HISTOTÉCNICA

Procedimiento más utilizado: observación de tejidos es a través del microscopio

de luz
Objetivo: procesar los tejidos para obtener muestras observables al microscopio
para estudio en el laboratorio o para diagnóstico. Estudiar la muestra histológica
(es el que a nosotros nos interesa)
PROCESO:
➢ Obtención e identificación de las muestras
• Biopsia (material vivo) toma parte del tejido, extracción de sangre.
• Autopsia (material muerto)

La muestra puede ser un corte (material denso, tejido) o pueden ser células individuales
(espermograma) o muestras líquidas (secreciones, sangre, saliva, papanicolaou).
En el caso de las muestras líquidas se denomina:
Frotis: extensión fina capa de tejido sobre una superficie de vidrio, se extiende y después se
le pone un colorante.

Procedimiento para la obtención de muestras para el estudio (varios pasos)

Examen macroscópico: extracción de la muestra y se baña en un líquido (mantiene
bien el tejido), al llegar al laboratorio hace la observación del tejido
macroscópicamente (color, textura, peso, etc.) después de eso puede ocurrir dos
cosas: el patólogo lo devuelve al frasco o continúa con esta serie de pasos.
PROCEDIMIENTO DE RUTINA (muestra densa)

➢ Fijación: inicia desde el momento en que el especialista extrae la muestra y la pone en un frasco, su objetivo es
evitar la autólisis (muerte) del tejido, también ayuda a:
• Endurecer el tejido
• Eliminar microorganismos
• Algunos aumentan afinidad por los colorantes, se tiñen mucho mejor.
• Proceso facilitado por agentes químicos (formalina-formaldehído o el alcohol); que estabilizan la formación de
puentes con moléculas vecinas
• Depende la muestra varía el tiempo en el fijador

➢ Deshidratación y aclaramiento: se usan baños de etanol con diferentes concentraciones de este, de menor a mayor.
Extracción de agua del tejido por medio de baños ascendentes de Etanol de 70%----100%.
El aclaramiento es quitar el Etanol y poner Xilol y el tejido se convierte en traslúcido.

➢ Inclusión: se acomoda la muestra en el centro y la bañamos con parafina caliente, este proceso se utiliza para
proteger la muestra y se pone en un recipiente que idealmente es de acero inoxidable.

➢ Corte (dos formas):

1. En un procedimiento de rutina: se utiliza micrótomo con parafina, para generar cortes con un espesor promedio
de 5-8 micrómetros.
2. En el microtomo también, pero por congelación, se genera un diagnóstico rápido (paciente en sala de cirugía), se
trabaja con nitrógeno líquido (se utiliza el criostato).

➢ Hidratación: se debe de sustituir la parafina por agua, se hace con baños en ethanol y finalmente agua, de menos a
más agua, generalmente el último baño es con agua caliente.
 ➢ Coloración o tinción: hay muchas tinciones, se rodea la muestra y actúa por cargas negativas y positivas causando
contrastes
El proceso se puede hacer “manual” o se puede poner un colorante en un recipiente y se sumergen las muestras

COLORANTES
Básico – basófilos Ácido – acidófilos
• Porta cargas positivas • Porta carga negativa
• Reacciona con grupos aniónicos o negativos • Reacciona con grupos catiónicos o positivos
• Ejemplos de colorantes: azul de metileno, azul de toluidina, • Ejemplos de colorantes: fucsina acido y eosina
hematoxilina • Tiñe colágeno
• Tiñen material genético (núcleos) • Rojos – rosados
• Morados – azules

Coloración de rutina: hematoxilina y eosina (H-E)

Útil para diferenciar citoplasma, núcleo y estructuras extracelulares proteicas
Corte de hígado
Células de citoplasma acidófilo Núcleos- basófilo

Núcleos con cara abierta

(expone su cromatina, laxa)
Núcleos picnóticos, células con
el núcleo condensado y sin
citoplasma casi, actividad
acelerada (protectoras del
hígado)
Espacios vasculares
Citoplasma- acidófilo
Basófilo
Acidófilo
Corte de piel

Basófilo
(núcleos)

➢ Montaje: varía dependiendo de la muestra, unas se guardan (como las de universidad) y otras se eliminan (como las
muestras de sangre). Inicialmente debe tener una deshidratación rápida. Se utiliza un medio de montaje (portaobjetos),
el objetivo es eliminar la difracción no deseada de luz (mejor calidad óptica) y a la vez proteger la muestra. Se utiliza
un “pegamento”, permount para sellar los bordes y poder aislar el medio interno de la biopsia con el medio externo,
hay más opciones más baratas como el brillo de uñas.
COLORACIONES ESPECIALES
Tricómico de Mallory: evidencia colágeno (turquesa) y tejido muscular
PASS (ácido de peryódico de Schiff):
(rojo)
evidencia carbohidratos

Retículo de Laidlow: evidencia tejido Tetraóxido de osmio: evidencia adipocitos

reticular

Plata: evidencia tejido nervioso

Verhoeff: evidencia fibras elásticas

Papanicolau: se utiliza para muestras en el cuello

Wrigth-Giemsa: se utiliza para la sangre uterino
 1. Obtención de la muestra 2. Fijación 3. Deshidratación

4. Aclaramiento 5. Inclusión 6. Corte Corte por congelación

7. Hidratar 8. Coloración o tinción

9. Montaje 10. Observación