BIOLOGÍA MOLECULAR.

EXAMEN FINAL
NOMBRE: Jessica Tatiana Rubio - Mario Andrés Flórez CÓDIGO:1611116-1611403 GRUP: B3
Jineth Estefany Tristancho -Jhefred Ascencio 1620629-1620813
1. COMO SE HACE EL MARCAJE DE SONDAS PARA LA HIBRIDIZACIÓN Y
EXPLIQUE COMO SE DETECTA CADA UNA. R// MARCAJE DE SONDAS
PARA LA HIBRIDIZACION

Preparación de laminillas: - tratamiento con Preparación de laminillas: - tratamiento con

gelatina o poli-L-lisina -siliconización gelatina o poli-L-lisina -siliconización

Prehibridación (opcional) Incubación de la Pretratamiento del tejido(opcional): a) tratamientos que

muestra con una solución Prehibridación, previenen el ruido Inactivación endógena de la enzima
Tratamiento con RNasas b) Permeabilización Ácidos
a la misma temperatura que la hibridación
diluidos Detergente/alcohol Proteasas.

Desnaturalización de la sonda y su Blanco

pH o calor Desnaturalización simultánea o Hibridación Componentes de la solución Ácidos
separada de la sonda y su blanco (si es doble nucleicos heterólogos Fosfato de sodio, EDTA, SDS, sales
cadena). Formamida Dextrán sulfato

Pasos post-hibridación Determinación de las Sonda a) Elección de la sonda ds: DNA,

Tratamiento con condiciones de Hibridación cDNA ss: RNA, oligonucleótidos ss-DNA
nucleasas (opcional) Determinación de la b) Preparación de la sonda Aislamiento de
Lavados astringentes temperatura de hibridación, fragmentos de DNA (opcional) cDNA:
pH, uso de formamida, clonaje RNA: clonaje y transcripción en
concentración de sales vectores Oligonucleótidos: síntesis química
Composición de la solución c) Marcaje de la sonda Ds DNA: random
Detección inmunológica de hibridación primed, nick translation, PCR RNA:
Bloqueo Incubación con Concentración de la sonda transcripción in vitro, RT-PCR
anticuerpos Microscopía Oligonucleótidos marcados
de fluorescencia o
sustratos colorimétricos
Microscopía, análisis de resultados Evaluación
Montaje

Determinación de la especificidad en la hibridación (controles) Tratamiento con nucleasas

Uso de sondas múltiples Uso de vectores o ácidos nucleicos heterólogos.

La detección del método depende de lo que se requiera:

