El principio de la

sabiduría es el temor
a Jehová
Técnicas Histológicas
y Microscopía
Histología
Griego histos: tejido logos: estudio
Se refiere al estudio morfológico (anatómico)
auxiliándose del microscopio.
En otras palabras histología es sinónimo de
“anatomía microscópica”

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Técnicas histológicas
Son las diversas maneras en que se pueden preparar los
cortes.

También se puede definir como

“Pasos secuenciados con el fin de preparar un corte
histológico para que pueda observarse a través del
microscopio”

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Pasos de la Técnica Histológica
1- Obtención de la Muestra
2- Fijación
■ Lavado, Deshidratación y Aclaramiento

3- Inclusión
4- Corte
5- Tinción o Coloración
6- Montaje

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Elementos a considerar para el estudio de los tejidos

■ Preparación del tejido

■ Para observación de células VIVAS
■ Ventajas: observación directa de procesos
fisiológicos in vivo
■ Desventajas: difícil manejo y poca duración
■ Tipos de tinción utilizadas
■ Vital (inyectando colorantes inocuos directo al
animal)
■ Supravital (inyectando colorante a células luego
de su extracción del organismo)
■ Para observación de células MUERTAS (conservadas)
■ Uso del microscopio
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1) Obtención de la muestra
Capturar un corte histológico
o espécimen de un animal
anestesiado o después de la
muerte. En humanos es
posible en cirugías al extirpar
tejidos enfermos.

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8
2) Fijación
El propósito es CONSERVAR el
protoplasma con el menor grado de
alteración posible. Evita la autólisis
por enzimas liberadas por el propio
tejido.

■ Detiene procesos celulares dinámicos

■ Conserva intacta la estructura lo mas
posible
■ Aumenta la afinidad por determinados
colorantes
■ Confiere cierta rigidez al tejido
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 Formalina (formaldehido)*
Alcohol
Bicloruro de Mercurio
Simples Bicromato de potasio
Glutaraldehido y tetraóxido
FIJADORES de osmio (Microscopia
electrónica)

Líquido de Bouin
Compuestos
Líquido de Zenker
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■ Lavado, Deshidratación y Aclaración:
Previo a la inclusión se LAVA el tejido, luego se pasa
por concentraciones CRECIENTES de alcohol etílico
hasta llegar a concentración máxima (100%) para
DESHIDRATARLO y luego se ACLARA, lo cual
consiste en eliminar el agente deshidratante y sustituirlo
por un líquido que se mezcle con éste y con el medio de
inclusión.

ACLARADORES:
■ Xilol
■ Cloroformo
■ Benceno
■ Aceite de cedro
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INCLUSION EN PARAFINA
(EMBEBIMIENTO)

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3) Inclusión (embebimiento)
Se coloca el tejido en un medio de inclusión
(embebimiento) y luego se prepara el bloque
dejando solidificar el medio de inclusión para
tener una masa homogénea firme que contiene el
tejido incluido y permita realizar cortes muy
delgados.
Finalidad de la inclusión:
Proporcionar un soporte rígido (bloque de tejido)
para facilitar el corte.
Medios de inclusión:
■ Parafina
■ Celoidina
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CORTE

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CORTE

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 4) Corte
Se secciona el bloque de
parafina endurecida en el
MICRÓTOMO en cortes de
5-15 µm de espesor que
pasa al portaobjetos con
resina acrílica para adhesión
(medio de montaje).
- Se extrae el exceso de
parafina con xilol o tolueno
y se rehidrata el tejido con
alcohol de concentración
decreciente. 16
5) Tinción (coloración)
Propósito:
Destacar el contraste natural y hacer más
evidentes los componentes celulares y tisulares
del corte.

