Amplificación del DNA (Ácido

Desoxirribonucleico) por
reacción en la cadena de
polimerasa

Coba Ruiz Enya

Giadans Velásquez Valeria
Pérez Martínez Ma Isabel
Villa Aguilar Estefany
Zacaula Aguilar Carlos Alonso
 INTRODUCCIÓN

La reacción en cadena de la polimerasa,

conocida como PCR por sus siglas en inglés
(Polymerase Chain Reaction), es una técnica
de biología molecular desarrollada en 1986
por Kary Mullis.
¿Qué es la PCR?

Algunas veces llamada "fotocopiado molecular" es la reacción

en cadena de la polimerasa (PCR).
Debido a que se necesitan considerables cantidades de una
muestra de ADN para análisis moleculares y genéticos, los
estudios de segmentos aislados de ADN son casi imposibles
sin la amplificación por PCR
¿Para qué sirve la PCR?

Ésta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su

utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil
identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias
causantes de una enfermedad, identificar personas
(cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN
amplificado. Estos usos derivados de la amplificación han
hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con
el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para
llevarla a cabo.
 Fundamento e importancia

● Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN

polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de
altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN
recién formadas entre sí tras cada fase de replicación, despues deja
que vuelvan a unirse las polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.
● Inicialmente la técnica era lenta, ya que las polimerasas se
desnaturalizaban al realizar los cambios de temperatura y era necesario
agregar nuevas polimerasas en cada ciclo.
● Todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato
llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de
reacción para controlar la temperatura necesaria para cada etapa de la
reacción.
Elementos básicos de una PCR

ADN problema - ADN del individuo a estudio

Taq polimerasa - enzima encargada de unir nucleótidos para sintetizar las
moléculas de ADN a partir del molde del ADN del paciente
Primers y oligonucleótidos - secuencias de aproximadamente 25 nucleótidos,
diseñadas para ser específicas de las zonas iniciales y finales del fragmento de
ADN que se quiere amplificar. Son necesarios, pues estos le dan la señal a la
Taq polimerasa para que comience su función
Desoxirribonucleótidos trifosfatados - adenina, timina, citosina y guanina
Cloruro magnésico - MgCl2 es el cofactor necesario para la Taq polimerasa
Cebadores: pedazos cortos cad. sencilla. Complementan bases para que el
espacio entre ellos sea copiado
 IMPORTANCIA
DEL CEBADOR

1. Se unen en los extremos de

reg. a copiar

2. Unión al molde

3. Extensión de polimerasa

4. Copia
 PASOS PCR

1. Desnaturalización

Separar cadenas de ADN

2. Templado

Unirse a sec. complementarias en el molde ADN

3. Extensión

Síntesis de nuevas cadenas

Desnaturalización

● Cadenas de ADN son calentadas y separadas a una

temperatura de 95 °C
● Se rompen uniones
Tipos de PCR

● PCR anidada: Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es utilizado como
molde para realizar una segunda amplificación con cebadores que se ubican dentro de la primera
secuencia amplificada, es decir, cuando tenemos el primer amplicón se pueden unir los cebadores y se
hace de nuevo una amplificación dentro del amplicón inicial.

● PCR in situ: Consiste en una reacción de PCR en secciones histológicas o células, donde los productos
generados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Es realizada sobre preparaciones fijas en un
portaobjetos, se realiza una primera amplificación de ADN blanco y luego detección mediante hibridación
in situ convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera pueden detectarse cantidades
pequeñísimas de genoma .
● PCR múltiplex: En la cual se amplifica más de una secuencia en una misma reacción. Consiste en
combinar en una única reacción todos pares de cebadores de los sistemas que queremos amplificar
simultáneamente, junto con el resto de los reactivos de la reacción en cantidades suficientes.

● PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR): Se ultiliza ARN como molde inicial en vez de ADN, y emplea una
transcriptasa inversa (como Tth) para realizar la síntesis de un ADN complementario al ARN (ADNc). De esta forma, el
desarrollo inicial de una RT-PCR sería:
○ 1er paso: retrotranscripción a partir del ARN.
○ 2o paso: aplificación a partir de la primera hebra de ADNc.
○ 3er paso: PCR estándar.

● PCR en tiempo real o PCR cuantitativa (qPCR):Reacción de PCR cuya principal característica es que permite
cuantificar la cantidad de ADN o ARN presentes en la muestra original, o para identificar con una muy alta probabilidad,
muestras de ADN específicas a partir de su temperatura de fusión. Se puede dividir en las técnicas basadas en fluorocromos
no específicos y en las técnicas basadas en sondas específicas.
 Análisis del producto de amplificación después de
realizar la PCR

Secuenciación directa - consiste en la obtención de la secuencia nucleótido a

nucleótido
RFLP (restriction fragment lenght polymorphism) - tras someter al amplicón a
una digestión enzimática, se obtienen fragmentos de ADN de diferente
tamaño. Se utilizan enzimas de restricción. En función de si esa secuencia se
encuentra o no en nuestro amplicón, la enzima cortará o no el ADN.
DESVENTAJAS
● Su síntesis requiere conocer la
secuencia de DNA adyacente al DNA en
cuestión
● La extrema sensibilidad de la PCR hace
que sea susceptible a la contaminación
del laboratorio
● Es difícil aplicarla a secuencias de más
de unas kilobases de longitud, por lo
cual no es útil para detectar delecciones
más grandes
BIBLIOGRAFÍA

Nussbaum R.L, McInnes R.R y Willard H.F. Genética en Medicina. 7º edición. Elsevier: México.

Antolín Sc, José RBJ. Manual CTO de Medicina y Cirugía: Inmunología; Genética. Madrid: CTO; 2018.

Jorde L, Carey J, Bamshad M. Genética Médica. 4th ed. España: ELSEVIER; 2011. pp45-47