UNIDAD I: INTRODUCCIÓN

A LA HISTOLOGÍA

• Métodos y técnicas de
estudio en Histología.
OBJETIVO

Diferenciar con claridad las

técnicas, tinciones y
preparaciones histológicas.
OBJETO DE ESTUDIO DE LA
HISTOLOGÍA

• Células

• Tejidos

• Órganos
 ❖ MÉTODOS

➢ In vivo o vital: observación de tejidos

vivos.
• espermatograma.
• cultivo celular
➢ In vitro o supravital: observación de las
células o estructuras que han sido
removidas de su contexto biológico,
incluye la preparación de dichos tejidos.
• Hemograma.
PASOS EN LA PREPARACIÓN DE
TEJIDOS INANIMADOS.

1. Toma de muestra
2. Fijación
3. Deshidratación
4. Aclaramiento
5. Inclusión
6. Corte
7. Montaje
8. Coloración
 ❖ TECNICA DE COLORACIÓN
Los colorantes son sustancias que
usualmente resaltan estructuras en tejidos
biológicos .
Este se une de manera selectiva a los
componentes de los tejidos (ADN, proteínas,
lípidos, carbohidratos, etc).
Con frecuencia se usan combinaciones para
obtener un mejor contraste.
Cuando las estructuras se colorean con cierto
tinte, es que tienen afinidad por el mismo y
viceversa, tomando esa propiedad tintorial
específica.
 PROPIEDADES TINTORIALES DE
COMPONENTES TISULARES.
• Basofilia
• Acidofilia
• Sudanofilia
• Metacromasia
• Argirofilia
• Positividad al ácido periódico de
Schiff (PAS +)
 TECNICAS RESULTADO
Hematoxilina Azul: núcleos, zonas ácidas del citoplasma, matriz
y cartilaginosa.
Eosina Rosa: zonas básicas del citoplasma, fibras colágenas.
Tricrómica de Azul oscuro: núcleos. Azul claro: fibras colágenas y
Masson mucígeno. Rojo: músculo, queratina, citoplasma.
T. de Verhoeff Pardo: fibras elásticas.
Impregnación Negro: fibras reticulares. Aparato de Golgi.
argéntica (Ag)
Hematoxilina Negro: estrías transversales de miocitos, núcleos y
férrica eritrocitos.
Magenta: glucógeno. Secreción y estructuras que
PAS
contienen carbohidratos.
Rosa: eritrocitos y gránulos de eosinófilos. Púrpura:
Wrigth y gránulos de basófilos y núcleos de leucocitos. Azul:
Giemsa citoplasma de monocitos y linfocitos.

Sudán rojo Rojo: lípidos.

OTRAS TECNICAS EMPLEADAS
EN HISTOLOGÍA.
 ❖ TÉCNICAS CITOQUÍMICAS E
HISTOQUÍMICAS
Se hacen reaccionar químicamente los
compuestos intra o extracelular con los
colorantes, para identificarlos al formar
precipitados teñidos.

PAS
(Ácido peryódico de
Schiff)
❖ TÉCNICA DE CONGETACIÓN FRACTURA
(CRIOFRACTURA)

Se congelan las muestras y luego se

fracturan al vacío, exponiendo superficies
que no han sido procesadas
químicamente.
❖ TÉCNICA DE INMUNOHISTOQUÍMICA
Se utilizan anticuerpos marcados con
fluoresceína para determinar un sitio intra
o extracelular.
DIRECTA INDIRECTA
❖ TECNICA DE AUTORRADIOGRAFÍA
Se incorporan isótopos radiactivos en
macromoléculas, que luego se observan con
el uso de una película de emulsión
superpuesta.
 ❖ TÉCNICA DE CENTRIFUGACIÓN
FRACCIONADA
Permite la separación cuantitativa de los
componentes celulares.

A B C
 TIPOS DE MICROSCOPIOS

❖ ÓPTICOS
• de campo brillante
• de contraste de fase
• de fluorescencia
• de polarización
MICROSCOPIO DE
CAMPO BRILLANTE

Es el más utilizado por los

estudiantes e investigadores.
La muestra debe ser lo
suficientemente fina para
que la luz pase a través de
ella y coloreada para
producir contrastes entre sus
componentes.
 Código de colores de los objetivos

Es muy útil para identificar de forma rápida el

aumento proporcionado por el objetivo.
Cada color corresponde a un aumento
determinado como indica la siguiente tabla.
En los objetivos de inmersión existe
también un código de colores que
indica el medio de inmersión que
debe utilizarse. En este caso existen
solo cuatro opciones incluidas en la
siguiente imagen.
 PRINCIPALES UNIDADES DE
MEDIDA USADAS EN HISTOLOGÍA.

Unidad Representación y valor

Micrómetro 1 µm = 0,001 mm
Nanómetro 1 nm = 0,001 µm
 AMPLIFICACIÓN
Número de veces que aumenta el
tamaño real de la imagen del objeto. Se
calcula al multiplicar el valor de la lente
ocular y la lente objetivo que se emplea.
Ejemplos:
Ocular (10X), Objetivo (4X) = 40X aumenta 40 veces
Ocular (10X), Objetivo (10X) = 100X
Ocular (10X), Objetivo (40X) = 400X
Ocular (10X), Objetivo inmersión (100X) = 1000X
 RESOLUCIÓN
Capacidad de un sistema óptico de
distinguir por separado dos puntos
muy cercanos.
• Ojo humano: 0,1 mm
• M/O óptico común: 0,2 µm
• M/O óptico de luz ultravioleta: 0,1µm
• M/O confocal de laser: 0,14 - 0,2 nm
• M/E de barrido y transmisión: 0,2 nm
MICROSCOPIO DE
CAMPO OSCURO

Posee un condensador
especial que ilumina la
muestra con mucha
intensidad y de forma
oblícua. Solo la luz
refractada por las
estructuras de la
muestra penetra en el
objetivo.
MICROSCOPIO DE
CONTRASTE DE FASE

Aprovecha las
pequeñas diferencias
en el índice de
refracción que hay en
diferentes partes de
una muestra de células
o tejidos.
MICROSCOPIO DE
FLUORESCENCIA

Aprovecha la capacidad de
ciertas moléculas de
fluorescer (de reflejar luz
con mayor longitud de
onda que la recibida) bajo
la luz ultravioleta. Ejemplo:
la Vit. A y ciertos
neurotransmisores.
MICROSCOPIO DE
POLARIZACIÓN

Su funcionamiento se
basa en que las moléculas
muy bien ordenadas giran
el sentido de vibración
de la luz polarizada. Esta
capacidad se conoce
como birrefringencia.
MICROSCOPIOS
ELECTRÓNICOS

▪ de transmision
▪ de barrido
MICROSCOPIO
CONFOCAL

Es un microscopio óptico que

usa el laser como fuente de luz
y un sistema electrónico para
captar imágenes. Aumenta la
resolución y obtiene imágenes
de secciones ópticas ultrafinas,
donde el enfoque se realiza
sobre un único plano. Sus
imágenes son digitales.
MICROSCOPIO CONFOCAL: TIPOS

• Microscopio confocal láser de

barrido.
• Microscopio confocal de disco
giratorio (disco de Nipkow).
• Microscopios de matriz
programable.
MUCHAS GRACIAS