebla

Decanato de Ciencias Biológicas

Práctica 2: Reacción en Cadena de la Polimerasa.

Materia:

Bioquímica y Biología Molecular

Grupo:

15

Alumnos:

José Carlos Zaldívar Solórzano 3492577

Fernanda Geraldine Bautista Cabrera 3493590

Brisa Jeanette Hernández Méndez 3467212

Docente:

Dr. Ricardo Díaz Aragón.

Introducción

La técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), ha devenido una

poderosa herramienta que cumple con los requisitos de especificidad y sensibilidad
que exigen la caracterización de los ácidos nucleicos, pudiendo detectar con ella de
forma fácil la presencia de estas biomoléculas en una muestra, aun cuando sus
cantidades se enmarcan en el orden de los picogramos. La PCR es un método
enzimático in vitro que permite la amplificación de una secuencia específica del
ADN.

Esta técnica se basa en el uso de dos oligonucleótidos que luego de reconocer la

secuencia complementaria en la molécula de ADN, son alargados cíclicamente
mediado por la acción del ADN Polimerasa. Cada ciclo de la técnica generalmente
20 o 30 en total, implica la desnaturalización del ADN, el apareamiento de los
oligonucleótidos y la síntesis del nuevo fragmento de ADN a partir del
oligonucleótido, lo que resulta en un crecimiento exponencial de millones de copias
del fragmento seleccionado. La reacción de síntesis es catalizada por un ADN
Polimerasa termoestable, obtenida del Thermus aquaticus.

En menos de una hora de actividades enzimáticas se generan microgramos del

fragmento de ADN de interés, a partir de una copia única existente en la muestra. La
especificidad de esta reacción se mantiene aun cuando en la muestra original existe
una mezcla compleja de ácidos nucleicos, permitiendo así manipular en el
laboratorio cantidades muy limitadas de material genético.

Esta técnica ha disminuido el tiempo de trabajo requerido para producir suficiente

material de experimentación, comparado con el tiempo empleado cuando se utilizan
los métodos tradicionales de amplificación biológica. En todos aquellos
procedimientos donde se necesita el aislamiento y purificación del ácido nucleico, se
hace más fácil el trabajo cuando aplicamos la técnica de PCR, ya que el fragmento
de interés es el que prevalece en la muestra.

Como ejemplos dentro de los análisis clínicos y básicos, la metodología es muy

adecuada para la identificación de genes de resistencia a drogas contra patógenos,
permitiendo una intervención más exacta en los casos de infección hospitalaria. En
algunas enfermedades virales, el uso de la PCR es importante, tanto para la
detección, como para mensurar la carga viral. Existen kits de diagnósticos de PCR
dirigidos exclusivamente a la detección de VIH, VHC y más recientemente,
SarsCov-2 (coronavirus causador de la pandemia).
Propósito

El propósito de esta práctica es ayudarnos a entender las etapas teóricas y

prácticas relacionadas a PCR; identificando la participación y la importancia de
todos los reactivos necesarios para el funcionamiento de la técnica molecular,
además de tener la capacidad de analizar los resultados de acuerdo con los
objetivos centrales del experimento.