a) Sensibilidad. Depende del fácil acceso que tenga la sonda marcada, la cantidad y
tipo de marca incluida en la sonda y el método de detección.
b) Resolución. La resolución de la señal puede variar de sitios específicos en una
célula, lo cual depende de la sonda marcada y del método de detección.
c) Especificidad. La especificidad de la señal depende de la selectividad del lavado y
de secuencias similares que interfieran en el pegado de la sonda.
 BIOLOGÍA MOLECULAR. EXAMEN FINAL
NOMBRE: Jessica Tatiana Rubio - Mario Andrés Flórez CÓDIGO:1611116-1611403 GRUP: B3
Jineth Estefany Tristancho -Jhefred Ascencio 1620629-1620813
d) Análisis de secciones celulares o de tejidos montados en laminillas o secciones de
tejidos que se encuentren en solución, tejidos enteros o embriones.
e) Detección múltiple de genes o productos génicos. La relación física entre genes o
regiones cromosómicas pueden ser visualizadas por el uso de distintas marcas
fluorescentes para la detección simultánea de distintos productos génicos en una
célula o tejido.
f) Programas computacionales. Estos pueden ayudar a la visualización de modelos
espaciales de transcritos en un tejido o embrión. Se pueden llevar a cabo modelos
tridimensionales.
g) Conveniencia y seguridad. Las marcas no radioactivas son más estables, seguras y
rápida
2. DEFINA: WESTER BLOT, NORTHERN BLOT, SOUTHERN BLOT. E INDIQUE
PARA CADA UNO LA APLICACIÓN.
R// WESTER BLOT: es una técnica en la cual se utiliza para detectar una
proteína especifica en una muestra de sangre o tejido. Este método implica el uso de
electroforesis para separar proteínas de una muestra, dichas proteínas se transfieren
a la superficie de una membrana lugar donde se expone un anticuerpo en específico
contra la proteína, luego, la unión del anticuerpo se detecta usando un marcador
radioactivo o químico [ CITATION Law18 \l 2058 ].
NORTHERN BLOT: Es una técnica de hibridación en la cual se separan por
medio de un gel las moléculas de RNA, dichas moléculas son transferidas a una
membrana sintética donde son detectadas con una sonda. Esta técnica es
comúnmente utilizada para identificar RNA mensajero (mRNA) derivado de genes
específicos. Es decir, en este método hay un RNA diana y la sonda para detectar la
expresión del gen es un RNA o un DNA(Brock Biología de los Microorganismos
14a Edición, s. f.).
SOUTHERN BLOT: es una técnica en la cual se hibridan sondas de secuencia
conocida con fragmentos de DNA diana que se han separado por electroforesis en
gel. En este procedimiento el DNA está en el gel y la sonda es DNA o RNA (Brock
Biología de los Microorganismos 14a Edición, s. f.).
3. INDIQUE UNA APLICACIÓN DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR Y
EXPLIQUELA PARA EL SECTOR: AGRÍCOLA, PECUARIO, SALUD
HUMANA, E INDUSTRIA.
R// SECTOR AGRICOLA: una de las aplicaciones de la biología molecular en el
sector agrícola es el mejoramiento de las plantas incorporando características
deseables por medio de la transformación genética: esto se hace detectando en el
ADN los genes ligados a las características deseadas para evitar plagas
enfermedades. Existen dos tipos de mejoramiento, el convencional el cual mejora
características puntualmente sin alterar otras características que se encuentran en el
genoma, pero posee ciertas limitaciones además de que puede causar esterilidad en
las plantas hijas. Y tambien existe el mejoramiento no convencional, el cual corrige
los errores del método convencional y hace posible el mejoramiento puntual de la
especie sin causar daños[ CITATION Wil04 \l 2058 ].
 BIOLOGÍA MOLECULAR. EXAMEN FINAL
NOMBRE: Jessica Tatiana Rubio - Mario Andrés Flórez CÓDIGO:1611116-1611403 GRUP: B3
Jineth Estefany Tristancho -Jhefred Ascencio 1620629-1620813
SECTOR PECUARIO: una aplicación de la biología molecular en el sector
pecuario se puede observar en el trabajo realizado por (Hahn von Hessberg et al.,
2015), el cual consiste en la utilización de la biología molecular para optimizar la
producción piscícola y repoblamiento de medios naturales, haciendo uso de
marcadores moleculares MicroRNA de cadena sencilla, no codificantes de ARN
que regulan la expresión de ARNm en el nivel post-transcripcional, importantes en
procesos biológicos, como la proliferación y migración de los peces.
SECTOR SALUD: una aplicación de la biología molecular en la salud humana es
el diagnóstico molecular, el cual incluye técnicas de biología molecular en
beneficio de la salud humana, detectando y/o cuantificando secuencias genéticas
específicas de ácido desoxirribonucleico (ADN), ácido ribonucleico (ARN) o
proteínas, el diagnóstico molecular se utiliza especialmente para la detección de
enfermedades infecciosas(J. Farfán, 2015).
SECTOR INDUSTRIAL: Un uso de la biología molecular es en el sector de la
industria alimentaria, en la identificación de probióticos aislados y suplementos por
medio de técnicas moleculares como por ejemplo la reacción en cadena polimerasa
(PCR) o polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP), estos
métodos son extremadamente importantes para la caracterización específica como
para la detección de cepas de microorganismos probióticos (Martínez-Barragán
et al., s. f.).
4.MENCIONE Y EXPLIQUE LOS MÉTODOS DE TRANSFORMACIÓN,
INDIQUE LAS VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE CADA UNO.
Transformación de Escherichia coli
 TRANSFORMACIÓN QUÍMICA:
Se basa en las alteraciones que produce en la permeabilidad de las envueltas
celulares el tratamiento con cationes divalentes a baja temperatura se alcanzan
frecuencias de transformación de como mucho 109 cfu/µg DNA
VENTAJAS DESVENTAJAS
Es barata, fiable y no requiere equipos Menos eficaz y más sensible al tamaño del
especializados DNA y al genotipo de la bacteria

 ELECTROTRANSFORMACIÓN:
Se basa en la desestabilización de las membranas y la formación de poros cuando
las bacterias se someten a campos eléctricos de gran intensidad se alcanzan
frecuencias de transformación superiores a 109 cfu/µg DNA
VENTAJAS DESVENTAJAS
Muy alta eficacia, gran reproducibilidad, cara, requiere equipos especializados y
menor sensibilidad al tamaño del DNA y al muy sensible a la presencia de iones en la
genotipo muestra

BIBLIOGRAFIA
 BIOLOGÍA MOLECULAR. EXAMEN FINAL
NOMBRE: Jessica Tatiana Rubio - Mario Andrés Flórez CÓDIGO:1611116-1611403 GRUP: B3
Jineth Estefany Tristancho -Jhefred Ascencio 1620629-1620813
Brock Biología de los Microorganismos 14a Edición. (s. f.). 1131.

Cerrillo, B. R. (s. f.). EVALUACIÓN FINAL CURSO DE MÉTODOS. 44.

Hahn von Hessberg, C., Vélez, M., & Grajales, A. (2015). UTILIZACIÓN DE LA

BIOLOGÍA MOLECULAR COMO MEDIO PARA OPTIMIZAR LA PRODUCCIÓN

PISCÍCOLA Y REPOBLAMIENTO DE MEDIOS NATURALES. Boletín Científico.

Centro de Museos. Museo de Historia Natural, 19(1), 85-102.

https://doi.org/10.17151/bccm.2015.19.1.6

J. Farfán, Bq. M. (2015). BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADA AL DIAGNÓSTICO

CLÍNICO. Revista Médica Clínica Las Condes, 26(6), 788-793.

https://doi.org/10.1016/j.rmclc.2015.11.007

Lawrence, B. (2018). Obtenido de National Human Genome Research Institute:

https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Western-Blot Martínez-Barragán, I.

K., González-Martínez, B. E., Campos-Góngora, E., & Barba, A. P. (s. f.).

IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE PROBIOTICOS AISLADOS DE

ALIMENTOS Y SUPLEMENTOS: COMPARACIÓN CON MÉTODOS

BIOQUÍMICOS. 8.

Wilches, A. (2004). Descripción de algunas herramientas moleculares y sus aplicaciones.

UNIVERSIDAD RAFAEL LANDÍVAR.