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y Microscopía
Histología
Griego histos: tejido logos: estudio
Se refiere al estudio morfológico (anatómico)
auxiliándose del microscopio.
En otras palabras histología es sinónimo de
“ anatomía microscópica”
Citología (células)
Histología (tejidos)
Organología (órganos)
Componentes del cuerpo
Células
Líquidos corporales
Sustancia intercelular
Componentes del tejido
Células (organelos, citoesqueleto e inclusiones)
Liquido tisular
Sustancia intercelular (matriz extracelular)
1. Forme (fibrosa)
Fibras colágenas
Fibras elásticas
Fibras reticulares
2. Amorfa (fundamental)
Glucosaminoglucanos
Proteoglucanos
Glucoproteinas
Breve Historia
Siglo XVII
Robert Hook y Marcello Malpighi utilizaron lentes simples.
Hook denominó“ célula” a las celdas observadas e identifico
su núcleo.
Malpighi es considerado “ padre de la histología”
Siglo XIX
Invención del micrótomo, de las técnicas histológicas y
microscopios compuestos mas avanzados.
Teoría celular por Schleiden y Schwann.
Virchow distingue los 4 tejidos básicos
Elementos a considerar para el estudio de los tejidos
3- Inclusión
4- Corte
5- Tinción o Coloración
6- Montaje
1) Obtención de la muestra
Obtener un espécimen de un animal
anestesiado o después de la muerte. En
humanos es posible en cirugías al extirpar
tejidos enfermos
2) Fijación
El propósito es CONSERVAR el protoplasma con
el menor grado de alteración posible. Evita la
autolisis por enzimas liberadas por el propio
tejido.
ACLARADORES:
Xilol
Cloroformo
Benceno
Aceite de cedro
3) Inclusión (embebimiento)
Se coloca el tejido en medio de inclusión
(embebimiento) y luego se prepara el bloque dejando
solidificar el medio de inclusión para tener una masa
homogénea firme que contiene el tejido incluido.
Finalidad de la inclusión:
Proporcionar un soporte rígido (bloque de tejido) para
facilitar el corte.
Medios de inclusión:
Parafina
Celoidina
4) Corte
Se Secciona el bloque de parafina endurecida
en el MICRÓTOMO en cortes de 3-10 µm de
espesor que pasa al portaobjetos con albúmina
de huevo en su superficie (para adhesión)
5) Tinción (coloración)
Requisitos:
1) Aclarar (eliminar parafina) con XILOL,
TOLUOL u otro agente aclarador
2) Pasar por concentraciones DECRECIENTES de
alcohol
Propósito:
Destacar el contraste natural y hacer más
evidentes los componentes celulares y tisulares
del CORTE
6) Montaje
- Se quita el exceso de colorante lavando con agua o alcohol
(según solvente del colorante)
-Se deshidrata (alcohol en concentraciones CRECIENTES)
-Se aclara: pasar el corte por una solución con el aclarador.
-se coloca una gota de medio de montaje, esta posee INDICE
DE REFRACCIÓN IGUAL AL VIDRIO
Medio de montaje:
Bálsamo de Canadá
Coloración ROJO-ROSADO
Coloración AZUL-VIOLETA
Colorantes ácidos Colorantes básicos para
para teñir
teñir núcleo y algunas
citoplasma:
organelas
Eosina
Ácido pícrico
Hematoxilina
Hematoxilina férrica
Ácidos azoicos
Colorantes de anilina
Cromotropo
Ácidos diazoicos
Azur A
Azul de toluidina
Azul de trípano
Rojo de tripano Azul de metileno
Rojo neutro
Verde de Janus
Los colorantes de uso específicos:
Distinguen componentes de la matriz extracelular
Orseina o resorcina (fibras elásticas)
Tricrómico de Masson (fibras colágenas de verde)
Tricrómico de Mallory (fibras colágenas de rosa intenso)
Tricrómico de Mallory Azán (fibras colágenas de azul)
Coloración Simple
Se colorean solamente algunos elementos del
preparado (núcleo, fibras elásticas, etc.).
Coloración Combinada
Se tiñen los elementos nucleares y citoplasmáticos
recurriéndose, generalmente, al empleo sucesivo de
colores básicos y ácidos que contrastan por sus colores.
Ej.: H y E
Histoquímica
Campo de la investigación cuyo objetivo es la localización de
compuestos químicos ya conocidos en regiones especificas o
componentes celulares por análisis bioquímico, que producen
sustancias coloreadas insoluble. Gracias a las propiedades
químicas o físicas inherentes del tejido.
componente: Método:
Iones hierro Azul de Prusia (adaptación)
ADN Reacción de Feulgen
Proteoglucanos Reacción del ácido peryódico de Schiff (PAS)
Lípidos Sudán III, IV, B negro
Enzimas in vivo Sustrato + enzima = Producto coloreado
Glucógeno Carmín de Best o PAS
Métodos más modernos
Inmunocitoquímica
Basada en inmunoflourescencia de complejos antigeno-anticuerpo
Histoquímica con lectinas
Para observacion de hidratos de carbono
Radioautografia
Sustitución de una molécula determinada por su isótopo radioactivo
Hibridación in situ
Para ácidos nucleicos. Se marcan con isótopos radioactivos cadenas
monocatenarias que se unen a segmentos de las cadenas de
ácidos nucleicos.
Artefactos
Debido a la manipulación del tejido durante la técnica
histología no todos los cortes son perfectos. Una mala
manipulación durante la preparación puede llevar a
alteraciones que se llaman artefactos. Las cuales le
quitaran calidad al corte dificultando su interpretación.
• Encogimientos
• Precipitados
• Pliegues y arrugas
• Defectos de cuchilla
• Manejo poco cuidadoso
• Degeneración post-morte
Microscopio
Instrumento mas importante de la histología que mediante
un sistema óptico de lentes aumenta varias veces una
imagen
Utilidad depende de:
Poder de resolución (capacidad del microscopio de
separar dos puntos que están muy unidos. Es el mas
importante porque de este depende que se vean mejor los
DETALLES
Aumento: relación entre el tamaño de la imagen y el
objeto en valores lineales. No mejora los detalles con su
incremento
oMicroscopio óptico
oMicroscopio de polarización
oME de
transmisión
oMicroscopio electrónico (ME)
oME de barrido
Microscopios de luz invisible
oMicroscopio de luz UV
Microscopia óptica (luz visible)
Es el más utilizado
Trabaja en dos etapas
Primer aumento: OBJETIVO
Segundo aumento: LENTE DEL OCULAR
El haz de luz de la fuente se concentra en un punto por el CONDENSADOR
que lo dirige a la muestra que es atravesada y llega hasta el OBJETIVO (1era
etapa)
Generalmente son 4 objetivos
Pequeño aumento x 10
Mediano aumento x 25
Gran aumento x 40
Inmersión en aceite x100
Se multiplica por el aumento que brinda el LENTE (generalmente x 10)
ENTONCES
Microscopio de interferencia
Se envían dos haces de luz que se unen en la muestra, provocando un retraso
que permite medir el grosor del espécimen