Resultados:
Las PCR son una manera rápida y precisa en la cual podemos diagnosticar
enfermedades infecciosas. En estas pruebas una pequeña cantidad del material
genético de muestra se copia varias veces y si hay existencia de algún virus lo
indica una máquina llamada termociclador. PCR amplifica el ADN.
Se clona el gen de la Taq ADN
polimerasa en el material
genético y de otro organismo
originando que se construya un
ADN recombinante. Las primers
se unen a las secuencias
compatibles del ADN y se
extienden a la ADN polimerasa.
El PCR de transcripción inversa
usa el RNA como molde. RT-PCR sintetiza un híbrido DNA, la transcriptasa inversa
tiene una función RNasa H que degrada la porción de RNA del híbrido. La cadena
simple de ADN funciona como molde para la formación de cDNA por el ADN
polimerasa.
Discusión Fundamentada:
Una vez amplificado, el ADN obtenido por PCR se puede usar en muchos
procedimientos de laboratorio diferentes.
Además, también se usa para muchas técnicas clínicas y de laboratorio habituales,
incluidas las huellas digitales de ADN (pruebas de paternidad o análisis forenses,
por ejemplo), detección de microorganismos (bacterias como Salmonella o Listeria
en agua o alimentos, Legionella o agua, etc., virus como el sida, la hepatitis o el
COVID-19) y el diagnóstico de trastornos genéticos.
La reacción en cadena de la polimerasa tiene algunas ventajas significativas
respecto a los tradicionales cultivos, que son el método que tradicionalmente
asociamos a la microbiología. A menudo este proceso implica ensayo-error,
descartando especie tras especie hasta que solo queda una, a través de la
observación de sus características y su comportamiento. Por ejemplo, la E. coli y la
Pseudomonas aeruginosa tienen células gramnegativos en forma de bastoncillo, por
lo que observadas con microscopio se ven similares, pero sólo mediante un cultivo
se puede comprobar que la E. coli metaboliza la lactosa.
A continuación, se presentan algunos de los puntos más importantes:
 La reacción en cadena de la polimerasa, o PCR, es una técnica para hacer
muchas copias de una determinada región de ADN in vitro (en un tubo de
ensayo en lugar de un organismo).
 La PCR depende de un ADN polimerasa termoestable, la Taq polimerasa, y
requiere de cebadores de ADN diseñados específicamente para la región de
ADN de interés.
 En la PCR, la reacción se somete repetidamente a un ciclo de cambios de
temperatura que permiten la producción de muchas copias de la región
blanco.
 La PCR tiene muchas aplicaciones en la investigación y en la práctica. Se
utiliza de forma rutinaria en la clonación de ADN, el diagnóstico médico y el
análisis forense de ADN.
En definitiva, el proceso de Reacción en cadena de la Polimerasa es
extremadamente útil para el mundo de la ciencia actual, sus funciones son muy
interesantes, tiene demasiados puntos a favor, los puntos negativos no son tan
importantes, ya que con el tiempo se pueden mejorar y seguir descubriendo cosas
nuevas día con día.
Conclusión:

Gracias a los experimentos realizados en el laboratorio virtual podemos concluir que

la PCR es un procedimiento revolucionario en la ciencia, permite replicar
muchísimas veces el ADN in vitro. La constituyen tres fases principales:
Desnaturalización, Hibridación y Elongación
Gracias a ella hemos podido lograr avances muy significativos en diferentes áreas
de la ciencia, como, por ejemplo:

● Verificar la eficacia de un medicamento

● Amplifica secuencias o incluso genes completos
● Puede detectar la presencia del DNA de un patógeno o alguna mutación que
pueda generar cáncer
● Se puede usar para reconocer especies mediante su ADN
● Identificación de cuerpos en un accidente
● Pruebas de paternidad
● Identificación de enfermedades hereditarias
● Y muchas más…

La principal ventaja de la PCR es que permite generar millones de copias de la

región de interés a partir de una o muy pocas copias del ADN molde. Es una técnica
muy robusta debido, en gran medida, a la gran capacidad de los oligonucleótidos
(en este caso de los iniciadores) de unirse firme y específicamente a sus secuencias
complementarias de ADN discriminando fácilmente entre centenares de millares de
sitios.

Como hemos comentado, la PCR es la herramienta fundamental en biología

molecular y son innumerables las aplicaciones que se derivan de ella. Las técnicas
asociadas a la PCR han avanzado de forma vertiginosa en los últimos años (ver
siguientes capítulos del manual) y cada vez se encuentran nuevas aplicaciones a la
PCR.
Bibliografía

● NIH. (s. f.). Reacción en cadena de la polimerasa. National Human Genome

Research Institute. Recuperado 24 de febrero de 2022, de

https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Reaccion-en-cadena-de-la-

polimerasa

● Larios A, B. (2020, 21 marzo). Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Recuperado 24 de febrero de

2022, de https://es.slideshare.net/Byralaal/reaccin-en-cadena-de-la-

polimerasa-pcr#:%7E:text=Conclusi%C3%B3n%20%EF%82%97Describimos

%20que%20la,enfermedades%20gen%C3%A9ticas%2C%20prenatales%20y

%20oncol%C3%B3gicas.

● A.S.D. (2019, 13 diciembre). PCR: Reacción en cadena de la polimerasa.

PCR: reacción en cadena de la polimerasa. Recuperado 24 de febrero de

2022, de http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/pcr.pdf