ESCUELA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS Y TECNOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLÓGICAS Y FORENSES

TEMA 6: INCLUSIONES CITOPLASMÁTICAS Y

PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

Prof. Legna Rojas

 MÉTODOS PARA ESTUDIAR LAS CÉLULAS

Una de las herramientas más importantes para estudiar las estructuras

celulares es el microscopio
El MICROSCOPIO ÓPTICO (MO)
TRAYECTO DE LA LUZ EN UN MICROSCOPIO ÓPTICO (MO)
 La Amplitud de la imagen se incrementa indefinidamente?

PODER DE RESOLUCIÓN
 LA RESOLUCIÓN O PODER DE RESOLUCIÓN

Es la capacidad para distinguir detalles finos en una imagen; se define como la

distancia mínima entre dos puntos a la cual ambos se pueden ver por separado y no
como un único punto borroso.
 EL PODER DE RESOLUCIÓN (PR)

La luz como onda

Distancia entre dos crestas o valles de una onda

 Abertura Numérica (AN)

η x sen μ

η = Índice de refracción: capacidad de desviar el rayo luminoso

sen μ= Resulta del diámetro del objetivo y la distancia focal

 CÓMO DISMINUIR EL PODER DE RESOLUCIÓN?

Microscopio óptico:
Longitud de onda constante (luz visible)

Aceite de inmersión: presenta el mismo η que el vidrio

Microscopia Electrónica: El haz

de electrones representan
longitudes de onda de 0,005 nm
Microscopio de Microscopio de Microscopio óptico de
campo claro campo oscuro contraste de fases
Microscopio de Fluorescencia
 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

• Para la obtención de preparados permanentes: Demostración de componentes y

estructura celular.

• Comprenden los siguientes pasos:

1. Obtención de la muestra
2. Fijación
3. Deshidratación y Aclaramiento
4. Inclusión
5. Corte
6. Aclaramiento y Rehidratación
7. Tinción
8. Montaje
 1.- OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

Debe procesarse lo más rápido posible. Animal anestesiado o inmediatamente

después de la muerte. Toma de Biopsias.
 2.- FIJACIÓN

• Conservar morfología y composición de los tejido. Química, Físicas (calor,

congelación)
 3.- DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO

• DESHIDRATACIÓN: Sustituyen al agua. Es necesario, ya que el medio de

inclusión no es miscible en agua
 3.- DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO

• ACLARAMIENTO: Líquido intermediario. Las muestras se vuelven translúcidas

 4.- INCLUSIÓN

• Proporciona soporte rígido para que se puedan hacer cortes delgados

• Uso de la Parafina: una mezcla de hidrocarburos
• Sólido a T ambiente y líquido a 60 °C
 5.- CORTE

• El tejido debe ser cortado de forma delgada y uniforme para permitir

el paso de luz a través de la muestra.
• Los bloques son seccionados con el MICROTOMO.
• Humberto Fernández Moran: Diseño del cuchillo de diamante para ME
 6.- ACLARAMIENTO Y REHIDRATACIÓN

• Desparafinación con xilol

• La rehidratación es fundamental para
la coloración
 7.- TINCIÓN

• Permite visualizar y diferenciar componentes celulares

• Los colorantes se comportan como ácidos o bases
• Uso frecuente de Hematoxilina-Eosina (HE)

ADN Y ARN (NÚCLEO)

Proteínas (Citoplasma)
 8.- MONTAJE

• Requiere una deshidratación

• Aplicación de medio de Montaje
 Inclusiones Citoplasmáticas

• Estructuras o materiales almacenados en el citoplasma

• No son orgánulos celulares o componentes principales, sino productos de su actividad
metabólica.

Núcleo Organelas Celulares Inclusiones Citosol o

(Núcleoplasma) (diferentes al núcleo) Citoplasmáticas hialoplasma

CITOPLASMA

PROTOPLASMA
 Oleoplastos o proteinoplastos
Tipos de Inclusiones Citoplasmáticas

• Presentes en células Animales y Vegetales

INCLUSIONES VEGETALES

• Se almacenan en vacuolas o plastidios

Cromoplastos
Leucoplastos
Rafidios y Drusas

Cloroplastos
 INCLUSIONES ANIMALES

• Hidratos de Carbono: En células hepáticas y musculares

• Lípidos: En tejido adiposo, células hepáticas

• Proteínas: En células de Sertoli o de Leidig
 PIGMENTOS

• Hemosiderina: Macrófagos del bazo, hígado y médula ósea

• Hematoidina y Bilirrubina: En hepatocitos

• Melanina
• Lipofucsina
GRACIAS!!!