Microscopia y Técnicas

de Tinción.
{ PRIMER CLASE DE HISTOLOGIA.
 Técnicas Histológicas de
Tinción.

 El estudio de células y tejidos se da frecuentemente

sobre tejidos muertos obtenidos por
biopsia/necropsia, una vez extraída la muestra es
mantenida a través de acciones químicas a las que
son sometidas inmediatamente.
Proceso de armado del Preparado/
Corte Histológico.

Se da en una serie de pasos a seguir:

1. Fijación.
2. Deshidratación.
3. Aclaramiento.
4. Inclusión.
5. Rehidratación.
6. Coloración.
 Primer Paso - Fijación:
 La muestra extraída es sometida a la acción fijadora de ciertos agentes
químicos, para preparar y preservar el material a estudiar.

 Los fijadores conservan la estructura y los componentes extracelulares

deteniendo el metabolismo celular, pueden ser individuales o mezclas:

A-Individual: el mas utilizado es el Formol, pero es un mal fijador de

membranas plasmáticas, pues no reacciona con lípidos.

B-Mezcla fijadora: la más utilizada es la de Bouin (formol, acido acético y

acido pícrico).

C-También hay fijadores físicos: frio, calor, congelación y desecación.

Segundo Paso - Deshidratación:

 Después de retirar la muestra de la solución fijadora, se debe

lavar y luego deshidratar lenta y progresivamente en
soluciones alcohólicas de concentraciones crecientes:

 70%- 80%- 90% hasta el 100%, se quita el agua de las

células y tejidos que componen la muestra, porque la
Parafina no será miscible ni en agua ni en alcohol.
Tercer Paso – Aclaramiento:

 También conocida como Diafanización; consiste en

transparentar los tejidos blandos para luego poder
teñirlos.
 Este paso se hace utilizando solventes orgánicos

como:
Xileno, Benzol y Toluol.
Miscibles tanto en alcohol, como con parafina, por lo
que es reemplazado el alcohol absoluto.
Cuarto Paso – Inclusión:
 Posteriormente se incluye la muestra en Parafina con la
finalidad de permitir cortes delgados (ya que la Parafina, aporta
gran consistencia).

 Para la inclusión, la parafina debe estar fundida (estufa a 60ºC)

que deberá ocupar todos los espacios. Al retirar la estufa, la
parafina fundida se enfría y endurece formando el Taco.

 Este se coloca en el Micrótomo que se encargará de efectuar

cortes suficientemente delgados (5-15micrometros), para
permitir que la luz pase a través de ellos.
Quinto Paso – Rehidratación:

 Se debe disolver y extraer la parafina utilizando

nuevamente xileno o el solvente orgánico.

 Se procede luego a la rehidratación mediante el

uso de soluciones alcohólicas de
concentraciones decrecientes (100-90-80%).
Sexto Paso – Coloración:
 Los cortes se colorean, se colocan en concentraciones
crecientes (90-100%) de soluciones alcohólicas para su
deshidratación y se montan en Bálsamo de Canadá, al cual se
le adhiere un cubre objetos.
 Técnicas de Coloración
 Los colorantes o sustancias coloreadas son capaces de unirse de manera más o menos
específica a estructuras del tejido aportándoles color. Hay dos tipos de colorantes los vitales
(captados únicamente por células vivas) y los de exclusión (solo son incorporadas por células
muertas).

Técnicas usadas:
Dicrómicas: Técnicas de tinción que emplea 2 colorante, ejm: H-E
Tricrón/Tricrómicas: Técnica de tinción que emplea 3 colorantes.

1-Tricrones Vitales: son aquellas técnicas de tinción que se efectúan sobre células que están
vivas, como por ejemp: el verde Jano y el azul de metileno. Inyección en organismos (contraste).