Requisitos antes de la tinción:

1) Aclarar (eliminar parafina) con XILOL,
TOLUENO u otro agente aclarador.
2) Rehidratar, pasar por concentraciones
DECRECIENTES de alcohol.
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5. Tinción
- Se tiñe con hematoxilina en agua, se deshidrata
nuevamente la muestra en alcohol en concentración
creciente.
-Se tiñe con eosina en alcohol.
-Se aclara: pasar el corte por una solución con el
aclarador (xileno o tolueno).
-Se coloca una gota de medio de montaje, esta posee
INDICE DE REFRACCIÓN IGUAL AL VIDRIO
Medio de montaje:
■ Bálsamo de Canadá
- Se coloca un cubreobjetos encima de la preparación, se
deja secar. Estando el corte listo para su observación
microscópica y su almacenamiento.

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Los colorantes de uso general identifican núcleo y citoplasma.

Por sus radicales

■ Ácidos (acidófilos). Los colorantes ácidos tienen
carga negativa.
❖ Coloración ROJO-ROSADO

■ Básicos (basófilos). Los colorantes básicos tienen

carga positiva.
❖ Coloración AZUL-VIOLETA

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20
Colorantes ácidos Colorantes básicos
-(anilina+Cl-) para +(Na+anilina-) para
teñir citoplasma: teñir núcleo y algunas
■ Eosina organelas
■ Hematoxilina
■ Hematoxilina férrica
■ Colorantes de anilina
■ Azur A
■ Azul de toluidina
■ Azul de metileno
■ Rojo neutro
■ Verde de Janus
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Los colorantes de uso específico identifican
componentes particulares.

■ Distinguen componentes de la matriz extracelular

■ Orceína o resorcina (fibras elásticas)
■ Tricrómico de Masson (fibras colágenas de verde)
■ Tricrómico de Mallory (fibras colágenas de rosa intenso)
■ Tricrómico de Mallory Azán (fibras colágenas de azul)

■ Sales metálicas que se precipitan en los tejidos (impregnación

argéntica para fibras reticulares).
■ Sales de plata
■ Sales de oro

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 Componentes que perduran después
de la fijación

Moléculas grandes (Complejos

macromoleculares):
■Nucleoproteínas

■Proteínas del citoesqueleto

■Proteínas extracelulares
■Complejos de fosfolípidos y
proteínas o hidratos de
carbono en las membranas
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 Componentes que se pierden durante la
preparación de rutina

■ Proteínas y ácidos nucleicos pequeños

■ Lípidos neutros
■ Glucógeno
■ Proteoglucanos y glucosaminoglucanos (GAGS)
■ Metabolitos intermedios, glucosa, iones de sodio
y cloro

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 FUNDAMENTO QUÍMICO DE LA
TINCIÓN

■ Acidofilia (afinidad por lo ácido, carga (-) tinción con

eosina:
■ Es la reacción de un colorante acido (-) con los
grupos catiónicos (+) de las células.
■ Filamentos citoplasmáticos
■ Componentes membranosos intracelulares
■ Fibras extracelulares (debido a los grupos amino) 25
 FUNDAMENTO QUÍMICO DE LA
TINCIÓN

■ Basofilia (afinidad por lo básico, carga neta (+) tinción

con hematoxilina:
■ Es la reacción de los colorantes básicos (+) con los
componentes aniónicos (-) de las células.
■ Heterocromatina y nucléolos (núcleo)
■ Componentes citoplasmáticos (ergatoplasma)

■ Materiales extracelulares (hidratos de carbono

debido a sus grupos sulfatos)

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HISTOQUÍMICA
Campo de la investigación cuyo objetivo es la localización de
compuestos químicos o componentes celulares ya conocidos
en regiones específicas por análisis bioquímico, que producen
sustancias coloreadas insolubles, gracias a las propiedades
químicas o físicas inherentes del tejido.

Componente: Método:
Iones hierro 🡪 Azul de Prusia (adaptación)
ADN 🡪 Reacción de Feulgen
Proteoglucanos 🡪 Reacción del ácido peryódico de Schiff (PAS)
Lípidos 🡪 Sudán III, IV, B negro
Enzimas in vivo 🡪 Sustrato + enzima = Producto coloreado
Glucógeno 🡪 Carmín de Best o PAS

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MÉTODOS MÁS MODERNOS

Inmunocitoquímica
Basada en inmunoflourescencia de complejos
antígeno-anticuerpo.
Histoquímica enzimática
Se detecta el producto de la reacción enzimática y NO la
enzima.
Hibridación in situ
Para ácidos nucleicos. Se marcan con isótopos
radioactivos cadenas monocatenarias que se unen a
segmentos de las cadenas de ácidos nucleicos.

