UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

MARTIN

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA
SALUD

ESCUELA DE OBSTETRICIA

PROCESAMIENTO HISTOLOGICO

M.Sc. Keller Sánchez Dávila

PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA

 OBTENCIÓN DE MUESTRAS
 FIJACIÓN
 DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO
 INCLUSIÓN
 CORTE
 MONTAJE
TINCIÓN DE LOS CORTES
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS

Todas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de

materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias deben
ser procesadas adecuadamente para obtener
buenos cortes histológicos.
  OBTENCIÓN DE MUESTRAS

Se debe obtener toda la

información posible del
material a procesar.
  OBTENCIÓN DE MUESTRAS

En caso de ser necesario se debe realizar

un examen y descripción preliminar de los
materiales y su adecuación para un
correcto procesamiento.
 OBTENCIÓN DE MUESTRAS
  FIJACIÓN

Tratamiento del tejido con sustancias

químicas que no solo retardan las
alteraciones hísticas posteriores a la muerte,
sino que conservan la configuración normal
del tejido.
  FIJACIÓN
Fijador:

Sustancia que detiene en forma rápida los

procesos de autolisis ( ¿ … ? ) y que, al mismo
tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el
estado en que se encontraban en la vida.
  FIJACIÓN

Fijador:

Sustancia que detiene en forma rápida los

procesos de autolisis (proceso biológico por el
cual una célula se autodestruye) y que, al mismo
tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el
estado en que se encontraban en la vida.
  FIJACIÓN

TIPOS DE FIJADORES

Físicos:
 Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.
 Calor seco: Bacteriología.
 Calor húmedo: Microquímica, Zoología.
 Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los
procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja
de actuar los mismos se reanudan.
  FIJACIÓN

TIPOS DE FIJADORES

Químicos:
 Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .
 Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
 Alcoholes (precipitan proteínas).
 Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
 Picratos (precipitan proteínas).
  FIJACIÓN

TIPOS DE FIJADORES
Químicos:
 Aldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más
utilizados. Los tejidos son fijados por uniones
cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los
grupos amino.

La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza

normalmente al 10%, en una solución bufferada.
 FIJACIÓN
 FIJACIÓN

No debe olvidarse que:

Un defecto de fijación no
puede ser subsanado.

Es inútil hacer un estudio

histológico de un material
mal fijado.
  DESHIDRATACIÓN
Se obtiene por medio de un reactivo anhidro
pero ávido de agua:

Alcohol Etílico.
Alcohol Isopropílico.
Alcohol Butílico.
Acetona
  ACLARADO
Se debe embeber la pieza con una sustancia
miscible con el alcohol y la parafina:

Xileno.
Tolueno.
Benceno.
  INCLUSIÓN

La parafina penetra en los

vasos, en los espacios
intercelulares y también
en el interior de las
células embebiendo el
tejido y haciendo más
fácil la obtención de
cortes con el micrótomo.
 Procesador Automático

Procesador Automático de tejidos que sirve para la fijación,

deshidratación, purificación y finalmente la infiltración
mediante parafina…
Procesador Automático
 CONFECCIÓN DEL TACO

Obtención del bloque de parafina de forma

regular, para ser cortado con el micrótomo.

 CONFECCIÓN
DEL TACO
  CORTE

Micrótomo Rotativo.
Micrótomo de Deslizamiento.
Micrótomo de Congelación.
Crióstato.
Micrótomo Rotativo.

Los microtomos rotativos aportan a los microtomistas

hábiles la precisión, el control y la comodidad que
necesitan para obtener lo mejor de cada bloque
Micrótomo Rotativo.
Micrótomo Rotativo.
Crióstato

Consigue secciones a partir de material congelado y se

obtienen grosores de 8 a 40 µm, para observar con el
microscopio óptico…
Crióstato
 EXTENSIÓN

 Utilizar portaobjetos limpios y

preparados con el adhesivo
adecuado.

 Se realiza en agua tibia (38°C).

 Precaución: el preparado debe

quedar bien extendido y sin
pliegues.

 Rotular.
  EXTENSIÓN

 Luego de escurrir el exceso de

agua llevar a estufa (60 °C) no
más de dos horas.
  TINCIÓN DE LOS CORTES
Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:

 Colorantes que diferencian los componentes

básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y
eosina).

 Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos de la matriz extracelular.

 Sales metálicas que se precipitan en los

tejidos y forman depósitos de metales en ellos.
Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:
HEMATOXILINA
Actúa como un colorante
BÁSICO que se asocia y tiñe
componentes ÁCIDOS de la
célula como estructuras
aniónicas
(que posean fosfatos, sulfatos
y/o carboxilos ionizados)
- Heterocromatina y nucléolos
- ARN ribosomal,
- Matriz extracelular (por los
sulfatos de los GAGs).
Color: azul o violeta
EOSINA
Colorante ÁCIDO
(predomina densidad de
carga negativa), que se
asocia y colorea estructuras
catiónicas (componentes
BASICOS) del citoplasma y
matriz extracelular
- Filamentos citoplasmáticos.
- Componentes membranosos
intracelulares.
- Fibras extracelulares (por sus
aminoácidos básicos ionizados).
Color: rosado
 TINCIÓN DE LOS CORTES

La reacción de los grupos aniónicos con un

colorante básico se denomina BASOFILIA
(que tiene afinidad por lo básico)

La reacción de los grupos catiónicos con un

colorante ácido se denomina EOSINOFILIA
(que tiene afinidad por lo ácido)
Coloración con Coloración con Coloración
Hematoxilina Eosina Hematoxilina-Eosina
Basófilo
(azul)

Acidófilo
(rosado)
Gracias por su atención …