2-Tricrones Supra vitales: son aquellas técnicas de tinción que se realizan sobre tejidos vivos,
pero aislados del organismo del que proceden.
 Hematoxilina-Eosina:
La técnica de coloración Dicrómica más utilizada.
 La eosina: colorante acido, con carga negativa, reacciona con grupos
catiónicos (carga+) como ejemp: las proteínas citoplasmáticas.
Tiñen de rosado, presenta acidofilia.

 La hematoxilina: colorante básico, con carga positiva, reacciona con

grupos aniónicos (carga -) como ejemp: fosfatos de los acid. Nucleicos,
sulfatos de GAG, carboxilo de las proteínas.
Tiñe de azul, presenta basofilia.

Eosina

Hematoxilina
 Orceína:
 Tiñe color rojo, permite ver fibras elásticas y colágenas.

 Se utiliza para teñir fibras elásticas, dejando el núcleo de

un color azul intenso, los eritrocitos de rojo brillante y las
fibras colágenas en rosa.
 También se utiliza para teñir y ver las distintas fases de los
cromosomas en división celular.
 Técnica PAS (Ácido Peryódico-
Reactivo de Schiff):
 Colorante incoloro que tiñe de color rojo purpura, reacciona con:
carbohidratos (glucógeno, glucoproteínas, GAG, etc.) y
componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por
ejemplo algunas membranas celulares, células caliciformes en la
mucosa del intestino, fibras reticulares que están rodeados por
hidratos de carbono, etc.
 Oxida a los grupos hidroxilo (–OH) de dos carbonos cercanos,
formando de esta manera grupos aldehídos compuestos por
carbono, oxígeno e hidrógeno.
 De Gomori:
 Técnica Tricrómica que se usa para teñir fibrina, tejido
muscular y citoplasma.

 Compuesto por:
Hematoxilina (básico, tiñe color azul violáceo)
Crosmotropo (acido, tiñe de color rojo)
Verde luz (ácido tiñe de color verde).
 De Azán:
 Técnica Tricrómica para distinguir entre las células y
componentes extracelulares.
 Compuesto por:

Azocarmín (básico, tiñe de color rojo).

Azul de anilina (acido, tiñe de color celeste).
Orange G (acido, tiñe de color naranja).
 Hay variantes de esta técnica y una de esas es el Mallory-Azán,

especial para tejido conectivo, las fibras colágenas se tiñen de

azul con esta reacción.
 Técnica de Impregnación
Argentica:
 Los tejidos son tratados con sales metálicas (de plata)
produciéndose un precipitado al ser enfrentadas dichas sales a
un agente reductor.

 Reacciona con fibras reticulares y fibras nerviosas; tiñéndolas de

color pardo/negro.
 Microscopia
 Un microscopio sea simple (un solo lente) o compuesto (varios lentes), nos permite
ver con mayor detalle lo que sería imposible ver a simple vista.
El más utilizado es el de campo claro, pero tenemos otros:

1)Microscopio campo oscuro.

2) Microscopio de fluorescencia: aprovecha la capacidad de ciertas moléculas de

fluorecer bajo luz ultravioleta.

3) Microscopio electrónico: utiliza un haz de electrones en vez de haz de luz.

4) Microscopio óptico/ de Luz/ compuesto: está constituido por dos sistemas de lentes:
• Parte mecánica/ estático: -Tubo –Revólver Porta objetivos –Brazo
–Platina –Pie/Base –Tornillo Macrométrico –Tornillo Micrométrico.
• Parte Óptica: -Ocular/es –Objetivo/s –Aparato de iluminación: espejo,
condensador y diafragma.
Microscopio Óptico
Unidades de Medida
 Macroscópico: -Metro (m) –Milímetro (mm,
milésima parte del metro).

 Microscópico: -Micrón (µ )/ Micrómetro (µm,

la milésima parte de un milímetro).

 Submicroscópico: -Milimicrón (mµ)/

Nanómetro (nm, la milésima parte de un
micrómetro). –Angstrom (A, la diez milésima
de un micrómetro).