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 Artefactos
■ Debido a la manipulación del tejido
durante la técnica histológica no todos los
cortes son perfectos. Una mala
manipulación durante la preparación
puede llevar a alteraciones que se llaman
artefactos, las cuales le quitaran calidad al
corte dificultando su interpretación.
• Encogimientos
• Precipitados
• Pliegues y arrugas
• Defectos de cuchilla
• Manejo poco cuidadoso
• Degeneración post-mortem. 29
 Biopsia por congelación
Se utiliza para la
valoración inmediata del
tejido:
Para determinar el paso
siguiente en la cirugía.
Cuando se carece de un
diagnóstico preoperatorio.
Para identificar hallazgos
inesperados.
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 MICROSCOPIO
Instrumento mas importante de la histología que mediante un
sistema óptico de lentes aumenta varias veces una imagen.
La utilidad depende de:
▪Poder de resolución
Capacidad del microscopio de separar dos puntos que están muy
unidos. Es el mas importante porque de este depende que se vean
mejor los DETALLES.
▪Aumento
Relación entre el tamaño de la imagen y el objeto. No mejora los
detalles con su incremento.

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 Microscopio óptico
Microscopios Microscopio de polarización
Microscopio de contraste de fases
de luz visible Microscopio de interferencia
Microscopio de campo oscuro

ME de
transmisión
Microscopios de Microscopio electrónico
(ME)
luz invisible ME de barrido
Microscopio de luz UV

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 MICROSCOPIA ÓPTICA (LUZ
VISIBLE)

■ Es el más utilizado

■ Trabaja en dos etapas

■ Primer aumento: OBJETIVO
■ Segundo aumento: LENTE DEL
OCULAR

■ El haz de luz de la fuente se concentra en

un punto por el CONDENSADOR que
lo dirige a la muestra que es atravesada y
llega hasta el OBJETIVO (1era etapa).

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Microscopia óptica (luz visible)

■ Generalmente son 4 objetivos

■ Pequeño aumento x 10
■ Mediano aumento x 25
■ Gran aumento x 40
■ Inmersión en aceite x100
■ Se multiplica por el aumento que brinda el LENTE
(generalmente x 10)

ENTONCES
Pequeño aumento 10 x 10 = 100 veces
Mediano aumento 25 x 10= 250 veces
Gran aumento 40 x 10= 400 veces
Inmersión en aceite 100 x 10= 1000 veces
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Microscopio de polarización
Utiliza dos primas (analizador y polarizador) para la
observación de muestras birrefringentes como fibras
musculares, fibras del tejido conectivo.

Microscopio de contraste de fases

Permite el examen de células y tejidos no teñidos y es
especialmente útil para estudiar células vivas.
Aprovecha las diferencias en el índice de refracción que
hay en diferentes partes de una muestra.

Microscopio de campo oscuro

Utiliza un condensador especial que no permite que la luz
llegue directamente al centro del lente, sino OBLICUO
por lo que se verá oscuro y las pequeñas partículas se
visualizaran como “polvo que entra por una ventana en
un cuarto oscuro”. Útil para observar quilomicrones.
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MICROSCOPIOS DE LUZ INVISIBLE

Microscopio de luz UV
Utiliza lentes de cuarzo y registra imágenes que absorben
radiación ultravioleta en fotografías. Posee un subtipo
que es la microscopia por fluorescencia.

Microscopio Electrónico de transmisión

Su fuente de iluminación es un haz de electrones
acelerados al vacío que pasa a través de la muestra y se
observa en una pantalla. Tiene mayor poder de
resolución (0.2 – 0.3 nm).

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Microscopio electrónico
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Diseñado por David A. Terrero S.

Bendiciones y Gracias
por la atención !!!!

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